Vetlek_Item Object ( => vetlek_cps_availability_alarms => vetlek_cps_customers => vetlek_cps_properties_to_groups => vetlek_cps_items => vetlek_cps__seq_items => vetlek_cps_images => vetlek_cps_images_to_items => vetlek_cps__seq_images => vetlek_cps_properties => vetlek_cps_properties_to_items => vetlek_cps_items_to_groups => /var/www/www-root/data/www /vetlek.ru/img/shop/items/ => /img/shop/items/ => 5129 => Pastörelloz, salmonelloz, escherichiosis, parainfluenza-3 ve bulaşıcı sığır rinotracheitisine karşı serum, flakon 100 ml => = >

BİLEŞİM VE YAYIN ŞEKLİ
Sığırların pastörelloz, salmonelloz, escherichiosis, parainfluenza-3 ve enfeksiyöz rhinotracheitis'e karşı serum, salmonelloz, escherichiosis ve pastörelloz patojenlerinin inaktive edilmiş suşları, parainfluenza-3 virüslerinin avirülent suşları ve enfeksiyöz rhinotracheitis ile hiperimmunize edilmiş öküzlerin kanından elde edilen biyolojik bir üründür. Görünüşte, kırmızımsı bir renk tonu ile açık sarı bir sıvıdır; saklama sırasında, flakon çalkalandığında kolayca kırılan hafif bir çökelti oluşur. Serum, koyu renkli camdan yapılmış, polimer kapaklarla hava geçirmez şekilde kapatılmış ve alüminyum kapaklarda yuvarlanmış 100 ml'lik cam şişelerde paketlenmiştir.

FARMAKOLOJİK ÖZELLİKLERİ
Hiperimmün serum, yoğunluğu 10 gün olan sığırlarda salmonelloz, pastörelloz, E. coli, enfeksiyöz rinotracheitis ve parainfluenza-3 patojenlerine karşı pasif bağışıklık oluşumuna katkıda bulunur. Hayvanlarda enfeksiyonlara karşı yoğun aktif bağışıklık oluşturmak için aşılar kullanılmaktadır. Serumun etki mekanizması, biyolojik ürünün spesifik antikorları tarafından patojenik antijenlerin bağlanmasına ve nötrleştirilmesine dayanır. Hiperimmün serum, özellikle bulaşıcı sürecin erken aşamalarında yukarıdaki hastalıkların tedavisi için etkilidir ve kullanılan ilaçlarla iyi bir şekilde birleştirilir. semptomatik tedavi(antimikrobiyaller ve probiyotikler).

BELİRTEÇLER
Salmonelloz, pastörelloz, escherichiosis, parainfluenza-3 ve enfeksiyöz rinotracheitisin spesifik önlenmesi ve tedavisi için sığırlara atanır.

UYGULAMA DOZLARI VE YÖNTEMİ
Serum uygulanmadan önce şırıngaları ve iğneleri sterilize etmek gerekir. Her hayvan için ayrı steril iğne kullanılır. Kullanmadan önce flakon kuvvetlice çalkalanmalı ve enjeksiyon bölgesi %70 etil alkol ile muamele edilmelidir. Girişten önce, şişe bir su banyosunda 36-38 ºС sıcaklığa ısıtılmalıdır. İTİBAREN önleyici amaç serum hayvanlara 7-10 gün arayla iki kez deri altından uygulanır: buzağılar için 20-30 ml, yetişkin çiftlik hayvanları için 30-60 ml. İTİBAREN tedavi amaçlı Serum intramüsküler veya intravenöz olarak uygulanır. İlk aşama bulaşıcı hastalık: buzağılar 40-60 ml, yetişkin besi hayvanları 60-120 ml. Yokluk tedavi edici etki enjeksiyondan sonra, hastalığın farklı bir etiyolojisini gösterir ve tanıyı netleştirmek için ek laboratuvar testleri yapılmalıdır.

YAN ETKİLER
Çok nadir durumlarda, hayvanlarda artan bireysel hassasiyet ile alerjik reaksiyonlar mümkündür.

KONTRENDİKASYONLAR
Serum kullanırken kontrendikasyonlar tanımlanmamıştır.

1000 hayvandan kan alındı, serum şişelendi ve yaklaşık 20.000 çocuğa ücretsiz olarak dağıtıldı. Böylece peynir altı suyunun asepsi ve sıhhi düzenlemelere uygun olarak bir kesimhanede endüstriyel üretiminin mümkün olduğu gösterilmiştir.

Seroterapi şirketi ek garanti vermez - donör hayvanın otopsisini yapma hakkına sahip değildir.

Üretimimizde kullanılan teknoloji, klasik yönteme göre asepsi açısından daha az katı görünebilir. Ancak serum tamamen kan alma gününde üretildiği için hız açısından büyük bir avantajı vardır.

