Vetlek_Item Object ( => vetlek_cps_availability_alarms => vetlek_cps_customers => vetlek_cps_properties_to_groups => vetlek_cps_items => vetlek_cps__seq_items => vetlek_cps_images => vetlek_cps_images_to_items => vetlek_cps__seq_images => vetlek_cps_properties => vetlek_cps_properties_to_items => vetlek_cps_items_to_groups => /var/www/www-root/data/www /vetlek.ru/img/shop/items/ => /img/shop/items/ => 5129 => Serum protiv pastereloze, salmoneloze, escherichiosis, parainfluence-3 i infektivnog goveđeg rinotraheitisa, bočica 100 ml => = >

SASTAV I OBLIK OTPUŠTANJA
Serum protiv pastereloze, salmoneloze, escherichioza, parainfluence-3 i infektivnog rinotraheitisa goveda je biološki proizvod dobiven iz krvi volova hiperimuniziranih inaktiviranim sojevima uzročnika salmoneloze, escherichiosis i pastereloze, avirulentnim sojevima virusa parainfluence-3 i infektivnog rinotraheitisa. Po izgledu, to je svijetlo žuta tekućina s crvenkastom nijansom, tijekom skladištenja nastaje lagani talog koji se lako razbija kada se bočica protrese. Serum je pakiran u staklene bočice od tamnog stakla od 100 ml, hermetički zatvorene polimernim čepovima i omotane aluminijskim čepovima.

FARMAKOLOŠKA SVOJSTVA
Hiperimuni serum pridonosi stvaranju pasivne imunosti na uzročnike salmoneloze, pastereleze, E. coli, infektivnog rinotraheitisa i parainfluence-3 kod goveda, čiji je intenzitet 10 dana. Cjepiva se koriste za stvaranje intenzivnog aktivnog imuniteta životinja protiv infekcija. Mehanizam djelovanja seruma temelji se na vezanju i neutralizaciji patogenih antigena specifičnim protutijelima biološkog proizvoda. Hiperimuni serum je učinkovit u liječenju gore navedenih bolesti, posebno u ranim fazama infektivnog procesa i dobro se kombinira s lijekovima koji se koriste za simptomatsko liječenje(antimikrobna sredstva i probiotici).

INDIKACIJE
Dodijelite govedima za specifičnu prevenciju i liječenje salmoneloze, pastereloze, escherichiosis, parainfluence-3 i infektivnog rinotraheitisa.

DOZE I NAČIN PRIMJENE
Prije unošenja seruma potrebno je sterilizirati šprice i igle. Za svaku životinju koristi se posebna sterilna igla. Prije upotrebe, bočica se mora snažno protresti, a mjesto ubrizgavanja tretirati 70% etilnim alkoholom. Prije uvođenja, bočicu treba zagrijati u vodenoj kupelji na temperaturu od 36-38 ºS. IZ preventivna svrha serum se daje životinjama supkutano dva puta u razmaku od 7-10 dana: 20-30 ml za telad, 30-60 ml za odraslu stoku. IZ terapijska svrha Serum se primjenjuje intramuskularno ili intravenski početno stanje zarazna bolest: telad 40-60 ml, odrasla stoka 60-120 ml. Odsutnost terapeutski učinak već nakon injekcije ukazuje na drugačiju etiologiju bolesti, te je za razjašnjenje dijagnoze potrebno provesti dodatne laboratorijske pretrage.

NUSPOJAVE
U vrlo rijetkim slučajevima, uz povećanu individualnu osjetljivost životinja, moguće su alergijske reakcije.

KONTRAINDIKACIJE
Pri korištenju seruma kontraindikacije nisu identificirane.

Već je uzeta krv od 1000 životinja, serum je pakiran i besplatno podijeljen za gotovo 20.000 djece. Tako je pokazano da je moguća industrijska proizvodnja sirutke u klaonici uz poštivanje aseptičkih i sanitarnih propisa.

Tvrtka za seroterapiju ne daje dodatna jamstva - nema pravo obavljati obdukciju životinje donatora.

Tehnologija koja se koristi u našoj proizvodnji može se činiti manje stroga u smislu asepse od klasične metode. Ali ima veliku prednost u brzini, jer se serum u potpunosti proizvodi na dan vađenja krvi.

Ako su nas trenutne okolnosti nagnale na klaoničku proizvodnju sirutke, jasno je da je to privremena mjera, jer hematogen i terapeutski serum može se izraditi samo u uvjetima specijaliziranog instituta.

