1

Atlikta kepenų žvaigždžių ląstelių populiacijos ultrastruktūrinė, imunohistocheminė ir morfometrinė analizė infekcinės virusinės kilmės fibrozės ir cirozės vystymosi dinamikoje. Nustatyta fibrogeninė kepenų žvaigždžių ląstelių aktyvacija, kuriai būdingas lipidų lašelių kiekio sumažėjimas ir sinchroniška fibroblastams būdingų savybių raiška – teigiama imunohistocheminė reakcija į lygiųjų raumenų α-aktiną, granuliuoto citoplazminio tinklo hiperplazija ir daugybės periląstelinis formavimasis. kolageno fibrilės. Įrodyta, kad nepaisant laipsniško lipidų turinčių žvaigždžių ląstelių skaičiaus mažėjimo fibrozės vystymosi metu, vis dar reikia palaikyti retinoidų nusėdimo funkciją – sergant kepenų ciroze, lipidų turinčios žvaigždinės ląstelės buvo pažeistos. randama skaidulinėse pertvarose ir skilčių viduje. Buvo padaryta išvada, kad kepenų žvaigždžių ląstelės yra polimorfinė nevienalytė populiacija su Didelis pasirinkimas funkcinė veikla.

fibrogenezė

kepenų žvaigždžių ląstelės

ultrastruktūra

imunohistochemija

1. Balabaud C., Bioulac-Sage P., Desmouliere A. Kepenų žvaigždžių ląstelių vaidmuo kepenų regeneracijoje // J. Hepatol. - 2004. - T. 40. – P. 1023–1026.

2. Brandao D.F., Ramalho L.N.Z., Ramalho F.S. Kepenų cirozė ir kepenų žvaigždžių ląstelės // Acta Cirúrgica Brasileira. - 2006. - T. 21. – P. 54–57.

3. Desmet V.J., Gerber M., Hoofnagle J.H. Lėtinio hepatito klasifikacija: diagnozė, klasifikavimas ir stadijos // Hepatologija. - 1994. - T. 19. - P. 1523-1520.

4. Gabele E., Brenneris D.A., Rippe R.A. Kepenų fibrozė: signalai, vedantys į fibrogeninės kepenų žvaigždžių ląstelės amplifikaciją // Priekis. Biosc. - 2003. - T. 8. – P. 69–77.

5. Geertsas A. Dėl žvaigždžių ląstelių kilmės: mezoderminės, endoderminės ar neuroektoderminės? // J. Hepatol. - 2004. - T. 40. – P. 331–334.

6. Gutierrez-Ruiz M.C., Gomez-Quiroz L.E. Kepenų fibrozė: ląstelių modelio atsakymų paieška // Liver Intern. - 2007. - T. 10. – P. 434–439.

7. Kisseleva T., Brenneris D.A. Kepenų žvaigždžių ląstelių vaidmuo fibrogenezėje ir fibrozės panaikinime // J. Gastroenterol. Hepatol. - 2007. - T. 22.–P. S73–S78.

8. Ryder S.D. Kepenų fibrozės progresavimas pacientams, sergantiems hepatitu C: perspektyvus pakartotinis kepenų biopsijos tyrimas // Žarnos. - 2004. - T. 53. – P. 451–455.

9. Schuppan D., Afdhal N.H. Kepenų cirozė // Lancetas. - 2008. - T. 371. - P. 838-851.

10. Senoo H. Kepenų žvaigždžių ląstelių struktūra ir funkcija // Med. elektronas. mikrosc. - 2004. - T. 37. – P. 3–15.

Kepenų žvaigždžių ląstelės (lipocitai, Ito ląstelės, riebalus kaupiančios kepenų ląstelės) yra išsidėsčiusios Disse erdvėse tarp hepatocitų ir sinusoidų endotelio pamušalo ir vaidina pagrindinį vaidmenį reguliuojant retinoidų homeostazę, nusodindamos iki 80% vitamino A. . Disse erdvė yra didžiausios funkcinės atsakomybės sritis, užtikrinanti transsinusoidinius mainus. Naudojant eksperimentinius modelius ir ląstelių kultūroje, buvo įrodyta, kad kepenų žvaigždžių ląstelės diferencijuojasi į didelius citoplazmos lipidų lašelius, turinčius vitamino A; šis fenotipas aiškinamas kaip „ilsintis“.

