zvjezdaste stanice. Fibroza jetre: prošlost, sadašnjost i budućnost. Klinička citologija jetre: Ito stelatne stanice

Provedena je ultrastrukturna, imunohistokemijska i morfometrijska analiza populacije zvjezdastih stanica jetre u dinamici razvoja fibroze i ciroze infektivno virusnog podrijetla. Otkrivena je fibrogena aktivacija zvjezdastih stanica jetre, koju karakterizira smanjenje lipidnih kapljica i sinkrona ekspresija karakteristika sličnih fibroblastima - pozitivna imunohistokemijska reakcija na α-aktin glatkih mišića, hiperplazija granularnog citoplazmatskog retikuluma i pericelularno stvaranje brojnih kolagenih fibrila. Pokazalo se da, unatoč progresivnom smanjenju gustoće broja zvjezdastih stanica koje sadrže lipide tijekom razvoja fibroze, ostaje potreba za održavanjem funkcije taloženja retinoida - kod ciroze jetre zvjezdaste stanice koje sadrže lipide pronađene su u fibrozne pregrade i unutar lobula. Zaključeno je da su zvjezdaste stanice jetre polimorfna heterogena populacija sa širok raspon funkcionalna aktivnost.

fibrogeneza

zvjezdaste stanice jetre

ultrastruktura

imunohistokemija

1. Balabaud C., Bioulac-Sage P., Desmouliere A. Uloga jetrenih zvjezdastih stanica u regeneraciji jetre // J. Hepatol. - 2004. - Vol. 40. – Str. 1023–1026.

2. Brandao D.F., Ramalho L.N.Z., Ramalho F.S. Ciroza jetre i jetrene zvjezdaste stanice // Acta Cirúrgica Brasileira. - 2006. - Vol. 21. – Str. 54–57.

3. Desmet V.J., Gerber M., Hoofnagle J.H. Klasifikacija kroničnog hepatitisa: dijagnoza, stupnjevanje i stadije // Hepatologija. - 1994. - Vol. 19. - Str. 1523-1520.

4. Gabele E., Brenner D.A., Rippe R.A. Fibroza jetre: Signali koji dovode do pojačanja fibrogenih jetrenih zvjezdastih stanica // Front. Biosc. - 2003. - Vol. 8. – Str. 69–77.

5. Geerts A. O podrijetlu zvjezdastih stanica: mezodermalne, endodermalne ili neuro-ektodermalne? // J. Hepatol. - 2004. - Vol. 40. – Str. 331–334.

6. Gutierrez-Ruiz M.C., Gomez-Quiroz L.E. Fibroza jetre: traženje odgovora na staničnom modelu // Liver Intern. - 2007. - Vol. 10. – Str. 434–439.

7. Kisseljeva T., Brenner D.A. Uloga jetrenih zvjezdastih stanica u fibrogenezi i preokretu fibroze // J. Gastroenterol. Hepatol. - 2007. - Vol. 22.–P. S73–S78.

8. Ryder S.D. Progresija jetrene fibroze u bolesnika s hepatitisom C: prospektivna ponovljena studija biopsije jetre // Gut. - 2004. - Vol. 53. – P. 451–455.

9. Schuppan D., Afdhal N.H. Ciroza jetre // Lancet. - 2008. - Vol. 371. - Str. 838-851.

10. Senoo H. Struktura i funkcija jetrenih zvjezdastih stanica // Med. elektron. mikrosc. - 2004. - Vol. 37. – Str. 3–15.

Zvjezdaste stanice jetre (lipociti, Ito stanice, jetrene stanice koje nakupljaju mast) lokalizirane su u Disseovim prostorima između hepatocita i endotelne obloge sinusoida i imaju vodeću ulogu u regulaciji retinoidne homeostaze, taložeći do 80% vitamina A . Disseov prostor je područje najveće funkcionalne odgovornosti, osiguravajući transsinusoidnu razmjenu. Koristeći eksperimentalne modele iu staničnoj kulturi, dokazano je da se jetrene zvjezdaste stanice diferenciraju u velike citoplazmatske lipidne kapljice koje sadrže vitamin A; ovaj fenotip se tumači kao "mirovanje".

Sve veća važnost pridaje se ulozi zvjezdastih stanica u razvoju fibroze i ciroze jetre. Nakon primanja fibrogenih podražaja, "mirujuće" zvjezdaste stanice se "transdiferenciraju", poprimajući fenotip sličan miofibroblastima, te počinju proizvoditi kolagen, proteoglikane i druge komponente izvanstaničnog matriksa. Fibroza na razini središnjih vena, sinusoida ili portalnih žila ograničava normalnu hemodinamiku jetre, što dovodi do smanjenja metabolički učinkovitog parenhima, u budućnosti - portalna hipertenzija i porto-sistemsko ranžiranje. Nakupljanje vezivnog tkiva u Disseovim prostorima remeti normalan metabolički promet između krvi i hepatocita ometajući čišćenje cirkulirajućih makromolekula, mijenjajući međustanične interakcije i dovodeći do disfunkcije jetrenih stanica.

Postoje oprečna mišljenja o tome mogu li se aktivirane zvjezdaste stanice vratiti u fenotip mirovanja. Dobiveni su dokazi da fibrogene zvjezdaste stanice jetre mogu djelomično izravnati proces aktivacije, na primjer, kada su izložene retinoidima ili kada su u interakciji s komponentama izvanstaničnog matriksa, uključujući fibrilarni kolagen tipa I ili komponente bazalne membrane. Rješenje ovog problema u osnovi je problema reverzibilnosti fibroze i razvoja terapijskih pristupa liječenju ciroze jetre.

Svrha studije- provesti sveobuhvatno istraživanje strukturnih i funkcionalnih značajki zvjezdastih stanica jetre u dinamici fibroznih promjena u modelu kronične HCV infekcije.

Materijal i metode istraživanja

Provedeno je sveobuhvatno svjetlo-optičko, elektronsko-mikroskopsko i morfometrijsko istraživanje bioptata jetre kod kronične HCV infekcije u različitim stadijima fibroznih promjena (100 uzoraka podijeljenih u 4 jednake skupine prema težini fibroze). Važno je napomenuti da se zvjezdaste stanice koje sadrže lipide najbolje vizualiziraju na polutankim rezovima, fibrogene zvjezdaste stanice - samo na ultratankim rezovima ili pomoću imunohistokemijskog snimanja.

Uzorci jetre fiksirani su u 4% otopini paraformaldehida ohlađenoj na 4°C, pripremljenoj u Millonigovom fosfatnom puferu (pH 7,2-7,4); parafinski rezovi su obojeni hematoksilinom i eozinom u kombinaciji s Perlsovom reakcijom po van Giesonu uz dodatno bojanje elastičnih vlakana Weigertovim resorcinol fuksinom te je učinjena PAS reakcija. Polutanki rezovi su obojeni Schiffovim reagensom i azurom II. Istraživanje je provedeno na univerzalnom mikroskopu Leica DM 4000B (Njemačka). Mikrografije su snimljene digitalnom kamerom Leica DFC 320 i softverom Leica QWin. Ultratanki rezovi obojeni uranil acetatom i olovnim citratom ispitivani su u elektronskom mikroskopu JEM 1010 pri naponu ubrzanja od 80 kW.

Stadij fibroze jetre određen je na ljestvici od 4 stupnja, u rasponu od portalne fibroze (stadij I) do ciroze sa stvaranjem porto-centralnih vaskulariziranih septi i nodularnom transformacijom parenhima. Zvjezdaste stanice jetre i drugi stanični elementi koji proizvode matriks otkriveni su u dinamici fibroze ekspresijom α-aktina glatkih mišića.

Ekspresija α-aktina glatkih mišića u jetrenim stanicama koje proizvode matriks testirana je metodom neizravne imunoperoksidaze u dva koraka s negativnim kontrolnim sustavom snimanja streptavidin-biotin za produkte reakcije. Primarna korištena protutijela bila su mišja monoklonska protutijela na α-aktin glatkih mišića (NovoCastra Lab. Ltd, UK) razrijeđena 1:25; kao sekundarna antitijela – univerzalna biotinilirana antitijela. Produkti imunohistokemijske reakcije vizualizirani su pomoću diaminobenzidina, zatim su rezovi obojeni Mayerovim hematoksilinom. Brojna gustoća zvjezdastih stanica koje sadrže lipide procijenjena je na polutankim rezovima u jedinici vidnog polja od 38 000 µm2. Za statističku obradu podataka korišten je Studentov t-test; razlike u uspoređivanim parametrima smatrane su značajnima ako je vjerojatnost pogreške P manja od 0,05.

Rezultati istraživanja i rasprava

S minimalnim fibroznim promjenama u jetri bolesnika s kronični hepatitis C, u pravilu se nalazi prilično velik broj zvjezdastih stanica, koje su jasno vidljive samo na polutankim i ultratankim rezovima i razlikuju se u Disseovim prostorima prisutnošću velikih kapljica lipida u citoplazmi. Transformacija zvjezdastih stanica iz "mirujućih", koje sadrže retinoide, u fibrogene stanice praćena je postupnim smanjenjem broja lipidnih kapljica. S tim u vezi, pravi broj zvjezdastih stanica može se odrediti opsežnom elektronsko-mikroskopskom i imunohistokemijskom studijom.

Na početne faze fibroza (0, I) kod kroničnog hepatitisa C u proučavanju polutankih presjeka, populacija zvjezdastih stanica jetre odlikovala se izraženim polimorfizmom - veličina, oblik, broj lipidnih kapljica i njihova tinktorijalna svojstva naglo su varirala: razlike u osmiofilnost materijala koji sadrži lipide u različitim stanicama privukla je pozornost. Gustoća broja zvjezdastih stanica jetre, vizualizirana u preparatima prisutnošću citoplazmatskih kapljica lipida, bila je 5,01 ± 0,18 po jedinici vidnog polja.

Značajke ultrastrukture zvjezdanih stanica povezane su s heterogenošću elektronske gustoće kapljica lipida ne samo unutar iste stanice, već i između različitih lipocita: osmiofilniji rubni rub isticao se na pozadini elektron-prozirnog lipidnog supstrata; osim toga, jezgre su oštro polimorfne, a duljina citoplazmatskih procesa je varirala. Među ultrastrukturnim značajkama zvjezdanih stanica koje sadrže lipide, uz prisutnost lipidnih kapljica, može se primijetiti vrlo mala količina citoplazmatskog matriksa, siromašnog membranskim organelama, uključujući mitohondrije, pa se stoga, očito, ovaj fenotip lipocita naziva " mirovanje" ili "pasivno" .

U stadijima fibroze II i III, ultrastruktura većine zvjezdastih stanica stekla je takozvani mješoviti ili prijelazni fenotip - istodobna prisutnost morfoloških značajki i stanica koje sadrže lipide i stanica sličnih fibroblastima. U takvim lipocitima jezgre su imale duboke invaginacije nukleoleme, veći nukleolus i povećani volumen citoplazme koja je zadržavala kapljice lipida. Istodobno se naglo povećao broj mitohondrija, slobodnih ribosoma, polisoma i tubula granularnog citoplazmatskog retikuluma. U pravilu je došlo do membranskog kontakta lipidnih kapljica i mitohondrija, što ukazuje na "iskorištenje" lipida. U mnogim stanicama razgradnja lipidnih kapljica odvija se stvaranjem autofagosoma, koji se zatim eliminiraju egzocitozom. U nekim slučajevima zabilježena je proliferacija zvjezdastih stanica mješovitog fenotipa.