Odabir životinja. U Lyonu dr. Guieux, glavni veterinar klaonice, i dr. Fontenay, veterinarski inspektor, sami odabiru donatore među stokom namijenjenom opskrbi našeg grada mesom. Odabrana životinja se žigosa na desnom ramenu kako bi se olakšala daljnja kontrola. Nakon klanja, organi životinja se pažljivo provjeravaju. Poznato je da je obdukcija najsigurnija metoda za otkrivanje tuberkuloze.

Naknadni zahvati će pokazati da serum bolesne životinje nikada nije konzumiran.

Uzorkovanje krvi životinja. U prostoriji za prikupljanje krvi, bik davatelj je sigurno držan automatskim jarmom.

Veterinar dezinficira kožu jodom u visini vrata životinje i na tom mjestu napravi rez skalpelom. jugularna vena. Venska punkcija se izvodi troakarom steriliziranim dugotrajnim kuhanjem. Čim se pojavi krv, autoklavirano gumeno crijevo se pričvrsti na troakar kako bi se izravno i aseptično povezalo s defibrinatorom.

Tehnologija defibrinacije i metoda sterilizacije defibrinatora opisani su u nastavku.

Od svake životinje dobije se 8-10 litara krvi koja se važe na vagi koja se nalazi ispod aparata. Radi lakšeg obavljanja sanitarne kontrole svaki defibrinator ima naljepnicu s podacima o životinji davatelju.

Treba napomenuti da se vađenje krvi obavlja aseptično zbog zatvorenog kruga svih komponenti: troakara, gumene cijevi i defibrinatora koji su prethodno sterilizirani.

Naljepnica s datumom uzimanja krvi prati primljenu krv od trenutka punkcije vene do pretvaranja u serum i čuvanja u hladnjačama.

Defibrinacija krvi. U većini ustanova za seroterapiju krv ulivena u staklene posude odvaja serum pod pritiskom tereta. U tim uvjetima, krv, prvo dobivena od goveda, sadrži malo seruma (oko 10%). Zato centar za seroterapiju u Lyonu koristi posebnu tehnologiju koja daje 50% seruma, i to u kraćem vremenu.

Dr. Merrier uspio je razviti ovu metodu dijelom nakon otkrića koja je napravio na Kraljevskom institutu u Rotterdamu i na Institutu za seroterapiju u Milanu.

Čim krv stigne u te institute, ona se defibrinira u sterilnim aparatima nalik na bućkalice za maslac. Unutar 5 minuta krv se miješa u posudi zaštićenoj od zraka. Potrebno je strogo poštivati ​​vrijeme defibrinacije: s njegovim nedostatkom može doći do zgrušavanja, a s viškom hemolize (zbog pucanja crvenih krvnih stanica). Potrebno je koristiti laboratorijski sat koji omogućuje označavanje točno 15 minuta defibrinacije.

Na vrhu Sl. 4 vidljivo je da je broj uzorkovanja krvi dosegao 1000, što je evidentirano na amblemu Centra.

centrifugiranje. Odmah nakon defibrinacije uređaji se prenose u laboratorij koji se nalazi nekoliko metara od prostorije za vađenje krvi. Sadržaj svakog defibrinatora posebno se obrađuje kako bi se mogao ukloniti serum bolesne životinje.

Krv koja se ne zgrušava nakon defibrinacije prolazi kroz Alfa Laval separator (separator mlijeka koji smo prilagodili za proizvodnju sirutke). Pod djelovanjem centrifugalne sile krv se dijeli na jednake dijelove: crvena sadrži crvene kuglice, a prozirna čini serum (fibrin ostaje na oštricama defibrinatora).

Od jedne životinje dobije se 8-10 litara krvi ili oko 4-5 litara seruma koji se ulijeva u Pyrex bocu steriliziranu na 180°C. Na bočicu je pričvršćena naljepnica defibrinatora, a pod istim brojem popunjava se kartica za sanitarnu kontrolu.

U serum se dodaje poseban antiseptik, proračunat tako da bude dovoljno aktivan, a da ne naruši prozirnost i okus seruma. U 1 litru seruma dodaje se i 100 ml otopine koja sadrži 1:1000 formalin i 1:5000 Syunuxol. (Centrifuga se između priprema temeljito dezinficira antiseptikom.)