Mevcut koşullar bizi mezbahada peynir altı suyu üretmeye ittiyse, bunun geçici bir önlem olduğu açıktır, çünkü hematojen ve tedavi edici serum sadece uzman bir enstitü koşullarında yapılabilir.

Hayvan seçimi. Lyon'da, mezbahanın baş veterineri Dr. Guieux ve veteriner müfettişi Dr. Fontenay, şehrimize et tedarik etmek için mukaddes sığırlar arasından bağışçıları kendileri seçiyorlar. Seçilen hayvan, daha fazla kontrolü kolaylaştırmak için sağ omzuna damgalanmıştır. Kesimden sonra hayvanların organları dikkatlice kontrol edilir. Tüberkülozun saptanmasında en kesin yöntemin otopsi olduğu bilinmektedir.

Müteakip operasyonlar, hasta hayvanın serumunun hiç tüketilmediğini gösterecektir.

Hayvan kan örneklemesi. Kan alma odasında, donör boğa otomatik bir boyunduruk ile güvenli bir şekilde tutulur.

Veteriner, hayvanın boyun hizasında cildi iyot ile dezenfekte eder ve bölgede bir neşter ile bir kesi yapar. şahdamarı. Venöz ponksiyon, uzun süreli kaynatma ile sterilize edilmiş bir trokar ile gerçekleştirilir. Kan göründüğü anda, trokar'ı doğrudan ve aseptik olarak defibrinatöre bağlamak için otoklavlanmış kauçuk bir hortum takılır.

Defibrinasyon teknolojisi ve defibrinatör sterilizasyon yöntemi aşağıda açıklanmıştır.

Her hayvandan, aparatın altında bulunan bir terazide tartılan 8-10 litre kan elde edilir. Sıhhi kontrolün çalışmasını kolaylaştırmak için her bir defibrinatör, donör hayvanın verilerini içeren bir etikete sahiptir.

Tüm bileşenlerin kapalı devresi nedeniyle kan numunesinin aseptik olarak gerçekleştirildiğine dikkat edilmelidir: önceden sterilize edilmiş trokar, kauçuk hortum ve defibrinatör.

Kan örnekleme tarihini içeren bir etiket, alınan kana venöz ponksiyon anından seruma dönüştürülüp buzdolabında saklanana kadar eşlik eder.

Kan defibrinasyonu. Çoğu seroterapi kuruluşunda, cam damarlara dökülen kan, yükün basıncı altında serumu ayırır. Bu koşullar altında, önce sığırlardan elde edilen kan çok az serum içerir (yaklaşık %10). Bu nedenle Lyon'daki seroterapi merkezi, serumun %50'sini ve daha kısa sürede veren özel bir teknoloji kullanıyor.

Dr. Merrier bu yöntemi kısmen Rotterdam'daki Kraliyet Enstitüsü'nde ve Milano'daki Seroterapi Enstitüsü'nde yaptığı bulgulardan sonra geliştirmeyi başardı.

Bu enstitülerde kan alınır alınmaz tereyağ yayıklarına benzeyen steril makinelerde defibrine edilir. 5 dakika içinde kan, havadan korunan bir kapta çalkalanır. Defibrinasyon zamanını kesinlikle gözlemlemek gerekir: eksikliği ile pıhtılaşma ve aşırı hemoliz (kırmızı kan hücrelerinin yırtılması nedeniyle) oluşabilir. Tam olarak 15 dakikalık defibrinasyonu işaretlemenize izin veren bir laboratuvar saati kullanmak gereklidir.

Şek. 4, Merkez ambleminde kayıtlı olan kan örneği sayısının 1000'e ulaştığını göstermektedir.

santrifüj. Defibrinasyondan hemen sonra cihazlar, kan alma odasından birkaç metre uzakta bulunan laboratuvara aktarılır. Hasta bir hayvanın serumunun çıkarılabilmesi için her bir defibrinatörün içeriği ayrı ayrı işlenir.

Defibrinasyondan sonra pıhtılaşmayan kan bir Alfa Laval separatöründen (bizim tarafımızdan peynir altı suyu üretimi için uyarlanmış bir süt separatöründen) geçirilir. Merkezkaç kuvvetinin etkisi altında, kan eşit parçalara bölünür: kırmızı, kırmızı toplar içerir ve şeffaf makyaj serumu (fibrin, defibrinatörün bıçaklarında kalır).

Bir hayvandan, 180°C'de sterilize edilmiş bir Pyrex şişesine dökülen 8-10 litre kan veya yaklaşık 4-5 litre serum elde edilir. Flakon üzerine bir defibrinatör etiketi yapıştırılır ve sıhhi kontrolü sağlamak için aynı numara altında bir kart doldurulur.

Serumun şeffaflığını ve tadını bozmadan yeterince aktif olacağı hesaplanarak seruma özel bir antiseptik eklenir. 1 litre seruma ayrıca 1:1000 formalin ve 1:5000 Syunuxol içeren 100 ml solüsyon eklenir. (Müstahzarlar arasında santrifüj antiseptik ile iyice dezenfekte edilir.)