Zvjezdaste stanice koje proizvode matriks, najbrojnije u fazi ciroze jetre, karakterizirane su potpunim odsustvom lipidnih granula, oblikom sličnim fibroblastima, razvijenim odjelom za sintezu proteina i stvaranjem kontraktilnih fibrilarnih struktura u citoplazmi; pericelularno u Disseovim prostorima lokalizirani su brojni snopići kolagenih fibrila specifične poprečne ispruganosti.

Općenito, s progresijom kroničnog hepatitisa C, praćenog intralobularnom perisinusoidnom fibrogenezom, došlo je do morfološke značajke aktivacija zvjezdastih stanica jetre, njihova transformacija iz takozvanih "pasivnih", nakupljajućih vitamin A, u fibrogene i proliferirajuće stanice.

U fazi transformacije u cirozu jetre došlo je do značajnog smanjenja numeričke gustoće zvjezdastih stanica koje sadrže lipide, što ukazuje na njihovu fibrogenu transformaciju. Međutim, u slučaju formirane ciroze jetre, u izoliranim slučajevima, postojala su područja jetrenog parenhima s perisinusoidnim zvjezdastim stanicama koje sadrže lipide. Osim toga, u jednom uzorku pronađeni su brojni lipociti u periportalnom fibroznom tkivu, što vjerojatno ukazuje na važnu ulogu zvjezdastih stanica u metabolizmu retinoida u organizmu, čak iu fazi ciroze organa. Osim toga, čini se da zvjezdaste stanice imaju niz drugih funkcija, nalaze se i u ekstrahepatalnim organima kao što su gušterača, pluća, bubrezi i crijeva, a postoji mišljenje da jetrene i ekstrahepatalne zvjezdaste stanice tvore diseminirani sustav zvjezdastih stanica tijelo, slično APUD sustavu. Na primjer, unatoč povezanosti fibrogenih zvjezdastih stanica s cirozom jetre, njihova aktivacija može imati korisnu ulogu u slučajevima akutne ozljede, jer je rezultat odgovarajući stromalni krug za regeneraciju parenhimskih stanica.

Ozbiljnost perihepatocelularne fibroze u kroničnoj HCV infekciji, prema morfometrijskoj analizi, imala je značajnu inverznu korelaciju s numeričkom gustoćom zvjezdastih stanica koje sadrže lipide - u fazi fibroze III i s cirozom organa iznosila je 0,20 ± 0,03 po vidnom polju. jedinica, što je znatno manje (str< 0,05), чем на стадиях фиброза 0 - I (5,01 ± 0,18) и II (2,02 ± 0,04).

Fibrogenu aktivnost jetrenih stanica koje proizvode matriks testirali smo pomoću imunohistokemijske studije ekspresije alfa-aktina glatkih mišića. Produkti imunohistokemijskih reakcija različitog intenziteta pronađeni su u citoplazmi aktiviranih zvjezdastih stanica lokaliziranih unutar jetrenih režnjića. Osobito značajna ekspresija α-aktina glatkih mišića zabilježena je u citoplazmi fibroblasta i miofibroblasta portalnih zona, stanica glatkih mišića krvnih žila i miofibroblasta oko središnjih vena.

Većina podataka o staničnim mehanizmima fibrogeneze dolazi iz studija provedenih na jetrenim zvjezdastim stanicama, međutim, jasno je da različite stanice koje proizvode matriks (svaka sa specifičnom lokalizacijom, imunohistokemijskim i ultrastrukturnim fenotipom) pridonose razvoju jetrene fibroze. Oni uključuju fibroblaste i miofibroblaste portalnog trakta, vaskularne glatke mišićne stanice i miofibroblaste oko središnjih vena, koji se aktiviraju u stanjima kronične ozljede jetre.

Zaključak

Dokazana je uloga zvjezdastih stanica jetre u razvoju fibroze organa kod kroničnog hepatitisa C. S progresijom fibroze značajno se smanjuje brojčana gustoća zvjezdastih stanica koje sadrže lipide, dok dio populacije zadržava tzv. "fenotip za metaboličku funkciju. Zvjezdaste stanice jetre poput miofibroblasta u stanju fibrogene aktivacije karakterizirane su sljedećim strukturnim i funkcionalnim značajkama: smanjenjem broja i naknadnim nestankom lipidnih kapljica, hiperplazijom granularnog citoplazmatskog retikuluma i mitohondrija, žarišnom proliferacijom, imunohistokemijskom ekspresijom karakteristika sličnih fibroblastima, uključujući α-aktin glatkih mišića, i stvaranje pericelularnih kolagenskih fibrila u Disseovim prostorima.

Dakle, zvjezdaste stanice jetre nisu statična, već dinamička populacija koja je izravno uključena u remodeliranje intralobularnog perihepatocelularnog matriksa.

Recenzenti:

Vavilin V.A., doktor medicinskih znanosti, profesor, voditelj. Laboratorij za metabolizam lijekova, Istraživački institut za molekularnu biologiju i biofiziku, Sibirski ogranak Ruske akademije medicinskih znanosti, Novosibirsk;

Kliver E.E., doktor medicinskih znanosti, vodeći istraživač, Laboratorij za patomorfologiju i elektronsku mikroskopiju, Novosibirsk Istraživački institut za cirkulatornu patologiju nazvan po akademiku E.N. Meshalkin iz Ministarstva zdravstva i socijalnog razvoja Ruske Federacije, Novosibirsk.

Rad je zaprimljen u uredništvo 15.08.2011.

Bibliografska poveznica

Postnikova O.A., Nepomnyashchikh D.L., Aidagulova S.V., Vinogradova E.V., Kapustina V.I., Nokhrina Zh.V. STRUKTURNE I FUNKCIONALNE ZNAČAJKE JETRENIH STAR STANICA U DINAMICI FIBROZE // Temeljna istraživanja. - 2011. - Broj 10-2. – Str. 359-362;
URL: http://fundamental-research.ru/ru/article/view?id=28817 (datum pristupa: 30.01.2020.). Predstavljamo vam časopise koje izdaje izdavačka kuća "Academy of Natural History"

Glavni izvor endotoksina u tijeluje Gram-negativna crijevna flora. Trenutno nema sumnje da je jetra glavni organ čišćenje endotoksina. Endotoksin prvo preuzima stanica Kami Kupffer (KK), u interakciji s membranskim receptorom CD 14. Može se vezati za receptor kao sam lipopolisaharid(LPS), i njegov kompleks s proteinom koji veže lipid A plazma grumen. Interakcija LPS-a s jetrenim makrofagima pokreće kaskadu reakcija koje se temelje na proizvodnji i otpuštanju ion citokina i drugih biološki aktivnih posrednici.

Postoje mnoge publikacije o ulozi makroajetre (LK) u preuzimanju i čišćenju bakterijskog LPS-a, međutim, interakcija endotela s drugim mezenhimski stanice, posebno perisinusoidalni Ito stanicama, praktički se ne proučava.

NAČIN ISTRAŽIVANJA

Bijelim mužjacima štakora težine 200 g intraperitonealno je ubrizgan 1 ml sterilne fiziološke otopine. visoko pročišćen liofilizirani LPS E. coli soj 0111 u dozama od 0,5,2,5, 10, 25 i 50 mg/kg. U razdobljima od 0,5, 1, 3, 6, 12, 24, 72 h i 1 tjedan, unutarnji organi su uklonjeni pod anestezijom i stavljeni u puferirani 10% formalin. Materijal je ugrađen u parafinske blokove. Sekcije debljine 5 µm su obojene imunohistokemijskistreptavidin-biotin metodom antitijela na desmin, α - glatko, nesmetano- mišićni aktin (A-GMA) i nuklearni antigen dobro proliferirajuće stanice ( PCNA, " Dako"). Desmin je korišten kao marker perisinusoidalniIto stanice, A-GMA - as marker ve miofibroblasti, PCNA - proliferirajuće stanice. Za otkrivanje endotoksina u stanicama jetre, pročišćeni anti-Re-glikolipidantitijela (Institut za opću i kliničku patologiju KDO, Moskva).

REZULTATI ISTRAŽIVANJA

Pri dozi od 25 mg/kg i više, šok je opažen 6 sati nakon primjene LPS-a. koban. Akutna izloženost LPS-u na tkivu jetre uzrokovala je aktivaciju Ito stanica, što se očitovalo povećanjem njihova broja. Broj desminpozitivan stanica se povećao od 6 sati nakon injekcije LPS-a i dosegnuo maksimum ma do 48-72 h (sl. 1, a, b).

Riža. 1. Dijelovi jetre štakora sy, obrađeno LSAB -mi- chennymiantitijela na des rudnik(a, b) i α - glatko, nesmetano cervikalni aktin (c), x400 (a, b) x200 (c).

a - prije uvođenja endotoksinana, samac desminpozitivanIto stanice u periportalnoj zoni; b- 72 hnakon primjene endotoksina na: brojni desminpozitivan Ito stanice; u- 120 sati nakon uvođenja en dotoksin: α - glatki mišić prisutan je samo ny aktinco u glatkim mišićnim stanicama kah posuda.

U 1 broj tjedna desminpozitivan stanice su se smanjile, alibio viši od referentnih vrijednosti. Na U ovom slučaju nismo uočili pojavu A-GMA-pozitivan stanice u sinusu dah jetra. unutarnje pozitivno kontrola kada se boje antitijelima na A-GMA služio za identifikaciju glatkih mišićnih stanicavenske žile portalnog trakta koje sadrže A-GMA (Sl. 1, u). Stoga, unatoč povećanju broja Ito stanica, jednom Utjecaj LPS-a ne dovodi do transformacije ( transdiferencijacija) ih u miofibroblaste.

Riža. 2. Dijelovi jetreštakori, liječeni LSAB -označena antitijela na PCNA. a - prije uvođenja en dotoksin: pojedinačniproliferirajući geni patocita, x200; b - 72 sata nakon uvođenja endotoksina: brojni proliferirajući hepatociti, x400.

Povećanje količine desminpozitivan stanice započete unutar portalne zone. Od 6 do 24 sata nakon primjene LPS-a perisinusoidalni stanice su nađene samo oko portalnih trakta, tj. u 1. aci zoni noosa. U vremenu od 48-72 sata, kada je uočen makmaksimalna količina desminpozitivan ljepilo struje, pojavili su se iu drugim zonama acinusa; unatoč tome, većina Ito stanica još uvijek je bila smještena periportalno.