U principu, crvenu krvnu frakciju treba vraćati mesnicama za izradu crnog pudinga, ali najčešće ostaje neiskorištena, pa se od nje može napraviti sirup po dolje opisanoj tehnologiji.

Posebni slučajevi spravljanja krvnog sirupa. Sirup ima dvije prednosti: omogućuje iskorištavanje crvenog dijela krvi koji ostane nakon uzimanja seruma i ugodnog je okusa koji djeca vole.

Zbog nedostatka glicerina teško je pripremiti sirup za dugotrajno čuvanje, ali je moguće napraviti vrlo aktivan pripravak u vodi i davati ga djeci 2-3 žlice dnevno. U crveni dio krvi dodaje se 20% vode za piće, a sirup se čuva u ledenjacima dok se provodi sanitarna kontrola. Zatim dodajte jednaki dio od 100% šećerni sirup(šećer se može dobiti iz kartona timova kojima je sirup namijenjen).

U sirup se dodaje ekstrakt limuna ili naranče kako bi se neutralizirao okus krvi, te se puni u boce od 250 ml.

Tindalizacija seruma. Neposredno nakon centrifugiranja, tj. manje od jednog sata nakon uzimanja uzorka krvi, serum se percipira na 56°C jedan sat. Da biste to učinili, spušta se u vodenu kupelj s automatski održavanom temperaturom. Tindalizacija na ovoj temperaturi (kada serum koagulira na višim temperaturama) nužna je za djelomičnu sterilizaciju seruma, iako je brzina njegove pripreme sama po sebi jamstvo asepse.

Treba napomenuti da svaka bočica od pet litara ima originalnu naljepnicu defibrinatora, tako da numeracija seruma odgovara onoj životinja donora.

Kontrolna datoteka. Kartica vam omogućuje da u svakom trenutku provjerite podrijetlo životinje donora, faze pripreme sirutke, datum punjenja, kao i distribuciju sirutke.

Sanitarna kontrola. Dok se posude čuvaju u hladnjaku, veterinarski inspektori obavljaju sanitarnu kontrolu životinja donora. Nakon njihova klanja provodi se temeljita obdukcija kako bi se otkrili i najmanji simptomi tuberkuloze. Ako se otkrije bolest, odgovarajući serum se lako može povući. Poznato je da se krv svake životinje obrađuje zasebno, a serum nalazi u zasebnim, numeriranim bočicama.

Centar za seroterapiju Javnog odbora za dječju higijenu u Lyonskim klaonicama

Kontrolni broj...

Goveđi serum u litrama

Gornja kartica i oznaka sprječavaju zabunu.

U Lyonu su sanitarne mjere posebno stroge jer isti veterinari biraju životinje, vade krv i provjeravaju meso.

Sterilizacija opreme. Životinjski serumi izvrsna su tla za razmnožavanje mikroba i mogu se samo djelomično sterilizirati. Na temperaturama iznad 56° zgrušavaju se i zamućuju ako se doda jak antiseptik. Stoga je u svim operacijama proizvodnje sirutke potrebna maksimalna sterilnost, oprema mora biti osigurana prije uporabe.

Individualni defibrinatori se steriliziraju na sljedeći način: noć prije vađenja krvi se pune antiseptička otopina, a nekoliko sati prije uzorkovanja krvi oslobađaju se od antiseptika pomoću slavine koja se nalazi u donjem dijelu aparata. Serumske centrifuge također se tretiraju antiseptikom, uključujući između obrade sadržaja svakog defibrinatora.

U električnoj pećnici na temperaturi od 180 °C sterilizira se sve stakleno posuđe, uključujući posude od pet litara za čuvanje sirutke.

Bočice kapaciteta 250 ml za serum također se steriliziraju na temperaturi od 180°C. Radi pojednostavljenja rada, jela su u kutijama koje se koriste za punjenje i distribuciju javnosti.

Govedi serum za kulture stanica - 100 ml., 200 ml., 400 ml., tekući, sterilan.

Sakupljeno iz srca krava do 3 godine. Slamnato žuta do crvenkasto narančasta bistra tekućina.