Prensip olarak, kırmızı kan fraksiyonu siyah puding yapmak için kasaplara iade edilmelidir, ancak çoğu zaman kullanılmadan kalır, bu nedenle aşağıda açıklanan teknolojiyi kullanarak şurup yapmak için kullanılabilir.

Kan şurubu yapımında özel durumlar. Şurubun iki avantajı vardır: Serumu aldıktan sonra kalan kanın kırmızı kısmının kullanılmasını sağlar ve çocukların seveceği hoş bir tada sahiptir.

Gliserin eksikliğinden dolayı uzun süreli saklama için şurup hazırlamak zordur ancak suda çok aktif bir ürün yapıp çocuklara günde 2-3 yemek kaşığı vermek mümkündür. Kanın kırmızı kısmına içme suyunun %20'si eklenir ve sıhhi kontrol yapılırken şurup buzullarda saklanır. Sonra %100'ün eşit bir kısmını ekleyin şeker şurubu(Şerbetin amaçlandığı takımların kartlarından şeker elde edilebilir).

Kanın tadını nötralize etmek için şuruba limon veya portakal özü eklenir ve 250 ml'lik şişelerde şişelenir.

Serum tindalizasyonu. Santrifüjlemeden hemen sonra, yani kan numunesi alındıktan bir saatten daha kısa bir süre sonra, serum bir saat boyunca 56°C'de uç daldırılır. Bunu yapmak için, sıcaklığı otomatik olarak korunan bir su banyosuna indirilir. Bu sıcaklıkta tyndallizasyon (serum daha yüksek sıcaklıklarda pıhtılaştığında), serumun kısmi sterilizasyonu için gereklidir, ancak hazırlanma hızı başlı başına bir asepsi garantisidir.

Her beş litrelik flakonun orijinal defibrinatör etiketiyle birlikte verildiğine dikkat edilmelidir, böylece serum numaralandırması donör hayvanlarınkine karşılık gelir.

Kontrol dosyası. Kart, donör hayvanın menşeini, peynir altı suyunun hazırlanma aşamalarını, şişeleme tarihini ve peynir altı suyunun dağıtımını istediğiniz zaman kontrol etmenizi sağlar.

sıhhi kontrol. Gemiler buzdolabında saklanırken, donör hayvanların sıhhi kontrolü veteriner müfettişleri tarafından yapılır. Katledildikten sonra, tüberkülozun en ufak semptomlarını ortaya çıkarmak için kapsamlı bir otopsi yapılır. Bir hastalık tespit edilirse, ilgili serum kolayca geri alınabilir. Her hayvanın kanının ayrı ayrı işlendiği ve serumun ayrı, numaralandırılmış şişelerde bulunduğu bilinmektedir.

Lyon Mezbahalarında Çocuk Hijyeni Kamu Komitesi Seroterapi Merkezi

Kontrol numarası...

Sığır serumu litre

Yukarıdaki kart ve etiket herhangi bir karışıklığı önler.

Lyon'da hijyen önlemleri özellikle katıdır, çünkü aynı veterinerler hayvanları seçer, kanını alır ve eti kontrol eder.

Ekipman sterilizasyonu. Hayvan serumları mikroplar için mükemmel üreme alanlarıdır ve sadece kısmen sterilize edilebilirler. 56 ° üzerindeki sıcaklıklarda, güçlü bir antiseptik eklenirse pıhtılaşır ve bulanıklaşırlar. Bu nedenle peynir altı suyu üretiminin tüm işlemlerinde maksimum sterilite aranır, kullanımdan önce ekipman emniyete alınmalıdır.

Bireysel defibrinatörler şu şekilde sterilize edilir: kan örneklemesinden önceki gece doldurulur antiseptik solüsyon ve kan örneklemesinden birkaç saat önce, aparatın alt takımında bulunan bir musluk kullanılarak antiseptikten serbest bırakılır. Serum santrifüjleri ayrıca, her bir defibrinatörün içeriğinin işlenmesi arasında da dahil olmak üzere bir antiseptik ile muamele edilir.

180 ° C sıcaklıktaki bir elektrikli fırında, peynir altı suyunu depolamak için beş litrelik kaplar da dahil olmak üzere tüm cam eşyalar sterilize edilir.

Serum için 250 ml kapasiteli flakonlar da 180°C sıcaklıkta sterilize edilir. İşlemi kolaylaştırmak için tabaklar, şişeleme ve halka dağıtım için kullanılan kutulardadır.

Hücre kültürleri için sığır serumu - 100 ml., 200 ml., 400 ml., sıvı, steril.

3 yaşına kadar ineklerin kalbinden toplanır. Saman sarısı ila kırmızımsı turuncu berrak sıvı.