Možda je to zbog činjenice da periportalnolocirani CC su prvi za hvatanje endotoksin koji dolazi iz crijeva kroz portalnu venu ili iz sistemske cirkulacije. Ak tivated QC proizvode širok raspon citokini, za koje se smatra da pokreću aktivaciju Ito stanica i transdiferencijacija u miofibroblaste. Očito, zato su Ito stanice smještene u blizini aktiviranih jetrenih makrofaga (u 1. zoni acinusa) prve koje reagiraju na oslobađanje citokina. Međutim, nismo ih promatrali u našem istraživanju. transdiferencijacija u miofibroblasti, a to sugerira da citokini koje luče CK i hepatociti mogu poslužiti kao čimbenik koji podržava proces koji je već započeo transdiferencijacija, ali ga vjerojatno ne mogu potaknuti jednim izlaganjem jetre LPS-u.

Također je primijećeno povećanje proliferativne aktivnosti stanica uglavnom u 1. zoni acinusa. To vjerojatno znači da su svi (ili gotovo svi) procesi usmjereni prema van oko- i parakrina regulacija međustaničnih interakcija odvija se u periportalnim zonama. Povećanje broja proliferirajućih stanica opaženo je 24 sata nakon primjene LPS-a; broj pozitivnih stanica se povećao do 72 h (maksimalna proliferativna aktivnost, sl. 2, a, b). Proliferirali su i hepatociti i sinusoidne stanice. Međutim, bojanje PCNA ne daje sposobnost identificiranja vrste proliferija pogonske sinusne ćelije. Prema literaturi, djelovanje endotoksina dovodi do povećanja broj QC-a. Misle da se radi o odvija se i zbog proliferacije jetrenih makrofaga i zbog migracije monocita iz drugih organa. Citokini koje oslobađa CK mogu povećati proliferativni kapacitet Ito stanica. Stoga je logično pretpostaviti da proliferirajuće stanice predstavljaju perisinusoidalni Ito stanice. Povećanje njihovog broja koje smo zabilježili očito je potrebno za povećanje sinteze faktora rasta i obnavljanje izvanstaničnog matriksa u uvjetima oštećenja. To može biti jedna od poveznica u kompenzacijsko-regenerativnim reakcijama jetre, budući da su Ito stanice glavni izvor komponenti izvanstaničnog matriksa, faktora matičnih stanica i faktora rasta hepatocita, koji sudjeluju u reparaciji i diferencijaciji. rovka epitelne stanice jetre. Odsutan ista transformacija Ito stanica u miofibroblasti ukazuje da jedna epizoda agresije endotoksina nije dovoljna za razvoj fibroze jetre.

Dakle, akutna izloženost endotok sina uzrokuje povećanje broja desminpozitivan Ito stanice, što je neizravni znak oštećenja jetre. Količina perisinusoidalni stanica se povećava, očito kao rezultat njihove proliferacije. Jedna epizoda agresije endotoksina uzrokuje preokret moja aktivacija perisinusoidalni Ito stanice a ne dovodi do transdiferencijacija u miofibroblaste. S tim u vezi može se pretpostaviti da u mehanizmima aktivacije i transdiferencijacija U Ito stanicama nisu uključeni samo endotoksin i citokini, već i neki drugi čimbenici međustaničnih interakcija.

KNJIŽEVNOST

1. Majanskog D.N., Wisse E., Decker K. // Nove granice hepatologija. Novosibirsk, 1992.

2. Salakhov I.M., Ipatov A.I., Konev Yu.V., Yakovlev M.Yu. // Uspjesi suvremeni, biol. 1998. Svezak 118, broj . 1. S. 33-49.

3. Yakovlev M.Yu. // Kazan . m jedinica časopis 1988. br. 5. S. 353-358.

4. Freudenberg N., Piotraschke J., Galanos C. et al. // Virchows Arh. [b]. 1992. godine. Vol. 61.P. 343-349 (prikaz, ostalo).

5. Gressner A. M. // Hepatogastronerologija. 1996. sv. 43. Str. 92-103.

6. Schmidt C, Bladt F., Goedecke S. i sur. // Priroda. 1995 Vol. 373, br. 6516. Str. 699-702.

7. mudar E., Braet F., Luo D. i sur. // Toxicol. Pathol. 1996. godine. Vol. 24, broj 1. Str. 100-111.

Ključne riječi

JETRA / ITO ZVJEZDASTE STANICE/ MORFOLOGIJA / KARAKTERISTIKE / VITAMIN A / FIBROZA

anotacija znanstveni članak o fundamentalnoj medicini, autor znanstvenog rada - Tsyrkunov V.M., Andreev V.P., Kravchuk R.I., Kondratovich I.A.

Uvod. Uloga Ito zvjezdastih stanica (ISC) definirana je kao jedna od vodećih u razvoju fibroze u jetri, međutim intravitalna vizualizacija strukture ITO u klinička praksa korišten minimalno. Svrha rada: prikazati strukturne i funkcionalne karakteristike HCI na temelju rezultata citološke identifikacije intravitalnih bioptata jetre. Materijali i metode. Korištene su klasične metode svjetlosne i elektronske mikroskopije biopsija te originalne tehnike ultratankih rezova, fiksacije i bojenja. Rezultati. Fotoilustracije svjetlosnog i elektronskog mikroskopa uzoraka bioptata jetre bolesnika s kroničnim hepatitisom C pokazuju strukturne karakteristike HSC-a u različitim stadijima (mirovanje, aktivacija) i u procesu transformacije u miofibroblaste. Zaključci. Korištenje originalnih metoda kliničke morfološke identifikacije i procjene funkcionalnog stanja HCI poboljšat će kvalitetu dijagnostike i predviđanja fibroze jetre.

Povezane teme znanstveni radovi o fundamentalnoj medicini, autor znanstvenog rada - Tsyrkunov V.M., Andreev V.P., Kravchuk R.I., Kondratovich I.A.

Klinička citologija jetre: Kupfferove stanice
2017 / Tsyrkunov V.M., Andreev V.P., Kravchuk R.I., Prokopchik N.I.
Praćenje morfoloških učinaka autolognih mezenhimalnih matičnih stanica transplantiranih u jetru kod virusne ciroze (kliničko promatranje)
2018 / Aukashnk S.P., Alenikova O.V., Tsyrkunov V.M., Isaykina Ya.I., Kravchuk R.I.
Klinička morfologija jetre: nekroza
2017 / Tsyrkunov V.M., Prokopchik N.I., Andreev V.P., Kravchuk R.I.
Polimorfizam zvjezdastih stanica jetre i njihova uloga u fibrogenezi
2008 / Aidagulova S.V., Kapustina V.I.
Struktura sinusoidnih jetrenih stanica u bolesnika s koinfekcijom HIV/hepatitis C virusom
2013 / Matievskaya N. V., Tsyrkunov V. M., Kravchuk R. I., Andreev V. P.
Mezenhimalne matične stanice kao obećavajuća metoda za liječenje fibroze/ciroze jetre
2013 / Lukashik S. P., Aleinikova O. V., Tsyrkunov V. M., Isaykina Ya. I., Romanova O. N., Shimansky A. T., Kravchuk R. I.
Izolacija i uzgoj miofibroblasta jetre štakora eksplantacijom
2012 / Miyanovich O., Shafigullina A. K., Rizvanov A. A., Kiyasov A. P.
Patološki aspekti nastanka fibroze jetre kod HCV infekcije i drugih lezija jetre: suvremeni koncepti
2009 / Lukashik S. P., Tsyrkunov V. M.
Analiza miofibroblasta štakora dobivenih eksplantacijom iz struktura portalnog trakta jetre
2013 / Miyanovich O., Katina M. N., Rizvanov A. A., Kiyasov A. P.
Transplantirane zvjezdaste stanice jetre uključene su u regeneraciju organa nakon djelomične hepatektomije bez rizika od razvoja fibroze jetre
2012 / Shafigullina A. K., Gumerova A. A., Trondin A. A., Titova M. A., Gazizov I. M., Burganova G. R., Kaligin M. S., Andreeva D. I., Rizvanov A. A., Mukhammedov A. R., Kiyasov A. P.

Uvod. Uloga Ito zvjezdastih stanica (Hepatic Stellate Cells, HSC) identificirana je kao jedna od vodećih u razvoju fibroze jetre, ali upotreba intravitalne vizualizacije HSC struktura u kliničkoj praksi je minimalna. Cilj rada je na temelju nalaza citološke identifikacije uzoraka intravitalne biopsije jetre prikazati strukturne i funkcionalne karakteristike HSC-a. Materijali i metode. Primijenjene su klasične metode svjetlosne i elektronske mikroskopije biopsija u okviru originalne tehnike ultratankih rezova, fiksacije i bojenja. rezultate. Strukturne karakteristike HSC uzoraka biopsije jetre bolesnika s kroničnim hepatitisom C prikazane su na foto ilustracijama svjetlosnog i elektronskog mikroskopa. HSC su prikazani u različitim fazama (mirovanje, aktivacija) i tijekom procesa transformacije u miofibroblaste. Zaključci. Korištenje originalnih metoda kliničke i morfološke identifikacije i procjene funkcionalnog statusa HSC omogućuje poboljšanje kvalitete dijagnoze i prognoze fibroze jetre.

Tekst znanstvenog rada na temu "Klinička citologija jetre: Ito zvjezdaste stanice"

UDK 616.36-076.5

KLINIČKA CITOLOGIJA JETRE: ITO zvjezdaste stanice

Cirkunov V. M. ( [e-mail zaštićen]), Andreev V.P. ( [e-mail zaštićen]), Kravchuk R. I. ( [e-mail zaštićen]), Kondratovich I. A. ( [e-mail zaštićen]) EE "Grodno State Medical University", Grodno, Bjelorusija

Uvod. Uloga Ito zvjezdastih stanica (ISC) definirana je kao jedna od vodećih u nastanku fibroze u jetri, međutim intravitalna vizualizacija strukture ITO u kliničkoj praksi koristi se minimalno.

Svrha rada: prikazati strukturne i funkcionalne karakteristike HCI na temelju rezultata citološke identifikacije intravitalnih bioptata jetre.

Materijali i metode. Korištene su klasične metode svjetlosne i elektronske mikroskopije biopsija te originalne tehnike ultratankih rezova, fiksacije i bojenja.

Rezultati. Fotoilustracije svjetlosnog i elektronskog mikroskopa uzoraka bioptata jetre bolesnika s kroničnim hepatitisom C pokazuju strukturne karakteristike HSC-a u različitim stadijima (mirovanje, aktivacija) i u procesu transformacije u miofibroblaste.

Zaključci. Korištenje originalnih metoda kliničke morfološke identifikacije i procjene funkcionalnog stanja HCI poboljšat će kvalitetu dijagnostike i predviđanja fibroze jetre.

Ključne riječi: jetra, Ito zvjezdaste stanice, morfologija, karakteristike, vitamin A, fibroza.

Uvod

Nepovoljan ishod većine kroničnih difuznih lezija jetre različite etiologije, uključujući i kronični hepatitis C (CHC), je fibroza jetre, u čijem su razvoju glavni sudionici aktivirani fibroblasti, čiji su glavni izvor aktivirane Ito zvjezdaste stanice (SSC) .