Tijekom skladištenja dopuštena je blaga opalescencija i blagi flokulentni sediment koji se mućkanjem raspada. Prozirnost (jedinica optičke gustoće): ne više od 0,45; pH: 7,4 do 8,2; bjelančevine, (g/l): od 60,0 do 80,0; hemoglobin, (g/l): ne više od 0,5; sterilan; ne sadrži mikoplazme i viruse; specifična aktivnost - za stanične kulture tipa LEC, LEC ili diploidne stanice mišićno-koštanog tkiva ljudskog embrija: stvaranje monosloja 3-4 dana, indeks proliferacije nakon 5. prolaza nije manji od 2,0; skladištenje i transport: na tamnom mjestu pri temperaturama od -10°C do -20°C.

Najbolje prije datuma:

2 godine na -20°C, 1 godina na +2°C do +8°C. Prijevoz: smrznuto.
Prilikom odmrzavanja goveđeg seruma za stanične kulture može se pojaviti fibrin koji ne utječe na kvalitetu seruma.
Prilikom transporta seruma 1-2 tjedna na +4 °C moguć je djelomičan gubitak svojstava rasta, kao i zamućenje seruma uz pojavu sitnog taloga i masnog prstena u gornjem dijelu bočice. Nakon što dobijete takav serum, treba ga odmah zamrznuti. U ovom slučaju, rok trajanja seruma smanjuje se na 1,5 godine.
Ukoliko je nemoguće isporučiti kupcu (ili kupac ne želi platiti dostavu) smrznutu sirutku, kupac mora dostaviti jamstveno pismo u kojem stoji da nema potraživanja prema proizvođaču za eventualnu promjenu izgled i kvalitetu seruma, što ukazuje na željenu metodu isporuke seruma.

Različiti nazivi za goveđi serum: goveđi serum, goveđi serum, goveđi serum, goveđi serum.

Cijena: na zahtjev

Artikal možete dodati u svoju košaricu navođenjem količine

Vlasnici patenta RU 2460786:

Izum se odnosi na biotehnologiju. Metoda dobivanja krvnog seruma uključuje dvije faze. U prvoj fazi dobiva se nativni krvni serum odraslih goveda. Istodobno, krv se uzima aseptično samo iz srca bikova u polikarbonatne boce, u koje se prvo ulije 5% otopina natrijevog klorida u volumenu od 100-200 ml. Boce se pune krvlju oko polovice volumena i prenose u hladnjak s temperaturom od +1-+2°C, postavljene pod kutom od 35° 72 sata. Potom se sirutka usisava i predčisti EKS filtrima na temperaturi od +2-+6°C. Nakon toga se polietilenski kanistri pune sirutkom i drže na temperaturi od -(15-20)°C najmanje tjedan dana. Druga faza sastoji se u uklanjanju tvari koje inhibiraju rast stanica iz nativnog krvnog seruma bikova metodom jednokratnog zamrzavanja i odmrzavanja. Sakupljaju se gornji svijetli slojevi seruma, počevši od vrha do sučelja između njih i hemoliziranih slojeva, a preliminarno pročišćavanje se provodi kroz EKS dubinske filtre. Zatim se provodi sterilizacijska filtracija kroz membranske filtere na temperaturi od +2-+6°C. Metodom je moguće dobiti serum pogodan za uzgoj životinjskih i ljudskih stanica, uključujući hibridome, povećati prinos seruma prema volumenu uzete krvi i poboljšati njegovu kvalitetu. 6 tab., 5 pr.

Izum se odnosi na biotehnologiju i može se koristiti u uzgoju životinjskih, ljudskih i hibridomskih staničnih linija.

U poznatim literarnim izvorima tehnologija dobivanja ovog krvnog seruma opisana je vrlo površno (Metode stanične kulture za biokemičare / R.A. Adams: Per. s engleskog. - M.: Mir. - 1983. - 264 str.; životinjski kavez u kulturi / Ed. prof. L. P. Dyakonova. - M.: Izdavačka kuća "Sputnik +". - 2009. - 656 str.), a izvor na Internetu (http:wwwleitran.ru/page.php?al=sivorotka) uopće ne sadrži nikakve informacije o njegovoj proizvodnji.