Didėjanti reikšmė teikiama žvaigždžių ląstelių vaidmeniui vystantis kepenų fibrozei ir cirozei. Gavusios fibrogeninius dirgiklius, „ilsintis“ žvaigždžių ląstelės „transdiferencijuoja“, įgydamos miofibroblastų tipo fenotipą ir pradeda gaminti kolageną, proteoglikanus ir kitus ekstraląstelinės matricos komponentus. Fibrozė centrinių venų, sinusoidų ar vartų kraujagyslių lygyje riboja normalią kepenų hemodinamiką, todėl ateityje sumažėja metaboliškai efektyvi parenchima. portalinė hipertenzija ir porto-sisteminis manevravimas. Jungiamojo audinio kaupimasis Disse erdvėse sutrikdo normalų metabolinį srautą tarp kraujo ir hepatocitų, trukdydamas cirkuliuojančių makromolekulių klirensui, pakeisdamas tarpląstelinę sąveiką ir sukeldamas kepenų ląstelių disfunkciją.

Yra prieštaringų nuomonių, ar aktyvuotos žvaigždžių ląstelės gali grįžti į ramybės fenotipą. Gauta įrodymų, kad kepenų fibrogeninės žvaigždžių ląstelės gali iš dalies suvienodinti aktyvacijos procesą, pavyzdžiui, kai veikia retinoidai arba kai sąveikauja su ekstraląstelinės matricos komponentais, įskaitant I tipo fibrilinį kolageną arba bazinės membranos komponentus. Šios problemos sprendimas yra fibrozės grįžtamumo problema ir terapinių kepenų cirozės gydymo metodų kūrimas.

Tyrimo tikslas- atlikti išsamų kepenų žvaigždžių ląstelių struktūrinių ir funkcinių ypatybių fibrozinių pokyčių dinamikos tyrimą lėtinės HCV infekcijos modelyje.

Medžiaga ir tyrimo metodai

Atliktas išsamus šviesoptinis, elektronmikroskopinis ir morfometrinis kepenų biopsijos mėginių tyrimas sergant lėtine HCV infekcija įvairiose fibrozinių pakitimų stadijose (100 mėginių, suskirstytų į 4 lygias grupes pagal fibrozės sunkumą). Svarbu pažymėti, kad lipidų turinčios žvaigždinės ląstelės geriausiai vizualizuojamos ant pusiau plonų pjūvių, fibrogeninės žvaigždžių ląstelės – tik ant itin plonų pjūvių arba naudojant imunohistocheminį vaizdą.

Kepenų mėginiai buvo fiksuoti 4 % paraformaldehido tirpale, atšaldytame iki 4°C, paruoštame Millonig fosfatiniame buferyje (pH 7,2-7,4); parafino sekcijos buvo nudažytos hematoksilinu ir eozinu kartu su Perlso reakcija, pasak van Giesono, papildomai nudažant elastines skaidulas Weigerto rezorcinolio fuksinu, ir atlikta PAS reakcija. Pusiau plonos sekcijos buvo nudažytos Schiff reagentu ir Azure II. Tyrimas atliktas universaliu mikroskopu Leica DM 4000B (Vokietija). Mikrografijos buvo padarytos naudojant Leica DFC 320 skaitmeninę kamerą ir Leica QWin programinę įrangą. Itin plonos pjūviai, kontrastingi su uranilo acetatu ir švino citratu, buvo tiriami JEM 1010 elektroniniu mikroskopu, esant 80 kW greitėjimo įtampai.

Kepenų fibrozės stadija buvo nustatyta 4 balų skalėje, pradedant nuo vartų fibrozės (I stadija) iki cirozės, kai susidaro porto-centralinės kraujagyslinės pertvaros ir mazginė parenchimos transformacija. Kepenų žvaigždžių ląstelės ir kiti matricą gaminantys ląstelių elementai buvo aptikti fibrozės vystymosi dinamikoje, ekspresuojant lygiųjų raumenų α-aktiną.

Lygiųjų raumenų α-aktino ekspresija matricą gaminančiose kepenų ląstelėse buvo išbandyta naudojant dviejų pakopų netiesioginės imunoperoksidazės metodą su neigiama kontroline streptavidino-biotino vaizdavimo sistema reakcijos produktams. Kaip pirminiai antikūnai buvo naudojami pelių monokloniniai antikūnai prieš lygiųjų raumenų α-aktiną (NovoCastra Lab. Ltd, JK), praskiedus santykiu 1:25; kaip antriniai antikūnai – universalūs biotinilinti antikūnai. Imunohistocheminės reakcijos produktai buvo vizualizuoti naudojant diaminobenzidiną, po to sekcijos buvo nudažytos Mayer hematoksilinu. Lipidų turinčių žvaigždžių ląstelių tankis buvo įvertintas pusiau plonose pjūviuose 38 000 µm2 regėjimo lauko vienete. Statistiniam duomenų apdorojimui buvo naudojamas Stjudento t testas; palyginamų parametrų skirtumai buvo laikomi reikšmingais, jei paklaidos tikimybė P buvo mažesnė nei 0,05.