HSC, sinonim - zvjezdaste stanice jetre, stanice za skladištenje masti, perisinusoidni lipociti, zvjezdaste stanice (engleski Hepatic Stellate Cell, HSC, Ito stanica, Ito stanica). ZKI je prvi opisao 1876. K. Kupffer i nazvao ih zvjezdastim stanicama ("Stemzellen"). T. Ito, pronašavši u njima kapljice masti, označio ih je najprije stanicama koje apsorbiraju mast ("shibo-sesshusaibo"), a zatim, utvrdivši da mast proizvode same stanice iz glikogena, stanicama koje skladište mast ("shibo" -chozosaibo”). Godine 1971. K. Wake je dokazao identičnost Kupfferovih zvjezdastih stanica i Ito stanica koje pohranjuju mast te da te stanice “pohranjuju” vitamin A.

Oko 80% vitamina A u tijelu nakuplja se u jetri, a do 80% svih jetrenih retinoida taloži se u masnim kapljicama HKI. Esteri retinola u sastavu hilomikrona ulaze u hepatocite, gdje se pretvaraju u retinol, tvoreći kompleks vitamina A s retinol-vezujućim proteinom (RBP), koji se izlučuje u perisinusoidalni prostor, odakle ga talože stanice.

Bliska povezanost HCI s fibrozom jetre, koju je ustanovio K. Popper, pokazala je njihovu dinamičku, a ne statičku funkciju - sposobnost izravnog sudjelovanja u remodeliranju intralobularnog perihepatocelularnog matriksa.

Glavna metoda morfološkog pregleda jetre, koja se provodi za procjenu promjena u intravitalnim biopsijama, je svjetlosna mikroskopija, koja u kliničkoj praksi omogućuje utvrđivanje aktivnosti reprodukcije.

gorenje i stadij kroniciteta. Nedostatak metode je niska razlučivost, koja ne dopušta procjenu strukturnih značajki stanica, unutarstaničnih organela, inkluzija i funkcionalnih karakteristika. Doživotno elektronsko mikroskopsko ispitivanje ultrastrukturnih promjena jetre omogućuje dopunu podataka svjetlosne mikroskopije i povećanje njihove dijagnostičke vrijednosti.

U tom smislu, identifikacija jetrenih HSC, proučavanje njihovog fenotipa u procesu transdiferencijacije i određivanje intenziteta njihove proliferacije najvažniji su doprinos predviđanju ishoda bolesti jetre, kao i patomorfologiji i patofiziologija fibrogeneze.

Svrha - prikazati strukturne i funkcionalne značajke HCI na temelju rezultata citološke identifikacije intravitalnih bioptata jetre.

Materijali i metode

Dobivena je intravitalna biopsija jetre aspiracijska biopsija jetre u bolesnika s CHC (HCV+ RNA), od kojih je dobiven pisani informirani pristanak.

Za svjetlosnu mikroskopiju polutankih presjeka, uzorci biopsije jetre pacijenata veličine 0,5 × 2 mm fiksirani su dvostrukom fiksacijom: prvo, prema metodi Sato Taizan, zatim su uzorci tkiva dodatno fiksirani 1 sat u 1% fiksativ osmija pripremljen na 0,1 M fosfatnom Sorensenovom puferu, pH 7,4. Kalijev dikromat (K2Cr2O7) ili kristali kromnog anhidrida (1 mg/mL) dodani su u 1% osmijev tetroksid kako bi se bolje otkrile unutarstanične strukture i intersticijska tvar u polutankim presjecima. Nakon dehidracije uzoraka u seriji alkoholne otopine povećanjem koncentracije i acetona, stavljeni su u predpolimeriziranu smjesu butil metakrilata i stirena i polimerizirani na 550C. Polu-tanki dijelovi (debljine 1 µm) uzastopno su obojeni

azurno II-osnovni fuksin. Mikrografije su dobivene digitalnom video kamerom (Leica FC 320, Njemačka).

Elektronsko mikroskopsko istraživanje provedeno je na uzorcima bioptata jetre veličine 0,5x1,0 mm, fiksiranih 1% otopinom osmij tetroksida u 0,1 M Millonigovom puferu, pH 7,4, na +40C tijekom 2 sata. Nakon dehidracije u uzlaznim alkoholima i acetonu, uzorci su izliveni u araldit. Iz dobivenih blokova pripremljeni su polutanki rezovi (400 nm) na ultramikrotomu Leica EM VC7 (Njemačka) i obojeni metilenskim modrilom. Preparati su pregledani pod svjetlosnim mikroskopom i odabrano je jedno tipsko mjesto za daljnje proučavanje ultrastrukturnih promjena. Ultratanke sekcije (35 nm) obojene su s 2% uranil acetatom u 50% metanolu i olovnim citratom prema E. S. Reynoldsu. Elektronski mikroskopski preparati proučavani su pomoću elektronskog mikroskopa JEM-1011 (JEOL, Japan) pri povećanjima od 10 000 do 60 000 uz napon ubrzanja od 80 kW. Za dobivanje slika korišten je kompleks digitalnog fotoaparata Olympus MegaViewIII (Njemačka) i softver za obradu slike iTEM (Olympus, Njemačka).

Rezultati i rasprava

HSC se nalaze u perisinusoidalnom prostoru (Disse) u džepovima između hepatocita i endotelnih stanica; imaju duge procese koji prodiru duboko između hepatocita. U većini publikacija posvećenih ovoj populaciji HSC-a, dan je njihov shematski prikaz, dopuštajući samo označavanje "teritorijalne" pripadnosti HSC-a u jetri i u odnosu na njihove "susjede" (Slika 1).

HSC su u bliskom kontaktu s endotelnim stanicama kroz komponente nepotpune bazalne membrane i intersticijska kolagena vlakna. Između SC i parenhimskih stanica prodiru živčani završeci, zbog čega se Disseov prostor definira kao prostor između ploča parenhimskih stanica i

kompleks HCI i endotelnih stanica.

Vjeruje se da HSC potječu od slabo diferenciranih mezenhimalnih stanica u transverzalnom septumu jetre u razvoju. Eksperiment je otkrio da su hematopoetske matične stanice uključene u stvaranje HSC-a i da taj proces nije posljedica spajanja stanica.

Sinusoidalne stanice (SC), prvenstveno HSC, imaju vodeću ulogu u svim vrstama regeneracije jetre. Fibrozirajuća regeneracija jetre nastaje kao rezultat inhibicije matičnih funkcija HSC-a i matičnih stanica koštana srž. U ljudskoj jetri HSC čine 5-15%, te su jedna od 4 varijante SC mezenhimskog porijekla: Kupfferove stanice, endoteliociti i Pb stanice. Pul SC također sadrži 20-25% leukocita.

U citoplazmi HCI nalaze se masne inkluzije s retinolom, trigliceridima, fosfolipidima, kolesterolom, slobodnim masna kiselina, a-aktin i desmin. ZKI se vizualizira bojenjem zlatnim kloridom. Eksperimentom je utvrđeno da je biljeg diferencijacije HKI od ostalih miofibroblasta njihova ekspresija proteina reelina.

HSC postoje u mirnom ("neaktivnom HSC"), prolaznom i dugotrajno aktiviranom stanju, od kojih je svaki karakteriziran ekspresijom gena i fenotipom (α-IgMA, ICAM-1, kemokini i citokini).

HSC u neaktivnom stanju imaju zaobljen, blago izdužen ili nepravilan oblik, veliku jezgru i jasan vizualni znak - lipidne inkluzije (kapljice) koje sadrže retinol (Slika 2).

Broj lipidnih kapljica u neaktivnom HSC-u doseže 30 ili više, male su veličine, priliježu jedna uz drugu, utiskuju se u jezgru i guraju je prema periferiji (slika 2). Male inkluzije mogu se nalaziti između velikih kapi. Boja kapi ovisi o fiksatoru i boji materijala. U jednom su slučaju svijetle (Slika 2a), u drugom su tamnozelene (Slika 2b).

Slika 1. Shema položaja ICH (zvjezdaste stanice, perisinusoidni lipocit) u perisinusoidnom Disseovom prostoru (Disseov prostor), Internet izvor

Slika 2. - CCI koji su u neaktivnom stanju

a - HCI okruglog oblika s visokim sadržajem svijetlih kapljica lipida (bijele strelice), hepatociti (Hz) s devastiranom citoplazmom (crna strelica); b - HCI s tamnim kapljicama lipida u bliskom kontaktu s makrofagom (Mf); a-b - polutanki rezovi. Bojanje azurno II - osnovna magenta. Mikrografije. Povećana 1000; c - HCI s obiljem lipidnih kapljica (više od 30), nepravilnog oblika (magnitude 6000); d-ultrastrukturne komponente HCI: l-lipidne kapi, mitohondriji (narančaste strelice), GRES (zelene strelice), Golgijev kompleks (crvena strelica), sw. 15 000; c-d - elektronogrami

Elektronskom mikroskopijom stvara se osmiofilniji rubni rub na pozadini svijetlog lipidnog supstrata (Slika 5a). U većini "mirujućih" HSC, uz velike lipidne inkluzije, postoji zamjetno mala količina citoplazmatskog matriksa, siromašnog mitohondrijima (Mx) i granularnim endoplazmatskim retikulumom (GRES). Istodobno, jasno su vidljivi odjeljci umjereno razvijenog Golgijevog kompleksa u obliku hrpe od 3-4 spljoštene cisterne s blago proširenim krajevima (slika 2d).

Pod određenim uvjetima, aktivirani HSC dobivaju mješoviti ili prijelazni fenotip, kombinirajući morfološke značajke stanica koje sadrže lipide i stanica sličnih fibroblastima (Slika 3).

Prijelazni fenotip HCI također ima svoje morfološke značajke. Stanica stječe izduženog oblika, smanjuje se broj lipidnih inkluzija, a smanjuje se broj invaginacija nukleolema. Povećava se volumen citoplazme, koja sadrži brojne GRES cisterne s vezanim ribosomima i slobodnim ribosomima, Mx. Postoji hiperplazija komponenti lamelarnog Golgijevog kompleksa, predstavljenog s nekoliko nizova od 3-8 spljoštenih cisterni, povećanje broja lizosoma uključenih u razgradnju

Slika 3. - ZKI, koji su u prijelaznom stanju

a - ZKI (bijele strelice). Napola izrezana. Bojanje azurno II - osnovna magenta. Mikrograf. Povećana 1000; b - ZKI izduženog oblika i s malom količinom lipidnih kapljica; uv. 8000; c - HCI u kontaktu s Kupfferovim stanicama (CC) i limfocitom (Lc), SW. 6000. (Hz - hepatocit, l - kapi lipida, E - eritrocit); d - mitohondriji (narančaste strelice), GRES (zelene strelice), c. Goldji (crvena strelica), lizosomi (plave strelice), magn. b, c, d - uzorci difrakcije elektrona

lipidne kapljice (Slika 3d). Hiperplazija komponenti GRES-a i Golgijevog kompleksa povezana je sa sposobnošću fibroblasta da sintetiziraju molekule kolagena, kao i da ih modeliraju post-translacijskom hidroksilacijom i glikozilacijom u endoplazmatskom retikulumu i elementima Golgijevog kompleksa.