Poznata je metoda dobivanja krvnog seruma odraslih goveda, koju smo uzeli kao blisku analogiju: uzimanjem krvi životinjama iz srca ili jugularne vene, taloženjem, prikupljanjem i sterilizirajućom filtracijom konačnog produkta, opisana u priručniku izd. od B.I. Antonova ( Laboratorijska istraživanja u veterinarskoj medicini: Priručnik / B.I.Antonov, V.Borisova, P.M.Volkov i drugi, ur. B.I.Antonova. - M.: Agropromizdat. - 1986. - 352 str.). Ali ovaj analog ima značajne nedostatke:

1. Krv se uzima i kravama i bikovima (poznato je da se krvni serum životinja značajno razlikuje od njihovog spola);

2. Uzorkovanje krvi provodi se na dva načina: iz srca bez asepse i iz jugularne vene uz asepsu, ali trajanje punjenja boca od 10 litara do oznake od 5 litara je 6-10 minuta ili više;

3. Krvlju se pune samo staklene boce koje se često lome i potencijalni su izvor ozljeda zaposlenika koji s njima rade, a uz to su i skupe;

4. Sirutkini talog se održava u hladnjaku 24-48 sati na temperaturi od +6-+10°C, a pri tom visoka temperatura postoji brza reprodukcija vulgarne mikroflore, što dovodi do smanjenja kvalitete konačnog proizvoda;

5. Izlaz seruma je neznatan (20-25% volumena uzete krvi) zbog upotrebe fiziološke otopine NaCl za vlaženje stijenki bočica i uzimanje krvi iz jugularne vene;

6. Sakupljena sirutka se zagrijava do +30-+37°C radi prethodnog pročišćavanja kroz EKS dubinske filtere, a zatim sterilizacijske filtracije kroz membranske milipore filtere. Uzimajući u obzir da je filtracija sirutke dug proces, na visokoj temperaturi dolazi do brzog nakupljanja mikroflore u njoj, što negativno utječe na njezinu kvalitetu;

7. Zbog taloženja bjelančevina i pouzdanije sterilizacije preporuča se 2-3 puta filtracija sirutke, što povećava vrijeme pripreme konačnog proizvoda i troškove potrošnog materijala;

8. Serum dobiven ovom tehnologijom ne odgovara nizu fizikalno-kemijskih parametara i neprikladan je za uzgoj stanica životinjskog podrijetla.

Još jedan analog, ali samo za karakteristike kvalitete, vidimo fetalni krvni serum fetusa krava, koji se još uvijek smatra najboljim biološkim dodatkom u hranjivim medijima za uzgoj životinjskih i ljudskih staničnih kultura (TU FS 42-7BC-85), odobren od strane Ministarstva zdravstva SSSR-a 4. travnja 1985. .

Za jasniji prikaz svrhe izuma, u tablici 1. prikazane su koncentracije inhibitora rasta stanica i drugih kvalitativnih pokazatelja u prirodnom krvnom serumu odraslih goveda prema TU 49.24 b-82 i u nativnom krvnom serumu fetalnih krava prema TU 49.24 b-82. TU FS 42-7BC-85, odobren od strane Ministarstva zdravstva SSSR-a 4. travnja 1985.

Najbliži u tehničkom rješenju je metoda za dobivanje krvnog seruma odraslih goveda, koja je opisana u RF patentu br. 1813783 "Metoda dobivanja životinjskog krvnog seruma za uzgoj stanica životinjskog tkiva" od 5. ožujka 1994., koji smo preuzeli kao prototip ovog izuma.

Tehnološki postupak prema ovom patentu uključuje zamrzavanje nativnih seruma životinjske krvi na -(15-20)°C tijekom 24-48 sati, nakon čega slijedi njihovo odmrzavanje na sobnoj temperaturi, prikupljanje svijetlih slojeva seruma, počevši od vrha, do sučelja s hemoliziranim frakcijama, sterilizacijskom filtracijom i kontrolom kvalitete dobivenih pripravaka.

Cilj izuma je značajno povećati prinos seruma prema volumenu uzete krvi, poboljšati njegovu kvalitetu, kao i dobiti krvni serum odraslih goveda pogodan za uzgoj životinjskih i ljudskih stanica, uključujući hibridome, uklanjanjem pojedinih inhibitora iz nativnih. krvni serum rasta stanica bikova.

Problem rješavamo činjenicom da su u metodi dobivanja krvnog seruma od odraslih goveda izvršene značajne, izravno suprotne postojećim literarnim izvorima, promjene u tehnologiji njegove proizvodnje.