Depolama sırasında, sallandığında dağılan hafif bir opaklık ve hafif bir topaklanma tortusuna izin verilir. Şeffaflık (birim optik yoğunluk): 0,45'ten fazla değil; pH: 7,4 ila 8,2; protein, (g/l): 60.0 ila 80.0; hemoglobin, (g/l): 0,5'ten fazla değil; steril; mikoplazma ve virüs içermez; spesifik aktivite - insan embriyosunun kas-iskelet dokusunun LEC, LEC tipi veya diploid hücrelerinin hücre kültürleri için: 3-4 gün boyunca tek tabaka oluşumu, 5. geçişten sonra çoğalma indeksi 2.0'dan az değildir; depolama ve nakliye: karanlıkta -10°C ile -20°C arasındaki sıcaklıklarda.

Son kullanma tarihi:

-20°C'de 2 yıl, +2°C ila +8°C'de 1 yıl. Ulaşım: donmuş.
Hücre kültürleri için sığır serumunun buzunu çözerken, serumun kalitesini etkilemeyen fibrin görünebilir.
Serumu +4 °C'de 1-2 hafta taşırken, büyüme özelliklerinde kısmi bir kayıp ve ayrıca flakonun üst kısmında küçük bir tortu ve yağlı bir halka görünümü ile serum bulanıklığı mümkündür. Bu serumu aldıktan sonra hemen dondurulmalıdır. Bu durumda serumun raf ömrü 1,5 yıla düşer.
Dondurulmuş peynir altı suyu alıcıya teslim edilemiyorsa (veya alıcı teslimat için ödeme yapmak istemiyorsa), olası bir değişiklik için üreticiye karşı herhangi bir talebi olmadığını belirten bir teminat mektubu vermelidir. dış görünüş ve istenen serum dağıtım yöntemini gösteren serum kalitesi.

Sığır serumu için farklı isimler: sığır serumu, sığır serumu, sığır serumu, sığır serumu.

Fiyat: istek üzerine

Adet belirterek alışveriş sepetinize ürün ekleyebilirsiniz.

RU 2460786 patentinin sahipleri:

Buluş biyoteknoloji ile ilgilidir. Kan serumu elde etme yöntemi iki aşamayı içerir. İlk aşamada yetişkin sığırların doğal kan serumu elde edilir. Aynı zamanda, kan aseptik olarak sadece boğaların kalbinden polikarbonat şişelere alınır, bunun içine ilk önce 100-200 ml'lik bir hacimde% 5 sodyum klorür çözeltisi dökülür. Şişeler hacimlerinin yaklaşık yarısı kadar kanla doldurulur ve +1-+2°C sıcaklıktaki bir buzdolabına, 35°'lik bir açıyla 72 saat boyunca yerleştirilir. Daha sonra peynir altı suyu emilir ve +2-+6°C sıcaklıkta EKS filtreleri ile ön temizliği yapılır. Daha sonra polietilen bidonlar peynir altı suyu ile doldurulur ve en az bir hafta -(15-20)°C sıcaklıkta tutulur. İkinci aşama, tekli dondurma ve çözme yöntemiyle boğaların doğal kan serumundan hücre büyümesini engelleyen maddelerin çıkarılmasından oluşur. Serumun üst hafif katmanları, üstten başlayarak aralarındaki ve hemolizli katmanlar arasındaki arayüze kadar toplanır ve EKS derinlik filtreleri ile ön saflaştırma yapılır. Ardından +2-+6°C sıcaklıkta membran filtrelerden sterilizasyon filtrasyonu yapılır. Yöntem, alınan kan hacmine göre serum verimini artırmak ve kalitesini iyileştirmek için hibridomlar da dahil olmak üzere hayvan ve insan hücrelerinin kültürlenmesine uygun serum elde edilmesini mümkün kılar. 6 sekme., 5 pr.

Buluş biyoteknoloji ile ilgilidir ve hayvan, insan ve hibridoma hücre hatlarının kültivasyonunda kullanılabilir.

Tanınmış edebi kaynaklarda, bu kan serumunu elde etme teknolojisi çok yüzeysel olarak açıklanmaktadır (Biyokimyacılar için hücre kültürü yöntemleri / R.A. Adams: İngilizceden Çeviri - M.: Mir. - 1983. - 264 s.; hayvan kafesi kültürde / Ed. Prof. L.P. Dyakonova. - M.: Yayınevi "Sputnik +". - 2009. - 656 s.) ve İnternet'teki kaynak (http:wwwleitran.ru/page.php?al=sivorotka) üretimi hakkında hiçbir bilgi taşımamaktadır.