U intaktnoj jetri, HCI, budući da je u mirnom stanju, prekriva sinusoidnu kapilaru svojim procesima. Procesi HCI dijele se u 2 tipa: perisinusoidalni (subendotelni) i interhepatocelularni (Slika 4).

Prvi napuštaju tijelo stanice i protežu se duž površine sinusne kapilare, prekrivajući je tankim prstastim granama. Prekrivene su kratkim resicama i imaju karakteristične dugačke mikroizbočine koje se protežu još dalje duž površine endotelne cijevi kapilara. Interhepatocelularni izdanci, prevladavši ploču hepatocita i dosegnuvši susjedni sinusoid, podijeljeni su u nekoliko perisinusoidnih izdanaka. Dakle, FQI u prosjeku pokriva više od dvije susjedne sinusoide.

Kod oštećenja jetre dolazi do aktivacije HSC i procesa fibrogeneze u kojem se razlikuju 3 faze. Označavaju se kao inicijacija, produljenje i rezolucija (razrješenje fibroznog tkiva). Ovaj proces transformacije "mirujućih" HSC-a u fibrozirajuće miofibroblaste pokreću citokini (^-1, ^-6,

Slika 4. - Perisinusoidalni (subendotelni) i interhepatocelularni procesi (izrasline) HCI

(a) proces izlaska ZKI (žute strelice) iz tijela stanice, uv. 30 000; b - proces HCI, koji se nalazi duž površine sinusoidne kapilare, koji sadrži kap lipida, SW. 30 000; (c) subendotelno smješteni procesi HCI. Procesi endotelnih stanica (ružičaste strelice); d - interhepatocelularni proces HCI; područje destrukcije membrana HCI i hepatocita (crne strelice), natečeno 10 000. Elektronogrami

TOT-a), podoksidirani metabolički produkti, reaktivne vrste kisika, dušikov oksid, endotelin, faktor aktivacije trombocita (PDGF), aktivator plazminogena, transformirajući faktor rasta (TGF-1), acetaldehid i mnogi drugi. Izravni aktivatori su hepatociti u stanju oksidativnog stresa, Kupfferove stanice, endoteliociti, leukociti, trombociti koji proizvode citokine (parakrini signali) i sam ZKI (autokrina stimulacija). Aktivaciju prati ekspresija (uključivanje u rad) novih gena, sinteza citokina i proteina izvanstaničnog matriksa (kolagena I, III, Y tipa).

U ovoj fazi proces aktivacije HSC može biti dovršen stimulacijom stvaranja protuupalnih citokina u HSC, koji inhibiraju proizvodnju TOT-a od strane makrofaga u oštećenom području. Kao rezultat toga, broj HSC-a je naglo smanjen, oni prolaze kroz apoptozu, a procesi fibroze u jetri se ne razvijaju.

U drugoj fazi (produljenoj), uz produljenu konstantnu parakrinu i autokrinu izloženost aktivirajućim podražajima, u HSC-u se "održava" aktivirani fenotip, karakteriziran transformacijom HSC-a u kontraktilne miofibroblastne stanice koje sintetiziraju izvanstanični fibrilarni kolagen.

Aktivirani fenotip karakteriziran je proliferacijom, kemotaksijom, kontraktilnošću, gubitkom zaliha retinoida i stvaranjem stanica nalik miofibroblastičnim stanicama. Aktivirani ZKI također pokazuju povećan sadržaj novi geni kao što su a-SMA, ICAM-1, kemokini i citokini. Aktivacija stanica ukazuje na početak ranog stadija fibrogeneze i prethodi povećanoj proizvodnji ECM proteina. Rezultirajuća fibrozna tkiva podliježu remodeliranju zbog cijepanja matriksa uz pomoć matriksnih metaloproteinaza (matriksmetaloproteinaze - MMP). S druge strane, razgradnju matriksa reguliraju tkivni inhibitori MMP (tkivni inhibitori matriksnih metaloproteinaza - TIMP). MMP i TIMP članovi su obitelji enzima ovisnih o cinku. MMP se sintetiziraju u HSC kao neaktivni proenzimi koji se aktiviraju nakon cijepanja propeptida, ali su inhibirani nakon interakcije s endogenim TIMP-ovima, TIMP-ovima-1 i TIMP-ovima-2. HSC proizvode 4 vrste MMP membranskog tipa koje aktivira IL-1 p. Među MMP-ima posebno je važan MMP-9, neutralna matrična metaloproteinaza, koja djeluje protiv kolagena tipa 4, koji je dio bazalne membrane, kao i protiv djelomično denaturiranih kolagena tipa 1 i 5.

Povećanje populacije HCI s različitim vrstama oštećenja jetre prosuđuje se prema aktivnosti značajnog broja mitogenih čimbenika, srodnih receptora tirozin kinaze i drugih identificiranih mitogena koji uzrokuju najizraženiju proliferaciju HKI: endotelin-1, trombin, FGF - faktor rasta fibroblasta, PDGF - endotelni faktor rasta krvnih žila, IGF - faktor rasta sličan inzulinu. Do nakupljanja HSC u područjima oštećenja jetre dolazi ne samo zbog proliferacije ovih stanica, već i zbog njihove usmjerene migracije u te zone kemotaksijom, uz sudjelovanje kemoatraktanata kao što su PDGF i leukocitni kemoatraktant-MCP (monocitni kemotaktički protein- 1) .

U aktiviranim HSC-ima broj lipidnih kapljica smanjen je na 1-3 s njihovim položajem na suprotnim polovima stanice (Slika 5).

Aktivirani HSC dobivaju izduženi oblik, značajna područja citoplazme zauzima Golgijev kompleks, a otkrivaju se i brojne GRES cisterne (indikator sinteze proteina za izvoz). Broj ostalih organela je smanjen: nalazi se malo slobodnih ribosoma i polisoma, pojedinačni mitohondriji i nepravilni lizosomi (Slika 6).

Godine 2007. HSC su prvi put nazvane matičnim stanicama jetre, budući da izražavaju jedan od markera hematopoetskih mezenhimalnih matičnih stanica, CD133.

Slika 5. - CCI u aktiviranom stanju

a, b - HCI (plave strelice) s pojedinačnim lipidnim inkluzijama lokaliziranim na suprotnim polovima jezgre. Perisinusoidalni vezivno tkivo(na slici 6a) i sloj međustaničnog matriksa oko hepatocita (na slici 6b) obojeni su crveno. Citotoksični limfociti (ljubičaste strelice). Endotelna stanica (bijela strelica). Bliski kontakt između plazma stanica (crvena strelica) i hepatocita. Polutanki krojevi. Bojanje azurno II - osnovna magenta. Mikrografije. Povećana 1000 ; c, d - ultrastrukturne komponente HCI: mitohondriji (narančaste strelice), Golgijev kompleks (crvena strelica), cisterne njegove osmiofilnije cis-strane okrenute proširenim elementima granularnog endoplazmatskog retikuluma (zelene strelice), lizosom (plava strelica) (magn. 10.000 odnosno 20.000); c, d - uzorci difrakcije elektrona

Miofibroblasti, kojih nema u normalnoj jetri, imaju tri potencijalna izvora: prvi je tijekom intrauterinog razvoja jetre; u portalnom traktu miofibroblasti okružuju krvne žile i žučnih vodova tijekom sazrijevanja, a nakon potpunog razvoja jetre, nestaju i u portalnim traktovima bivaju zamijenjeni portalnim fibroblastima; drugi - s oštećenjem jetre, formiraju se zbog portalnih mezenhimskih stanica i HSC-a u mirovanju, rjeđe zbog prijelaznih epitelno-mezenhimalnih stanica. Karakterizira ih prisutnost CD45-, CD34-, Desmin+, glijalnih fibrilarnih proteina povezanih s (GFAP)+ i Thy-1+.

Nedavne studije su pokazale da hepatociti, kolangiociti i endotelne stanice mogu postati miofibroblasti epitelnim ili endotelno-mezenhimalnim prijelazom (EMT). Ove stanice uključuju markere kao što su CD45-, albumin+ (tj. hepatociti), CD45-, CK19+ (tj. kolangiociti) ili Tie-2+ (endotelne stanice).

Slika 6. - Visoka fibrozna aktivnost HSC

a, b - miofibroblast (Mfb), stanica sadrži veliku jezgru, GRES elemente (crvene strelice), brojne slobodne ribosome, polimorfne vezikule i granule, pojedinačne mitohondrije i svijetli vizualizacijski znak - snop aktinskih filamenata u citoplazmi (žuto strelice); odveo. 12.000 i 40.000; c, d, e, f - visoka fibrozna aktivnost HSC sa zadržavanjem lipidnih kapljica koje sadrže retinoid u citoplazmi. Brojni snopovi kolagenih fibrila (bijele strelice) zadržali su (a) i izgubili (d, e, f) specifične poprečne pruge; odveo. 25 000, 15 000, 8 000, 15 000. Elektronogrami

Osim toga, stanice koštane srži, koje se sastoje od fibrocita i cirkulirajućih mezenhimalnih stanica, mogu se transformirati u miofibroblaste. To su CD45+ (fibrociti), CD45+/- (cirkulirajuće mezenhimalne stanice), kolagen tip 1+, CD11d+ i MHC klasa 11+ (Slika 7).

Literaturni podaci potvrđuju ne samo blisku vezu između proliferacije ovalnih stanica i proliferacije sinusoidne stanice, ali i podatke o mogućoj diferencijaciji HSC u jetreni epitel, što je nazvano mezenhimalno-epitelna transformacija perisinusoidnih stanica.

U stanju fibrogene aktivacije, HSC-e slične miofibroblastima, uz smanjenje broja i naknadni nestanak lipidnih kapljica, karakteriziraju žarišna proliferacija (Slika 8), imunohistokemijska ekspresija markera sličnih fibroblastima, uključujući α-aktin glatkih mišića , i stvaranje pericelularnih kolagenih fibrila u Disseovim prostorima.

U fazi razvoja fibroze, sve veća hipoksija jetrenog tkiva postaje čimbenik dodatne prekomjerne ekspresije proupalnih adhezijskih molekula u matičnim stanicama - 1CAM-1, 1CAM-2, VEGF, proupalne

Interakcija duktalnih jetrenih progenitorskih stanica s jetrenim miofibroblastima

HSC slični miofibroblastima u stanju fibrogene aktivacije.

Slika 7. - Sudionici miofibroblastične aktivacije HSC

snažni kemoatraktanti - M-CSF, MCP-1 (monocitni kemotaktički protein-1) i SGS (citokinima posredovan neutrofilni kemoatraktant) i drugi koji stimuliraju stvaranje proupalnih citokina (TGF-b, PDGF, FGF, PAF, SCF, ET-1 ) i pojačavaju procese fibrogeneze u jetri, stvarajući uvjete za samoodrživu indukciju tekuće aktivacije HSC i procesa fibrogeneze.