Za razliku od ovog izuma, u našem predloženom projektu, postotak komponenti uklonjenih tijekom odmrzavanja krvnog seruma bikova smanjen je na 5-10%, osim toga, krvni serum je prethodno filtriran na +2-+6°C kroz EKS filtere, a zatim kroz sterilizacijske membranske filtere bilo koje pouzdane tvrtke, na primjer: Millipore Intertec USA, njegova podružnica u Irskoj ili Vladisart Rusija. Ova metoda dobivanja krvnog seruma odraslih goveda za uzgoj stanica životinjskog podrijetla uključuje dvije faze:

Prva faza sastoji se od temeljne promjene u proizvodnji nativnog krvnog seruma odraslih goveda, što je vrlo značajan trenutak u promjeni tehnološki proces: uzorkovanje krvi vrši se samo od bikova i samo iz srca aseptično posebnim sustavima u staklene ili polikarbonatne boce zapremine 10-20 litara u koje se prethodno ulije 5% otopina natrijevog klorida u volumenu 100-200 ml. . Boce se napune krvlju, otprilike do polovine volumena, i ostave da odstoje okomiti položaj 2-3 sata u klaonici, a zatim prebačen u hladnjak s temperaturom od +1-+2°C i postavljen pod kutom od 35° 72 sata, nakon čega se taloženi serum skuplja posebnim sustavom ( njegov učinak na volumen uzete krvi prelazi 40%), njegovo prethodno čišćenje EKS filterima na temperaturi od +2-+6°S, koja se puni u polietilenske kanistere od 20 litara i čuva na temperaturi od -(15- 20)°S najmanje tjedan dana.

2. faza sastoji se u uklanjanju tvari koje inhibiraju rast stanica (rezidualni hemoglobin, ukupni lipidi, γ-globulini itd.) iz nativnog krvnog seruma bikova metodom smrzavanja-odmrzavanja, prikupljanje gornjih svijetlih slojeva seruma, počevši od vrha, do njegove granice s hemoliziranim frakcijama, preliminarno čišćenje kroz EKS dubinske filtere, a potom sterilizacijska filtracija kroz membranske filtere s pakiranjem od 400-450 ml u bočice od 500 ml, kontrola sterilnosti i biološke aktivnosti.

Bitna razlika u načinu dobivanja goveđeg krvnog seruma je u tome što koristimo tehnologiju njegove proizvodnje koja je izravno suprotna postojećim metodama, a obrazloženje koje je navedeno u nastavku u nizu primjera.

Primjer 1. Uzimanje krvi bikova i odvajanje seruma.

Uzimanje krvi od bikova, radi dobivanja seruma, obavljali su uz poštivanje asepse dva aseptične metode: iz vratne vene i srca u staklene boce od 10 litara ili polikarbonatne boce od 20 litara, u koje se ulije 100-200 ml 5% otopine natrijevog klorida.

Utvrdili smo da je vrijeme punjenja boca od 10 litara do oznake od 5 litara kod uzimanja krvi iz srca bikova bilo 1-2 minute, a kod uzimanja iz jugularne vene - 8-10 minuta.

Nakon vađenja krvi u bočice su ostavljene da stoje uspravno na sobnoj temperaturi 2 sata, a potom stavljene u hladnjak na rešetke pod kutom od 35° 72 sata na temperaturi od +1-+2°C. Položaj boca s krvlju pod kutom od 35 ° doprinosi boljem povlačenju ugrušaka, a temperatura serumskog mulja od +1-+2 ° C sprječava reprodukciju mikroflore koja je slučajno ušla u krv.

Primjer 2. Usporedna studija separacije seruma bikova, ovisno o mjestu uzorkovanja krvi i postotak natrijev klorid u otopini.

Rezultati ovog eksperimenta prikazani su u tablici 2. Postoje tri opcije u eksperimentu. U svakoj verziji 20 boca s volumenom krvi od 4,65 do 5,10 litara. U varijanti 1 krv je uzeta iz jugularne vene u boce od 10 litara koje su sadržavale 100 ml 1% otopine NaCl. U varijanti 2 krv je vađena iz srca u bočice od 100 ml s 1% otopinom NaCl, a u varijanti 3 krv je također vađena iz srca, ali je u bočicu uliveno 100 ml 5% otopine NaCl.

Kako proizlazi iz tablice 2., prinos seruma iz krvi uzete iz srca bikova u bocu s 1% otopinom NaCl značajno je veći nego iz krvi uzete iz jugularne vene. Korištenje hipertonične 5% otopine NaCl, ulivene u boce za vlaženje njihovih stijenki, pridonosi još većem oslobađanju seruma iz krvi uzete iz srca bikova. Visoki prinos sirutke prema predloženoj metodi javlja se iu uvjetima proizvodnje. Tako je, primjerice, uzeto 150 litara krvi u 30 boca, a nakon taloženja isisano je 63 litre seruma ili 42% volumena krvi.