Yakın bir analog olarak aldığımız yetişkin sığırların kan serumunu elde etmek için bilinen bir yöntem vardır: hayvanlardan kalpten veya şah damarından kan alarak, nihai ürünün yerleşimi, toplanması ve sterilize edilmesi, düzenlenmiş referans kitabında açıklanan nihai ürünün filtrasyonu. tarafından B.I. Antonov ( Laboratuvar araştırması veterinerlikte: El Kitabı / B.I.Antonov, V.Borisova, P.M.Volkov ve diğerleri, ed. B.I.Antonova. - M.: Agropromizdat. - 1986. - 352 s.). Ancak bu analogun önemli dezavantajları vardır:

1. Hem ineklerden hem de boğalardan kan alınır (hayvanların kan serumunun cinsiyetlerinden önemli ölçüde farklı olduğu iyi bilinir);

2. Kan örneklemesi iki yöntemle gerçekleştirilir: asepsisiz kalpten ve asepsili şah damarından, ancak 10 litrelik şişeleri 5 litrelik işarete kadar doldurma süresi 6-10 dakika veya daha fazladır;

3. Yalnızca cam şişeler kanla doldurulur, bunlar genellikle kırılır ve onlarla çalışan çalışanlar için potansiyel bir yaralanma kaynağı olur, ayrıca pahalıdırlar;

4. Peynir altı suyu çamuru buzdolabında 24-48 saat +6-+10°C sıcaklıkta gerçekleştirilir ve bu sıcaklıkta Yüksek sıcaklık vulgar mikrofloranın hızlı bir şekilde çoğaltılması, nihai ürünün kalitesinde bir azalmaya yol açar;

5. Serum çıkışı önemsizdir (alınan kan hacminin %20-25'i), şişelerin duvarlarını ıslatmak ve şah damarından kan almak için tuzlu NaCl solüsyonu kullanılması;

6. Toplanan peynir altı suyu, EKS derinlik filtreleri ile ön saflaştırma için +30-+37°С'ye kadar ısıtılır ve ardından millipore membran filtreler ile sterilizasyon filtrasyonu yapılır. Peynir altı suyu filtrasyonunun uzun bir süreç olduğu göz önüne alındığında, yüksek sıcaklıkta, içinde kalitesini olumsuz etkileyen hızlı bir mikroflora birikimi olur;

7. Protein çökeltme ve daha güvenilir sterilizasyon nedeniyle, nihai ürünün hazırlanma süresini ve sarf malzemelerinin maliyetini artıran 2-3 kat peynir altı suyu filtrasyonu önerilir;

8. Bu teknoloji ile elde edilen serum, bir dizi fiziko-kimyasal parametreye karşılık gelmemektedir ve hayvan kaynaklı hücrelerin kültürlenmesi için uygun değildir.

Başka bir analog, ancak yalnızca kalite özellikleri, 4 Nisan 1985'te SSCB Sağlık Bakanlığı tarafından onaylanan, büyüyen hayvan ve insan hücre kültürleri için besin ortamında hala en iyi biyolojik katkı maddesi olarak kabul edilen (TU FS 42-7BC-85) inek fetüslerinin fetal kan serumunu görüyoruz. .

Buluşun amacının açık bir sunumu için Tablo 1, TU 49.24 b-82'ye göre yetişkin sığırların doğal kan serumundaki ve buna göre fetal ineklerin doğal kan serumundaki hücre büyümesi inhibitörlerinin ve diğer kalitatif göstergelerin konsantrasyonlarını gösterir. TU FS 42-7BC-85, SSCB Sağlık Bakanlığı tarafından 4 Nisan 1985'te onaylanmıştır.

Teknik çözüme en yakın olanı, tarafımızca şu şekilde alınan 5 Mart 1994 tarihli RF patent No. 1813783 "Hayvan doku hücrelerinin kültürü için hayvan kan serumu elde etme yöntemi"nde açıklanan yetişkin sığır kan serumu elde etmek için bir yöntemdir. mevcut buluşun bir prototipi.

Bu patente göre teknolojik işlem, doğal hayvan kan serumlarının -(15-20)°C'de 24-48 saat dondurulmasını, ardından oda sıcaklığında eritilmesini, üstten başlayarak arayüze kadar hafif serum katmanlarının toplanmasını içerir. hemolize fraksiyonlar, sterilizasyon filtrasyonu ve elde edilen preparatların kalite kontrolü ile.

Buluşun amacı, alınan kan hacmine göre serum verimini önemli ölçüde artırmak, kalitesini iyileştirmek ve aynı zamanda, yerli hücrelerden tek tek inhibitörleri çıkararak, hibridomlar da dahil olmak üzere hayvan ve insan hücrelerinin kültürlenmesi için uygun yetişkin sığır kan serumu elde etmektir. boğa hücre büyümesinin kan serumu.

Görev, bizim tarafımızdan, yetişkin sığırlardan kan serumu elde etme yönteminde, önemli, mevcut edebi kaynakların tam tersi, üretim teknolojisinde değişiklikler yapıldığı gerçeğiyle çözüldü.