Na mikroskopskim preparatima perikapilarna fibroza očituje se intenzivnim obojenjem perisinusoidnog vezivnog tkiva i sloja međustaničnog matriksa oko hepatocita (često umirućih) u crveno. Na elektronskim mikroskopskim preparatima fibrozne promjene vizualiziraju se ili u obliku formiranih velikih snopova fibrila kolagenih vlakana koja imaju zadržanu poprečnu ispruganost ili u obliku masivnog

naslage u prostoru Disseove fibrozne mase, koja je natečena kolagena vlakna koja su izgubila svoju periodičnu ispruganost (Slika 9).

Po moderne ideje, fibroza je dinamičan proces koji može napredovati i nazadovati (Slika 10).

Nedavno je predloženo nekoliko specifičnih markera ICD-a: cvjetanje vitamina A (VA) u kapljicama lipida, GFAP, p75 NGF receptor i sinaptofizin. Provode se studije o uključenosti HCI jetre u proliferaciju i diferencijaciju matičnih stanica jetre.

Proučavali smo sadržaj proteina koji veže retinol (RBP-4), koji tvori kompleks s VA, čija koncentracija u krvnoj plazmi normalno korelira s opskrbljenošću tijela VA, od čega je 80% u HCI.

Odnos između sadržaja

Slika 8. - Fokalna proliferacija HSC u stanju fibrogene aktivacije

a - hiperplazija HCI (bijele strelice) u lumenu proširenih sinusoida; b - proliferacija transdiferenciranih HSC (bijele strelice), endotelne stanice (ružičasta strelica). Polutanki krojevi. Bojanje azurno II - osnovna magenta. Mikrografije. Povećana 1000

Slika 9. - Završni stadij miofibroblastične aktivacije HSC

a, b - perisinusoidna fibroza (bijele strelice). Perisinusoidno vezivno tkivo i sloj međustaničnog matriksa oko hepatocita (b) obojeni su crveno bazičnim fuksinom. HSC su se aktivirali i transformirali u fibroblaste (plave strelice). Hz na sl. a - hepatocit s devastiranom citoplazmom. Polutanki krojevi. Bojanje azurno II - osnovna magenta. Mikrografije. Povećana 1000; c, d - perisinusoidna i perihepatocelularna fibroza u režnju jetre, povećana gustoća elektrona fibrila kolagenih vlakana; kondenzacija mitohondrijskog matriksa u hepatocitu (narančasta strelica). Pojačajte 8.000 odnosno 15.000. elektronogrami

Tablica 1. Pokazatelji sadržaja RBP-4 u bolesnika s cirozom jetre (LC) i kroničnim hepatitisom (CH) različite etiologije, ng/ml (M±m)

Skupina n M±m str

Ciroza jetre 17 23,6±2,29<0,05

CG, ASAT norma 16 36,9±2,05* >0,05

CG, ASAT >2 norme 13 33,0±3,04* >0,05

CG, ALT norma 13 37,5±3,02* >0,05

CG, ALT >2 norme 21 35,9±2,25* >0,05

Kontrola 15 31,2±2,82

Napomena: p - značajne razlike u odnosu na kontrolu (str<0,05); * - достоверные различия между ЦП и ХГ (р<0,05)

Lažna lobula okružena fibroznim septumom s fibroznim septumom. Bojanje prema Massu - krug lažnog lobula. Bojanje prema u.Uv.x50 Masson. Povećaj x200

Slika 10 - Dinamika zbivanja u lažnom lobulu bolesnika s virusnom cirozom 6 mjeseci nakon transplantacije autolognih mezenhimalnih matičnih stanica u jetru

Jedem RBP-4 i 4. stadij fibroze (ciroze), za razliku od kroničnog hepatitisa, kod kojeg takva ovisnost nije uočena, bez obzira na biokemijske markere aktivnosti upale u jetri.

Ovu činjenicu potrebno je uzeti u obzir pri utvrđivanju nadomjesne terapije za otklanjanje manjka VA u organizmu, što može biti posljedica iscrpljivanja IKT potencijala zbog progresije fibroze u jetri.

1. Maksimalna učinkovitost procjene strukturnog i funkcionalnog stanja HCI osigurava se morfološkom studijom intravitalnog biopsijskog uzorka uz istodobnu upotrebu kompleksa tehnika vizualizacije stanica (svjetlosna, elektronska mikroskopija ultratankih rezova i originalne metode fiksacija i bojenje).

2. Rezultati morfološke studije HCI omogućuju poboljšanje kvalitete in vivo dijagnoze fibroze, praćenje i predviđanje ishoda kroničnih difuznih lezija jetre na višoj suvremenoj razini.

3. Rezultati morfoloških zaključaka omogućit će kliničaru dodatno uključivanje preciznih podataka o stadiju kroničnosti (stabilizacija, progresija ili povlačenje fibroze) tijekom terapije u formulaciju konačne dijagnoze.

Književnost

1. Ivaškin, V. T. Klinički simptomi prefibrotičkih promjena: transkript predavanja Sveruskog internetskog kongresa specijalista internih bolesti / V. T. Ivaškin, A. O. Bueverov // INTERNIST: Nacionalno internetsko društvo specijalista interne medicine. - 2013. - Način pristupa: http://internist. ru/publications/detail/6569/. - Datum pristupa: 21.11.2016.

2. Kiyasov, A.P. Ovalne stanice - pretpostavljene matične stanice jetre ili hepatoblasti? / A. P. Kiyasov, A. A. Gumerova, M. A. Titova // Stanična transplantologija i tkivno inženjerstvo. - 2006. - V. 2, br. 4. - S. 55-58.

1. Ivashkin, V. T. Klinicheskaya simptomatika dofibroticheskih izmenenij: stenogramma lekcii Vserossijskogo Internet-Kongressa specialistov po vnutrennim boleznyam / V. T. Ivashkin, A. O. Bueverov // INTERNISTA: Nacional "noe Internet-Obshchestvo specialistov po vnutrennim bolezyam. - http: Rezhipa 20 do13. - http : Rezhipa 20 do 13. - //internist.ru/publications/detail/6569/ - Pristup podacima: 21.11.2016.

2. Kiyasov, A. P. Oval "nye kletki - predpolagaemye stvolovye kletki pečeni ili gepatoblasty? / A. P. Kiyasov, A. A. Gumerova, M. A. Titova // Kletochnaya transplantologiya i tkanevaya inzheneriya. - 2006. - T. 2, br. 4. - S. 55 - 58.

3. O ulozi sinusoidnih jetrenih stanica i stanica koštane srži u pružanju regenerativne strategije za zdravu i oštećenu jetru / A. V. Lundup [et al.] // Bulletin of transplantology and artificial organs. -2010. - T. XII, br. 1. - S. 78-85.

4. Serov, V. V. Morfološki kriteriji za procjenu etiologije, stupnja aktivnosti i stadija procesa kod virusnog kroničnog hepatitisa B i C / V. V. Serov, L. O. Severgina // Archives of Pathology. - 1996. - br. 4. - S. 61-64.

5. Strukturne i funkcionalne karakteristike zvjezdastih stanica jetre u dinamici fibroze / OA Postnikova [et al.] // Temeljna istraživanja. - 2011. - br. 10.

6. Ultrastrukturna i imunohistokemijska studija zvjezdastih stanica jetre u dinamici fibroze i ciroze infektivno-virusne geneze / G. I. Nepomnyashchikh [et al.] // Bilten eksperimentalne biologije i medicine. - 2006. - T. 142, br. 12. - S. 681-686.

7. Shcheglev, AI Strukturne i metaboličke karakteristike sinusoidnih jetrenih stanica / AI Shcheglev, OD Mishnev // Uspjesi moderne biologije. - 1991. - V. 3, br. 1. - S. 73-82.

10. Učinci prehrambenih retinoida i triglicerida na lipidni sastav zvjezdastih stanica jetre štakora i lipidnih kapljica zvjezdanih stanica / H. Moriwaki // J. Lipid. Res. - 1988. - Vol. 29. - R. 1523-1534.

13. Friedman, S. Hepatična fibroza 2006: Izvješće treće AASLD konferencije o jednoj temi / S. Friedman, D. Rockey, B. Montgomery // Hepatologija. - 2006. - Vol. 45(1). - R. 242-249.

18. Iredale, J. P. Ponašanje jetrenih zvjezdastih stanica tijekom razrješenja ozljede jetre / J. P. Iredale // Semin. LiverDis. -2001. - Vol. 21(3). - R. 427-436.

19. Kobold, D. Ekspresija reelina u zvjezdastim stanicama jetre i tijekom popravka jetrenog tkiva: novi marker za diferencijaciju HSC od drugih miofibroblasta jetre / D. Kobold // J. Hepatol. - 2002. - Vol. 36(5). - R. 607-613.

20. Lepreux, S. Miofibroblasti ljudske jetre tijekom razvoja i bolesti s fokusom na portal (myo)

3. O roli sinusoidal "nyh kletok pecheni i kletok kostnogo mozga v obespechenii regeneratornoj strategii zdorovoj i povrezhdennoj pecheni / A. V. Lyundup // Vestnik transplantologii i iskusstvennyh organov. - 2010. - T. HII, br. 1. - S. 78-85 .

4. Serov, V. V. Morfologicheskie kriteriji ocenki ehtiologii, stepeni aktivnosti i stadii procesa pri virusnyh chrononicheskih gepatitah V i S / V. V. Serov, L. O. Severgina // Arhiv patologii.

1996. - br. 4. - S. 61-64.

5. Strukturno-funkcionalna "naya harakteristika zvezdchatyh kletok pecheni v dinamike fibroza / O. A. Postnikova // Fundamental" nye issledovaniya. - 2011. - Broj 10. - C. 359-362.

6. Ul "trastrukturnoe i immunogistohimicheskoe issledovanie zvezdchatyh kletok pecheni v dinamike fibroza i cirroza pecheni infekcionno-virusnogo geneza / G. I. Nepomnyashchih // Byulleten" ehksperimental "nojologii i medicine. - 2006. - T. 142, br. 681. - S. - 686.

7. SHCHeglev, A. I. Strukturno-metabolicheskaya harakteristika sinusoidal "nyh kletok pecheni / A. I. SHCHeglev, O. D. Mishnev // Uspekhi sovremennoj biologii. - 1991. - T. 3, br. 1. - S. 73-82.

8. CD34 jetrene zvjezdaste stanice su progenitorske stanice / C. Kordes // Biochem., Biophys. Res. Uobičajen. - 2007. -Vol. 352(2). - Str. 410-417.

9. Razgradnja proteina matriksa u fibrozi jetre / M. J. Arthur // Pathol. Res. Vježbajte. - 1994. - Vol. 190 (9-10).

11. Fetalna jetra sastoji se od stanica u prijelazu iz epitela u mezenhim / J. Chagraoni // Blood. - 2003. - Vol. 101. - P. 2973-2982.

12. Fiksacija, dehidracija i ugradnja bioloških uzoraka / A. M. Glauert // Praktične metode u elektronskoj mikroskopiji. - New York: Am. Elsevier, 1975. - sv. 3, 1. dio.

13. Friedman, S. Hepatična fibroza 2006: Izvješće treće AASLD konferencije o jednoj temi / S. Friedman, D. Rockey, B. Montgomery // Hepatologija. - 2006. - Vol. 45(1). - R. 242-249.