Primjer 3. Kvalitativni pokazatelji krvnog seruma bikova i krava.

Istraživanje krvnog seruma bikova i krava provedeno je prema sljedećim kvalitativnim pokazateljima: optička gustoća, sadržaj ukupnih proteina i rezidualnog hemoglobina, stimulirajuće djelovanje na presađene stanične kulture. Bikovima od 300-400 kg i kravama od 400-450 kg uzimana je krv iz srca u boce od 10 litara sa 100 ml 5% otopine NaCl do oznake od 5 litara, serum je branin 72 sati u hladnjaku na temperaturi +1-+2°C, nakon čega su uzeti uzorci seruma koji su zamrznuti, odmrznuti i sterilizirani kroz membranske filtere.

Transparentnost (optička gustoća), ukupni protein i rezidualni hemoglobin krvnog seruma pojedinih životinja određeni su neposredno nakon uzimanja uzoraka seruma, kao i nakon centrifugiranja na 1500 okretaja u minuti tijekom 10 minuta. Ukupni protein određen je biuretnom reakcijom, a rezidualni hemoglobin određen je metodom hemiglobin cijanida nakon centrifugiranja seruma. Aktivnost krvnog seruma koja stimulira rast procijenjena je u kulturama stanica SPEV i MDBK indeksom proliferacije nakon 72 sata rasta pri gustoći nasađivanja od 40 000 stanica/cm 2 i višestrukim porastom stanične populacije nakon 5 dana rasta pri gustoća sjetve od 20 000 stanica/cm 2 . Stanice su uzgajane u Carrelovim tikvicama s inokulumom od 8 cm2 u Eagleovom MEM mediju s glutaminom, kanamicinom i 10% serumom.

Krv je uzeta od 40 bikova i 40 krava. Rezultati ovih pokusa prikazani su u tablici 3. Nakon 72-satnog mulja, optička gustoća krvnog seruma krava premašila je optičku gustoću bikova za više od 2 puta. Gotovo isti omjer zabilježen je i kod varijabilnosti ovog pokazatelja. Nakon centrifugiranja optička gustoća krvnog seruma krava se smanjila, ali je ostala nešto viša nego kod bikova. U krvnom serumu krava zabilježene su veće koncentracije ukupnih proteina i rezidualnog hemoglobina u odnosu na ove pokazatelje u krvnom serumu bikova. Koeficijent varijacije za rezidualni hemoglobin u krvnom serumu krava prelazi 54%. Visoka optička gustoća i koncentracija rezidualnog hemoglobina u krvnom serumu krava, očito, povezani su s nižom otpornošću na uništavanje njihovih eritrocita. Aktivnost stimulacije rasta krvnog seruma krava (u smislu indeksa proliferacije i višestrukosti porasta stanične populacije) na kulturama stanica SPEV i MDBK inferiorna je od biološke aktivnosti dobivene iz krvi bikova.

Primjer 4. Prednost uzimanja krvi iz srca bikova za dobivanje seruma namijenjenog kulturi stanica.

Svrha istraživanja bila je utvrditi značajke biokemijskog sastava seruma dobivenih iz krvi uzete iz jugularne vene, karotidne arterije i srca bikova, kao i procijeniti njihova svojstva rasta na presađenim staničnim kulturama. Za dobivanje seruma od 18 teladi težine 300-400 kg aseptično je uzeto 300 ml krvi iz jugularne vene, karotidne arterije i srca u bočice od 500 ml s 5 ml 5% otopine NaCl (od 2 bočice po životinji). i stavili ih pod kutom od 35 ° u hladnjak s temperaturom od +2 ° C na 48 sati. Nataloženi serum iz svakog para bočica odvojeno je sakupljen, centrifugiran i zamrznut na -15°C, nakon uzimanja uzoraka za fizikalna i biokemijska ispitivanja. Prije sterilizacijske filtracije kroz membranske filtre, krvni serumi dobiveni iz srca, karotidne arterije i jugularne vene odvojeno su pomiješani u 200 ml.