Bu buluşun aksine önerilen projemizde boğaların kan serumunun defrost işlemi sırasında çıkan bileşenlerin yüzdesi %5-10'a düşürülür, ayrıca kan serumu +2-+6°C'de ön filtrelenir. EKS filtreleri aracılığıyla ve daha sonra herhangi bir güvenilir şirketin membran filtrelerini sterilize ederek, örneğin: Millipore Intertec USA, İrlanda'daki şubesi veya Vladisart Rusya. Hayvansal kökenli hücrelerin kültürlenmesi için yetişkin sığırların kan serumu elde etme yöntemi, iki aşamayı içerir:

1. aşama, değişimde çok önemli bir an olan yetişkin sığırların doğal kan serumu üretiminde temel bir değişiklikten oluşur. teknolojik süreç: kan örneklemesi sadece boğalardan ve sadece kalpten aseptik olarak özel sistemlerle, daha önce 100-200 ml'lik bir hacimde% 5 sodyum klorür çözeltisinin döküldüğü 10-20 litre kapasiteli cam veya polikarbonat şişelere yapılır. . Şişeler, hacimlerinin yaklaşık yarısı kadar kanla doldurulur ve beklemeye bırakılır. dikey pozisyon 2-3 saat kesimhanede bekletildikten sonra +1-+2 °C sıcaklıktaki buzdolabına aktarılarak 72 saat 35 °C'lik açıyla yerleştirildikten sonra özel bir sistemle çöken serum toplanır ( alınan kan hacmine çıkışı %40'ı geçer), +2-+6°С sıcaklıkta EKS filtreleri ile ön temizliği, 20 litrelik polietilen bidonlara doldurulur ve -(15-°C sıcaklıkta tutulur) 20)°С en az bir hafta süreyle.

2. aşama, boğaların doğal kan serumundan hücre büyümesini engelleyen maddelerin (artık hemoglobin, toplam lipidler, γ-globulinler vb.) donma-çözülme yöntemiyle çıkarılması, serumun üst hafif katmanlarının toplanması, üstten başlayarak, hemolize fraksiyonlarla sınırına kadar, EKS derinlik filtreleri ile ön temizleme, ardından membran filtrelerden sterilizasyon filtrasyonu, 500 ml'lik flakonlarda 400-450 ml'lik ambalajlar, sterilite ve biyolojik aktivite kontrolü.

Sığır kan serumu elde etme yöntemi arasındaki temel fark, üretim için mevcut yöntemlerin tam tersi olan ve gerekçesi aşağıda birkaç örnekte verilen teknolojiyi kullanmamızdır.

Örnek 1. Boğalardan kan alınması ve serum ayrılması.

Boğalardan serum elde etmek için asepsiye uygun olarak iki kişi tarafından kan örneği alındı. aseptik yöntemler: şah damarından ve kalpten, 100-200 ml% 5 sodyum klorür çözeltisinin döküldüğü 10 litrelik cam veya 20 litrelik polikarbonat şişelere.

Boğaların kalbinden kan alırken 10 litrelik şişeleri 5 litrelik işarete kadar doldurma süresinin 1-2 dakika ve şah damarından alırken - 8-10 dakika olduğunu bulduk.

Şişelere kan alındıktan sonra oda sıcaklığında 2 saat dik olarak bekletildikten sonra buzdolabında +1-+2°C sıcaklıkta 35°'lik bir açıyla 72 saat buzdolabında bekletildi. Kanlı şişelerin 35°'lik bir açıyla konumlandırılması, pıhtıların daha iyi geri çekilmesine katkıda bulunur ve serum çamurunun +1-+2°C'lik sıcaklığı, yanlışlıkla kana giren mikrofloranın çoğalmasını engeller.

Örnek 2. Kan numunesinin alındığı yere bağlı olarak boğa serumunun ayrılmasının karşılaştırmalı çalışması ve yüzdeçözelti içinde sodyum klorür.

Bu deneyin sonuçları tablo 2'de gösterilmiştir. Deneyde üç seçenek vardır. Her versiyonda, 4.65 ila 5.10 litre kan hacmine sahip 20 şişe. Seçenek 1'de, şah damarından 100 ml %1 NaCl çözeltisi içeren 10 litrelik şişelere kan alındı. Varyant 2'de kalpten %1'lik NaCl solüsyonu ile 100 ml'lik şişelerde kan alındı ​​ve varyant 3'te kalpten de kan alındı, ancak şişeye 100 ml %5 NaCl solüsyonu döküldü.

Tablo 2'de görüldüğü gibi, %1 NaCl solüsyonlu bir şişede boğaların kalbinden alınan kandan elde edilen serumun verimi, şah damarından alınan kandan önemli ölçüde daha yüksektir. Duvarlarını ıslatmak için şişelere dökülen hipertonik %5'lik bir NaCl çözeltisinin kullanılması, boğaların kalbinden alınan kandan daha fazla serum salınımına katkıda bulunur. Önerilen yönteme göre yüksek peynir altı suyu verimi, üretim koşullarında da gerçekleşir. Yani örneğin 30 şişede 150 litre kan alındı ​​ve çökeltme işleminden sonra 63 litre serum veya kan hacminin %42'si emildi.