14. Gaga, M. D. Ljudske i rathepatične zvjezdaste stanice proizvode faktor matičnih stanica: mogući mehanizam za regrutiranje mastocita u fibrozi jetre / M. D. Gaga // J. Hepatol. - 1999. - Vol. 30, br. 5. - Str. 850-858.

15. Glauert, A. M. Araldite kao medij za ugradnju za elektronsku mikroskopiju / A. M. Glauert, R. H. Glauert // J. Biophys. Biochem. Cytol. - 1958. - God. 4. - Str. 409-414.

16. Zvjezdaste stanice jetre i portalni fibroblasti glavni su stanični izvori kolagena i lizil oksidaza u normalnoj jetri i rano nakon ozljede / M. Perepelyuk // Am. J Physiol. gastrointest. Liver Physiol. - 2013. - Vol. 304(6). - Str. 605614.

17. Jezgra i nestrukturni proteini virusa hepatitisa C induciraju fibrogene učinke u zvjezdastim stanicama jetre / R. Bataller // Gastroenterologija. - 2004. - Vol. 126, br. 2. - Str. 529-540.

18. Iredale, J. P. Ponašanje jetrenih zvjezdastih stanica tijekom razrješenja ozljede jetre / J. P. Iredale // Semin. LiverDis. -2001. - Vol. 21(3). - R. 427-436.

20. Lepreux, S. Miofibroblasti ljudske jetre tijekom razvoja i bolesti s fokusom na portalne (mio) fibroblaste / S. Lepreux, A. Desmouliére

fibroblasti / S. Lepreux, A. Desmoulière // Front. fiziol. - 2015. - Način pristupa: http://dx.doi. org/10.3389/fphys.2015.00173. - Datum pristupa: 31.10.2016.

22. Transplantacija matičnih stanica dobivenih iz mezenhimske koštane srži u bolesnika s cirozom jetre povezanom s HCV-om / S. Lukashyk // J. Clin. prev. Hepatol. - 2014. - Vol. 2, br. 4. - Str. 217-221.

23. Millonig, G. A. Prednosti fosfatnog pufera za otopine osmij tetroksida u fiksaciji / G. A. Millonig // J. Appl. Fizika. - 1961. - Vol. 32. - P. 1637-1643.

Vol. 158. - P. 1313-1323.

Vol. 24. - Str. 205-224.

29. Querner, F. Der mikroskopische Nachweis von Vitamin Aimanimalen Gewebe. Zur Kenntnis der paraplasmatischen Leberzellen-einschlüsse. Dritte Mitteilung / F. Querner // Klin. Wschr. - 1935. - God. 14. - Str. 1213-1217.

30. Najnovija dostignuća u biologiji miofibroblasta: paradigme za remodeliranje vezivnog tkiva / B. Hinz // Am. J. Pathol. - 2012. - Vol. 180. - P. 1340-1355.

35. Mezotelij izveden iz septuma transverzuma daje porast jetrenim zvjezdastim stanicama i perivaskularnim mezenhimalnim stanicama u razvoju mišje jetre / K. Asahina // Hepatologija. -2011. - Vol. 53. - 983-995.

Vol. 50. - 66-71.

38. Thabut, D. Intrahepatična angiogeneza i remodeliranje sinusoida u kroničnoj bolesti jetre: novi ciljevi za liječenje portalne hipertenzije? / D. Thabut, V. Shah // J. Hepatol. - 2010. - Vol. 53. - Str. 976-980.

39. Wake, K. Jetrene zvjezdaste stanice: Trodimenzionalna struktura, lokalizacija, heterogenost i razvoj / K.

// prednji dio. fiziol. - 2015. - Način pristupa: http://dx.doi. org/10.3389/fphys.2015.00173. - Datum pristupa: 31.10.2016.

21. Ligandi peroksisomskog proliferator-aktiviranog receptora gama mod-ulateprofibrogena i proupalna djelovanja u zvjezdastim stanicama jetre / F. Marra // Gastroenterologija. -2000. - Vol. 119. - Str. 466-478.

23. Millonig, G. A. Prednosti fosfatnog pufera za otopine osmij tetroksida u fiksaciji / G. A. Millonig // J. Appl. Rhysics. - 1961. - Vol. 32. - P. 1637-1643.

24. Podrijetlo i strukturna evolucija ranih proliferirajućih ovalnih stanica u jetri štakora / S. Paku // Am. J. Hepatol. - 2001. (prikaz, stručni).

Vol. 158. - P. 1313-1323.

25. Porijeklo miofibroblasta u fibrozi jetre / D. A. Brenner // Fibrogenesis Tissue Repair. - 2012. - Vol. 5 dodatak 1. - S. 17.

26. Porijeklo i funkcije jetrenih miofibroblasta / S. Lemoinne // Biochim. Biophys. acta. - 2013. - Vol. 1832(7). - Str. 948-954.

27. Pinzani, M. PDGF i transdukcija signala u zvjezdastim stanicama jetre / M. Pinzani // Front. biosci. - 2002. - Vol. 7. - Str. 1720-1726.

28. Popper, H. Distribucija vitamina A u tkivu otkrivena fluorescentnom mikroskopijom / H. Popper // Physiol. vlč. - 1944. (prikaz).

Vol. 24.-R. 205-224.

30. Najnovija dostignuća u biologiji miofibroblasta: paradigme za remodeliranje vezivnog tkiva / B. Hinz // Am. J. Pathol. - 2012. - Vol. 180. - R. 1340-1355.

31. Reynolds, E. S. Upotreba olovnog citrata pri visokom pH kao elektronoprozirne boje u elektronskoj mikroskopiji / E. S. Reynolds // J. Cell. Biol. - 1963. - Vol. 17. - Str. 208-212.

32. Safadi, R. Imunološka stimulacija jetrene fibrogeneze CD8 stanicama i atenuacija transgenim interleukinom-10 iz hepatocita / R. Safadi // Gastroenterologija. - 2004. - Vol. 127(3). - Str. 870-882.

33. Sato, T. Elektronsko mikroskopsko istraživanje uzoraka fiksiranih dulje vrijeme u fosfatnom puferiranom formalinu / T. Sato, I. Takagi // J. Electron Microsc. - 1982. - Vol. 31, br. 4. - Str. 423-428.

34. Senoo, H. Stanice koje skladište vitamin A (zvjezdaste stanice) / H. Senoo, N. Kojima, M. Sato // Vitam. Horm. - 2007. - Vol. 75.

36. Stanciu, A. Novi podaci o ITO stanicama / A. Stanciu, C. Cotutiu, C. Amalinei, Rev. Med. Chir. soc. Med. Nat. Iasi. -2002. - Vol. 107, br. 2. - Str. 235-239.

37. Suematsu, M. Profesor Toshio Ito: vidovnjak u biologiji pericita / M. Suematsu, S. Aiso // Keio J. Med. - 2000 (prikaz, stručni).

Vol. 50.-R. 66-71.

39. Wake, K. Jetrene zvjezdaste stanice: Trodimenzionalna struktura, lokalizacija, heterogenost i razvoj / K. Wake // Proc. Jpn. Akad. Ser. B, Phys. Biol. sci. - 2006. - Vol.

Buđenje // Proc. Jpn. Akad. Ser. B, Phys. Biol. sci. - 2006. - Vol. 82(4). - Str. 155-164.

82(4). - Str. 155-164.

40. Wake, K. In Cells of the Hepatic Sinusoid / K. Wake, H. Senoo // Kupffer Cell Foundation (Rijswijk, Nizozemska). - 1986. - Vol. 1. - Str. 215-220.

41. Watson, M. L. Bojanje isječaka tkiva za mikroelektronike s teškim metalima / M. L. Watson // J. Biophys. Biochem. Cyt. - 1958. - God. 4. - Str. 475-478.

KLINIČKA CITOLOGIJA JETRE: ITO ZVJEZDASTE STANICE (HEPATIČNE ZVJEZDASTE STANICE)

Tsyrkunov V. M, Andreev V. P., Kravchuk R. I., Kandratovich I. A. Obrazovna ustanova "Grodno State Medical University", Grodno, Bjelorusija

Uvod. Uloga Ito zvjezdastih stanica (Hepatic Stellate Cells, HSC) identificirana je kao jedna od vodećih u razvoju fibroze jetre, no upotreba intravitalne vizualizacije HSC struktura u kliničkoj praksi je minimalna.

Cilj rada je na temelju nalaza citološke identifikacije uzoraka intravitalne biopsije jetre prikazati strukturne i funkcionalne karakteristike HSC-a.

Materijali i metode. Primijenjene su klasične metode svjetlosne i elektronske mikroskopije biopsija u okviru originalne tehnike ultratankih rezova, fiksacije i bojenja.

rezultate. Strukturne karakteristike HSC uzoraka biopsije jetre bolesnika s kroničnim hepatitisom C prikazane su na foto ilustracijama svjetlosnog i elektronskog mikroskopa. HSC su prikazani u različitim fazama (mirovanje, aktivacija) i tijekom procesa transformacije u miofibroblaste.

Zaključci. Korištenje originalnih metoda kliničke i morfološke identifikacije i procjene funkcionalnog statusa HSC omogućuje poboljšanje kvalitete dijagnoze i prognoze fibroze jetre.

Sinusoidne stanice (endotelne stanice, Kupfferove stanice, zvjezdaste i jamičaste stanice), zajedno s dijelom hepatocita okrenutim prema lumenu sinusoida, čine funkcionalnu i histološku jedinicu.

endotelne stanice obrubljuju sinusoide i sadrže fenestre, tvoreći stepenastu barijeru između sinusoide i Disseovog prostora. Kupfferove stanice su pričvršćene na endotel.

zvjezdaste stanice jetre nalaze se u Disseovom prostoru između hepatocita i endotelnih stanica. Disse prostor sadrži tkivnu tekućinu koja teče dalje u limfne žile portalnih zona. S povećanjem sinusoidnog tlaka, povećava se proizvodnja limfe u Disseovom prostoru, što igra ulogu u stvaranju ascitesa kršenjem venskog odljeva iz jetre.

Kupfferova stanica sadrži specifične membranske receptore za ligande, uključujući Fc fragment imunoglobulina i C3b komponentu komplementa, koji igraju važnu ulogu u prezentaciji antigena.

Kupfferove stanice se aktiviraju tijekom generaliziranih infekcija ili ozljeda. Oni posebno preuzimaju endotoksin i kao odgovor proizvode niz čimbenika, kao što su faktor nekroze tumora, interleukini, kolagenaza i lizosomske hidrolaze. Ovi čimbenici pojačavaju osjećaj nelagode i malaksalosti. Toksični učinak endotoksina je, dakle, posljedica produkata izlučivanja Kupfferovih stanica, budući da sam po sebi nije toksičan.

Kupfferova stanica također luči metabolite arahidonske kiseline, uključujući prostaglandine.

Kupfferova stanica ima specifične membranske receptore za inzulin, glukagon i lipoproteine. Receptor ugljikohidrata za N-acetilglikozamin, manozu i galaktozu može posredovati u pinocitozi nekih glikoproteina, osobito lizosomalnih hidrolaza. Osim toga, posreduje u preuzimanju imunoloških kompleksa koji sadrže IgM.