Određivanje pH i optičke gustoće, kontrola sterilnosti, kao i procjena svojstava stimulacije rasta krvnog seruma provedena je konvencionalnim metodama. Ukupni protein je određen biuretskom reakcijom, rezidualni hemoglobin - hemiglobin cijanidnom metodom, kolesterol - reagensima iz Konelaba (Finska), osim toga, niskomolekularne dušične tvari (kreatinin, urea i mokraćna kiselina), pigmenti (izravni i ukupni bilirubin) , enzimi (LDH, CPK, glutamin transferaza, amilaza, AST, alkalna fosfataza, ALT), anorganske tvari (kalcij, željezo, fosfor), glukoza pomoću Rendox reagensa na uređaju Daytona Rendox (Velika Britanija) i elektroforeza proteina sirutke na celulozno-acetatnim filterima tipa Vladisart - FMAC-0,45-(80 100) -11106 s veličinom pora 0,45 μm. Digitalni materijal podvrgnut je računalnoj statičkoj obradi uz izračun aritmetičke sredine (M), pogreške aritmetičke sredine (m), standardne devijacije (σ), koeficijenta varijacije (CV) i značajnosti razlika (P) rezultata pomoću Microsoft Excel. Rezultati navedenih istraživanja krvnih seruma bikova prikazani su u tablici 4.

Za procjenu svojstava krvnih seruma bikova koji potiču rast, korištene su transplantabilne linije bubrega SPEV (embrij svinje) i MDBK (embrij krave) kao stanični modeli. Sterilni krvni serumi iz jugularne vene, karotidne arterije i srca bikova dodani su u koncentraciji od 10% u Eagleov MEM medij s glutaminom i kanamicinom. Za izračunavanje indeksa proliferacije (PI), stanična suspenzija je nasađena u dozama od 2 ml s površinom inokulacije od 3 cm 2 pri gustoći nasađivanja od 42 000 stanica/cm 2 . Nakon 72 sata rasta, izbrojan je broj stanica u rezultirajućem monosloju. Provedeno je 8 pokusa sa svakom kulturom, u pokusima je broj stanica izbrojan u Goryaevljevoj komori 4 puta. Rezultati proliferativne aktivnosti stanica SPEV i MDBK na podlogama s krvnim serumima bikova iz različitih dijelova cirkulacijskog sustava prikazani su u tablici 5.

Proliferacija staničnih kultura uzgojenih na podlozi sa serumima dobivenim iz krvi iz karotidne arterije i jugularne vene bila je manja od proliferacije stanica uzgojenih na podlozi s krvnim serumom iz srca, što je nedvojbeno posljedica njihova različitog biokemijskog sastava.

Primjer 5. Uklanjanje tvari koje inhibiraju rast stanica iz nativnog krvnog seruma teladi metodom zamrzavanja-odmrzavanja. Pojedini uzorci seruma imaju različit biokemijski sastav, ovisno o nizu čimbenika: hranidbi i držanju životinja, godišnjem dobu, pasmini, spolu itd. Zamrzavanjem i odmrzavanjem moguće je dobiti krvni serum za stanične kulture predvidljivog biokemijskog sastava.

Od sve raznolikosti dobivanja sirutke metodom zamrzavanja - odmrzavanja, preferirali smo opciju koja uključuje: jedno zamrzavanje nativnih krvnih seruma bikova na - (15-20) ° C najmanje 7 dana, nakon čega slijedi njihovo odmrzavanje na + 20- + 40 ° C, prikupljanje svijetlih slojeva seruma, počevši od vrha, do sučelja između njih s hemoliziranim slojevima, preliminarna, a zatim sterilizirajuća filtracija i kontrola kvalitete dobivenih pripravaka.

Glavni fizikalno-kemijski parametri goveđeg krvnog seruma niži su u usporedbi s nativnim serumom, i to: koncentracija proteina - 1,19-1,94; slobodni hemoglobin - u 1,32-2,94; ukupni lipidi - 1,56-2,64 puta, uključujući ukupni kolesterol - 1,37-2,53 puta.

Prema rezultatima elektroforeze serumskih proteina u poliakrilamidnom gelu, u krvnim serumima dobivenim smrzavanjem-odmrzavanjem, u usporedbi s nativnim krvnim serumima, povećava se relativna koncentracija albumina i smanjuje koncentracija γ-globulina, dok se koncentracija α - i β-globulina ostaje praktički nepromijenjen.

Pokazatelji sastava krvnog seruma goveda, dobivenog smrzavanjem - odmrzavanjem, prikazani su u tablici 6.