Örnek 3. Boğa ve ineklerin kan serumunun kalitatif göstergeleri.

Boğaların ve ineklerin kan serumu çalışması, aşağıdaki niteliksel göstergelere göre gerçekleştirildi: optik yoğunluk, toplam protein ve artık hemoglobin içeriği, nakledilen hücre kültürlerinde büyüme uyarıcı aktivite. 300-400 kg ağırlığındaki boğalarda ve 400-450 kg ağırlığındaki ineklerde, kalpten 5 litrelik bir işarete kadar 100 ml% 5 NaCl çözeltisi içeren 10 litrelik şişelere kan alındı, serum 72 için savundu. +1-+2°C sıcaklıkta buzdolabında saatlerce bekletildi, ardından serum örnekleri alındı, donduruldu, çözdürüldü ve membran filtrelerden geçirilerek sterilize edildi.

Tek tek hayvanların kan serumunun şeffaflığı (optik yoğunluk), toplam protein ve kalıntı hemoglobin, serum numuneleri alındıktan hemen sonra ve ayrıca 1500 rpm'de 10 dakika santrifüj edildikten sonra belirlendi. Toplam protein, biüre reaksiyonu ile belirlendi ve kalıntı hemoglobin, serum santrifüjünden sonra hemiglobin siyanür yöntemiyle belirlendi. Kan serumunun büyüme uyarıcı aktivitesi, SPEV ve MDBK hücre kültürlerinde, 40.000 hücre/cm2 tohumlama yoğunluğunda 72 saatlik büyümeden sonra çoğalma indeksi ve 5 günlük bir büyümeden sonra hücre popülasyonu artışının çokluğu ile değerlendirildi. 20.000 hücre/cm2'lik bir tohumlama yoğunluğu. Hücreler, glutamin, kanamisin ve %10 serum içeren Eagle's MEM ortamında 8 cm2'lik bir aşı ile Carrel şişelerinde kültürlendi.

40 boğa ve 40 inekten kan alındı. Bu deneylerin sonuçları tablo 3'te gösterilmiştir. 72 saatlik bir çamurdan sonra, ineklerin kan serumunun optik yoğunluğu, boğalarınkinden 2 kat fazla aşılmıştır. Bu göstergenin değişkenliği için hemen hemen aynı oran kaydedildi. Santrifüjden sonra, boğalarınkinden biraz daha yüksek kalmasına rağmen, ineklerin kan serumunun optik yoğunluğu azaldı. İneklerin kan serumunda, boğaların kan serumundaki bu göstergelere kıyasla daha yüksek konsantrasyonlarda toplam protein ve kalıntı hemoglobin kaydedildi. İneklerin kan serumundaki kalıntı hemoglobin için varyasyon katsayısı %54'ü aştı. İneklerin kan serumundaki yüksek optik yoğunluk ve kalıntı hemoglobin konsantrasyonu, görünüşe göre, eritrositlerinin yok edilmesine karşı daha düşük bir dirençle ilişkilidir. SPEV ve MDBK hücre kültürlerinde ineklerin kan serumunun büyüme uyarıcı aktivitesi (çoğalma indeksi ve hücre popülasyonundaki artışın çokluğu açısından), boğaların kanından elde edilenin biyolojik aktivitesinden daha düşüktür.

Örnek 4. Hücre kültürüne yönelik serum elde etmek için boğaların kalbinden kan almanın avantajı.

Çalışmanın amacı, boğaların şah damarı, karotid arteri ve kalbinden alınan kandan elde edilen serumların biyokimyasal bileşiminin özelliklerini belirlemek ve ayrıca transplante edilen hücre kültürleri üzerinde büyüme özelliklerini değerlendirmektir. 300-400 kg ağırlığındaki 18 buzağıdan serum elde etmek için şah damarından, karotid arterden ve kalpten aseptik olarak 300 ml kan, 5 ml %5 NaCl solüsyonlu 500 ml'lik flakonlara (hayvan başına 2 flakon oranında) alındı. ve 48 saat boyunca +2 °C sıcaklıktaki bir buzdolabına 35 ° 'lik bir açıyla yerleştirildi. Her bir şişe çiftinden çöken serum ayrı ayrı toplandı, santrifüjlendi ve fiziksel ve biyokimyasal çalışmalar için numuneler alındıktan sonra -15°C'de donduruldu. Membran filtrelerden süzme işlemi yapılmadan önce kalp, karotis arter ve juguler venden alınan kan serumları ayrı ayrı 200 ml'de karıştırıldı.