U fetalnoj jetri Kupfferove stanice obavljaju eritroblastoidnu funkciju. Prepoznavanje i brzina endocitoze od strane Kupfferovih stanica ovisi o opsoninima, fibronektinu plazme, imunoglobulinima i tuftsinu, prirodnom imunomodulatornom peptidu. Ova "jetrena sita" filtriraju makromolekule različitih veličina. Veliki, trigliceridima zasićeni hilomikroni ne prolaze kroz njih, a manji, trigliceridima siromašni, ali kolesterolom i retinolom zasićeni ostaci mogu prodrijeti u Disseov prostor. Endotelne stanice donekle se razlikuju ovisno o njihovom položaju u lobulu. Pretražna elektronska mikroskopija pokazuje da se broj fenestra može značajno smanjiti s formiranjem bazalne membrane; te su promjene posebno izražene u zoni 3 kod bolesnika s alkoholizmom.

Sinusoidne endotelne stanice aktivno uklanjaju makromolekule i male čestice iz cirkulacije pomoću endocitoze posredovane receptorima. Oni nose površinske receptore za hijaluronsku kiselinu (glavnu polisaharidnu komponentu vezivnog tkiva), kondroitin sulfat i glikoprotein koji na kraju sadrži manozu, kao i receptore tipa II i III za FcIgG fragmente i receptor za protein koji veže lipopolisaharid. Endotelne stanice obavljaju funkciju čišćenja, uklanjaju enzime koji oštećuju tkivo i patogene čimbenike (uključujući mikroorganizme). Osim toga, čiste krv od uništenog kolagena te vežu i apsorbiraju lipoproteine.

zvjezdaste stanice jetre(stanice koje pohranjuju mast, lipociti, Ito stanice). Te se stanice nalaze u subendotelnom Disseovom prostoru. Sadrže dugačke citoplazmatske izdanke od kojih su neki u bliskom kontaktu s parenhimskim stanicama, dok drugi dopiru do nekoliko sinusoida, gdje mogu sudjelovati u regulaciji krvotoka i tako utjecati na portalnu hipertenziju. U normalnoj jetri te su stanice, takoreći, glavno mjesto skladištenja retinoida; morfološki se pojavljuje kao masne kapljice u citoplazmi. Nakon otpuštanja ovih kapljica, zvjezdaste stanice postaju slične fibroblastima. Sadrže aktin i miozin i kontrahiraju se kada su izloženi endotelinu-1 i supstanci P. Kada su hepatociti oštećeni, zvjezdaste stanice gube masne kapljice, proliferiraju, migriraju u zonu 3, dobivaju fenotip sličan onom miofibroblasta i proizvode tip I, III, i IV kolagen, a također i laminin. Osim toga, luče proteinaze stanične matrice i njihove inhibitore, kao što je tkivni inhibitor metaloproteinaza (vidi Poglavlje 19). Kolagenizacija Disseovog prostora dovodi do smanjenja unosa proteinski vezanih supstrata u hepatocit.

Jamičaste ćelije. To su vrlo pokretni limfociti – prirodni ubojice, pričvršćeni na površinu endotela okrenutu prema lumenu sinusoida. Njihovi mikrovilli ili pseudopodiji prodiru kroz endotelnu ovojnicu, povezujući se s mikrovilima parenhimskih stanica u Disseovom prostoru. Te stanice ne žive dugo i obnavljaju se cirkulirajućim krvnim limfocitima koji se diferenciraju u sinusoide. Prikazuju karakteristične granule i vezikule sa štapićima u sredini. Jamičaste stanice imaju spontanu citotoksičnost protiv hepatocita inficiranih tumorom i virusom.

Interakcije sinusoidnih stanica

Postoji složena interakcija između Kupfferovih stanica i endotelnih stanica, kao i između sinusoidnih stanica i hepatocita. Aktivacija stanica Kupferalipolisaharidima inhibira unos hijaluronske kiseline u endotelne stanice. Ovaj učinak je vjerojatno posredovan leukotrienima. Citokini koje proizvode sinusoidne stanice mogu stimulirati ili inhibirati proliferaciju hepatocita.

Međustanična komunikacija može se ostvariti parakrinom sekrecijom i izravnim međustaničnim kontaktima. Poznato je da jetrene perisinusoidne stanice (HPC) uspostavljaju nišu regionalnih matičnih stanica i određuju njihovu diferencijaciju. U isto vrijeme HPC ostaje slabo karakteriziran na molekularnoj i staničnoj razini.

Cilj projekta bio je proučiti interakcije između perisinusoidnih stanica jetre štakora i različitih matičnih stanica kao što su frakcija mononuklearnih stanica krvi iz pupkovine čovjeka (UCB-MC) i multipotencijalne mezenhimalne stromalne stanice izvedene iz koštane srži štakora (BM-MMSC).

Materijali i metode. Štakorski BM-MSC i HPC, ljudske UCB-MC stanice izvedene su standardnim tehnikama. Za proučavanje parakrine regulacije HPC-a ko-kultivirali smo UCB-MC ili BM-MMSC stanice s HPC-om koristeći Boydenove komore i kondicionirani HPC stanični medij. Diferencijalno obilježene stanice su kultivirane, a njihove interakcije promatrane su fazno-kontrastnom fluorescentnom mikroskopijom i imunocitokemijom.

rezultate. Tijekom prvog tjedna uzgoja došlo je do autofluorescencije vitamina A zbog sposobnosti PHC-a da skladišti masti. BM-MMSC pokazao je visoku održivost u svim modelima kokulture. Nakon 2 dana inkubacije u kondicioniranoj podlozi kokulture BM-MMSC s HPC-om primijetili smo promjene u morfologiji MMSC-a - smanjile su se u veličini, a klice su im postale kraće. Ekspresija α-aktina glatkih mišića i desmina bila je slična miofibroblastu - intermedijarnom obliku kulture Ito stanica in vitro. Ove promjene mogu biti posljedica parakrine stimulacije pomoću HPC-a. Najdublji učinak HPC-a na UCB-MC stanice primijećen je u kontaktnoj kokulturi, stoga je važno da UCB-MC stanice stvore izravne kontakte između stanica kako bi održale svoju održivost. Nismo uočili nikakvu fuziju stanica između HPC/UCB i HPC/BM-MMSC stanica u kokulturama. U našim daljnjim eksperimentima planiramo proučavati faktore rasta proizvedene HPC-om za jetrenu diferencijaciju matičnih stanica.

Uvod.

Od posebnog interesa među različitim jetrenim stanicama su perisinusoidne jetrene stanice (Ito stanice). Zbog izlučivanja čimbenika rasta i komponenti izvanstaničnog matriksa stvaraju mikrookruženje hepatocita, a niz znanstvenih istraživanja pokazalo je sposobnost zvjezdastih stanica jetre da tvore mikrookruženje za progenitorske stanice (uključujući i hematopoetske) i utječu na njihovu diferencijaciju u hepatocita. Međustanične interakcije ovih staničnih populacija mogu se odvijati parakrinom sekrecijom faktora rasta ili izravnim međustaničnim kontaktima, međutim, molekularna i stanična osnova ovih procesa ostaje neistražena.

Svrha studije.

Proučavanje mehanizama interakcije Ito stanice s hematopoetskim (HSC) i mezenhimalnim (MMSC) matičnim stanicama u in vitro uvjetima.

Materijali i metode.

Ito stanice štakorske jetre izolirane su dvjema različitim enzimskim metodama. U isto vrijeme, stromalni MMSC su dobiveni iz koštane srži štakora. Mononuklearna frakcija hematopoetskih matičnih stanica izolirana iz krvi ljudske pupkovine. Parakrini učinci Ito stanica proučavani su uzgojem MMSC i HSC u mediju u kojem su rasle Ito stanice, te zajedničkim uzgojem stanica odvojenih polupropusnom membranom. Utjecaj međustaničnih kontakata proučavan je u kokultivaciji stanica. Za bolju vizualizaciju, svaka populacija je označena pojedinačnom fluorescentnom oznakom. Morfologija stanica procijenjena je fazno-kontrastnom i fluorescentnom mikroskopijom. Fenotipske značajke uzgojenih stanica proučavane su imunocitokemijskom analizom.

Rezultati.

Unutar tjedan dana nakon izolacije perisinusoidnih stanica, primijetili smo njihovu sposobnost autofluorescencije zbog njihove sposobnosti nakupljanja masti. Zatim su stanice prešle u međufazu svog rasta i dobile zvjezdasti oblik. U početnim fazama zajedničkog uzgoja Ito stanica s MMSC-ima koštane srži štakora, održivost MMSC-a je održana u svim varijantama uzgoja. Drugog dana, kada su MMSC kultivirani u mediju kulture Ito stanica, morfologija MMSC se promijenila: smanjile su se u veličini, a procesi su se skratili. Ekspresija alfa-glatkog mišićnog aktina i desmina u MMSC-u se povećala, što ukazuje na njihovu fenotipsku sličnost s miofibroblastima, međufazom rasta aktiviranih Ito stanica in vitro. Naši podaci ukazuju na učinak parakrinih čimbenika koje luče Ito stanice na svojstva MMSC-a u kulturi.

Na temelju kokultivacije hematopoetskih matičnih stanica s Ito stanicama, pokazalo se da hematopoetske matične stanice ostaju održive samo pri kontaktnoj kokultivaciji s Ito stanicama. Prema fluorescentnoj analizi mješovitih kultura, fenomen fuzije stanica iz različitih populacija nije otkriven.

Zaključci. Za održavanje vitalnosti hematopoetskih matičnih stanica, prisutnost izravnih međustaničnih kontakata s Ito stanicama je odlučujući čimbenik. Parakrina regulacija primijećena je samo kada su MMSC kultivirani u hranjivom mediju u kojem su rasle Ito stanice. Studija utjecaja specifičnih čimbenika koje proizvode Ito stanice na diferencijaciju HSC i MMSC u staničnoj kulturi planira se provesti u budućim studijama.

Shafigullina A.K., Trondin A.A., Shaikhutdinova A.R., Kaligin M.S., Gazizov I.M., Rizvanov A.A., Gumerova A.A., Kiyasov A.P.
SEI HPE "Kazan Državno medicinsko sveučilište Savezne agencije za zdravstveni i socijalni razvoj"

zvjezdaste stanice. Fibroza jetre: prošlost, sadašnjost i budućnost. Klinička citologija jetre: Ito stelatne stanice

Bibliografska poveznica

anotacija znanstveni članak o fundamentalnoj medicini, autor znanstvenog rada - Tsyrkunov V.M., Andreev V.P., Kravchuk R.I., Kondratovich I.A.

Povezane teme znanstveni radovi o fundamentalnoj medicini, autor znanstvenog rada - Tsyrkunov V.M., Andreev V.P., Kravchuk R.I., Kondratovich I.A.

Tekst znanstvenog rada na temu "Klinička citologija jetre: Ito zvjezdaste stanice"

povezani članci