pH ve optik yoğunluğun belirlenmesi, sterilitenin kontrolü ve kan serumunun büyüme uyarıcı özelliklerinin değerlendirilmesi geleneksel yöntemlerle gerçekleştirilmiştir. Toplam protein, biüret reaksiyonu, artık hemoglobin - hemiglobin siyanür yöntemiyle, kolesterol - Konelab'dan (Finlandiya) reaktiflerle, ayrıca düşük moleküler ağırlıklı azotlu maddeler (kreatinin, üre ve ürik asit), pigmentler (doğrudan ve toplam bilirubin) ile belirlendi. , enzimler (LDH, CPK, glutamin transferaz, amilaz, AST, alkalin fosfataz, ALT), inorganik maddeler (kalsiyum, demir, fosfor), Daytona Rendox cihazında Rendox reaktifleri kullanılarak glikoz (İngiltere) ve peynir altı suyu proteinlerinin elektroforezi yapıldı. selüloz asetat filtreler üzerinde Vladisart tipi - FMAC-0.45-(80 100) -11106, 0.45 μm gözenek boyutu ile. Sayısal malzeme, aritmetik ortalama (M), aritmetik ortalama hata (m), standart sapma (σ), varyasyon katsayısı (CV) ve sonuçların farklılıklarının önemi (P) kullanılarak bilgisayar statik işlemesine tabi tutulmuştur. Microsoft Excel. Boğaların kan serumlarının listelenen çalışmalarının sonuçları Tablo 4'te gösterilmektedir.

Sığır kan serumlarının büyümeyi teşvik edici özelliklerini değerlendirmek için hücre modelleri olarak transplante edilebilir böbrek hatları SPEV (domuz embriyosu) ve MDBK (inek embriyosu) kullanıldı. Şah damarından, karotid arterden ve boğaların kalbinden alınan steril kan serumu, glutamin ve kanamisin içeren Eagle's MEM ortamına %10 konsantrasyonda ilave edildi. Proliferasyon indeksini (PI) hesaplamak için hücre süspansiyonu, 42.000 hücre/cm2 tohumlama yoğunluğunda 3 cm2'lik bir aşılama alanı ile 2 ml'ye ekildi. 72 saatlik büyümeden sonra, elde edilen tek tabakadaki hücre sayısı sayıldı. Her kültürle 8 deney yapılmış, deneylerde Goryaev odasında hücre sayısı 4 kez sayılmıştır. SPEV ve MDBK hücrelerinin dolaşım sisteminin farklı bölümlerinden alınan boğaların kan serumları ile besiyeri üzerindeki proliferatif aktivitesinin sonuçları Tablo 5'te gösterilmektedir.

Karotis arter ve juguler venden alınan kandan alınan serumlarla besiyerinde büyütülen hücre kültürlerinin çoğalması, kuşkusuz farklı biyokimyasal bileşimlerinden dolayı, kalpten alınan kan serumu ile bir ortamda yetiştirilen hücrelere göre daha düşüktü.

Örnek 5. Boğaların doğal kan serumundan hücre büyümesini engelleyen maddelerin dondurma - çözme yöntemiyle uzaklaştırılması. Bireysel serum numuneleri, bir dizi faktöre bağlı olarak farklı bir biyokimyasal bileşime sahiptir: hayvanları besleme ve tutma, mevsim, cins, cinsiyet, vb. Dondurma ve çözme, hücre kültürleri için öngörülebilir bir biyokimyasal bileşime sahip kan serumu elde etmeyi mümkün kılar.

Dondurma - çözme yöntemiyle peynir altı suyu elde etmenin tüm çeşitleri arasında, aşağıdakileri içeren seçeneği tercih ettik: boğaların doğal kan serumlarının - (15-20) ° C'de en az 7 gün süreyle dondurulması, ardından bunların eritilmesi + 20- + 40 °C, serumların hafif tabakalarının üstten başlayarak, hemolizli tabakalar ile ara yüze toplanması, ön ve ardından sterilizasyon filtrasyonu ve elde edilen preparatların kalite kontrolü.

Sığır kan serumunun doğal seruma kıyasla ana fiziksel ve kimyasal parametreleri daha düşüktür, yani: protein konsantrasyonu - 1.19-1.94; serbest hemoglobin - 1.32-2.94'te; toplam lipidler - toplam kolesterol dahil 1.56-2.64 kez - 1.37-2.53 kez.

Bir poliakrilamid jeldeki serum proteinlerinin elektroforezi sonuçlarına göre, donma-çözülme ile elde edilen kan serumlarında, doğal kan serumlarına kıyasla, albüminlerin bağıl konsantrasyonu artar ve γ-globulinlerin konsantrasyonu azalırken, α konsantrasyonu - ve β-globulinler pratik olarak değişmeden kalır.

Dondurma - çözülme ile elde edilen sığır kan serumu bileşiminin göstergeleri tablo 6'da sunulmuştur.