Tyrimo rezultatai ir diskusija

Esant minimaliems fibroziniams kepenų pakitimams pacientų, sergančių lėtinis hepatitas C, kaip taisyklė, randama gana daug žvaigždžių ląstelių, kurios aiškiai matomos tik pusiau plonose ir itin plonose dalyse ir yra diferencijuojamos Disse erdvėse dėl didelių lipidų lašų citoplazmoje. Žvaigždžių ląstelių transformaciją iš „ilsisi“, turinčių retinoidų, į fibrogenines lydi laipsniškas lipidų lašelių skaičiaus mažėjimas. Šiuo atžvilgiu tikrasis žvaigždžių ląstelių skaičius gali būti nustatytas naudojant išsamų elektronų mikroskopinį ir imunohistocheminį tyrimą.

Ant pradiniai etapai fibrozė (0, I) sergant lėtiniu hepatitu C tiriant pusiau plonus pjūvius, kepenų žvaigždžių ląstelių populiacija pasižymėjo ryškiu polimorfizmu – labai skyrėsi lipidų lašelių dydis, forma, skaičius ir jų tintorinės savybės: dėmesį patraukė lipidų turinčios medžiagos osmiofiliškumas skirtingose ​​ląstelėse. Kepenų žvaigždžių ląstelių skaičiaus tankis, vizualizuotas preparatuose pagal citoplazminių lipidų lašelius, buvo 5,01 ± 0,18 regėjimo lauko vienetui.

Žvaigždžių ląstelių ultrastruktūros ypatybės yra susijusios su lipidų lašelių elektronų tankio nevienalytiškumu ne tik toje pačioje ląstelėje, bet ir tarp skirtingų lipocitų: elektronams skaidraus lipidinio substrato fone išsiskyrė labiau osmiofilinis kraštinis kraštas; be to, branduoliai yra ryškiai polimorfiški, o citoplazminių procesų trukmė buvo įvairi. Tarp lipidų turinčių žvaigždžių ląstelių ultrastruktūrinių ypatybių, kartu su lipidų lašeliais, galima pastebėti labai nedidelį citoplazminės matricos kiekį, kuriame nėra membraninių organelių, įskaitant mitochondrijas, todėl, matyt, šis lipocitų fenotipas vadinamas " poilsis“ arba „pasyvus“.

II ir III fibrozės stadijose daugumos žvaigždžių ląstelių ultrastruktūra įgavo vadinamąjį mišrų arba pereinamąjį fenotipą – tuo pačiu metu buvo lipidų turinčių ir į fibroblastus panašių ląstelių morfologiniai požymiai. Tokiuose lipocituose branduoliuose buvo gilios nukleolemos invaginacijos, didesnis branduolys ir padidėjęs citoplazmos tūris, sulaikantis lipidų lašelius. Tuo pačiu metu smarkiai išaugo granuliuoto citoplazminio tinklo mitochondrijų, laisvųjų ribosomų, polisomų ir kanalėlių skaičius. Paprastai buvo lipidų lašelių ir mitochondrijų membraninis kontaktas, rodantis lipidų „panaudojimą“. Daugelyje ląstelių lipidų lašelių skaidymas buvo atliktas susidarant autofagosomoms, kurios vėliau pašalinamos egzocitozės būdu. Kai kuriais atvejais buvo pastebėtas mišraus fenotipo žvaigždžių ląstelių proliferacija.

Matricą gaminančios žvaigždinės ląstelės, kurių daugiausia kepenų cirozės stadijoje, pasižymėjo visišku lipidų granulių nebuvimu, į fibroblastus panašia forma, išsivysčiusiu baltymus sintezuojančiu skyriumi ir susitraukiančių fibrilinių struktūrų susidarymu citoplazmoje; tarpląsteliniu būdu Disse erdvėse buvo lokalizuota daugybė kolageno fibrilių pluoštų su specifine skersine juostele.

Apskritai, progresuojant lėtiniam hepatitui C, kartu su intralobuline perisinusoidine fibrogeneze, buvo morfologinės savybės kepenų žvaigždžių ląstelių aktyvacija, jų transformacija iš vadinamųjų „pasyviųjų“, kaupiančių vitaminą A, į fibrogenines ir dauginasi ląsteles.

Transformacijos į kepenų cirozę stadijoje reikšmingai sumažėjo lipidų turinčių žvaigždžių ląstelių tankis, o tai rodo jų fibrogeninę transformaciją. Tačiau susidarius kepenų cirozei, pavieniais atvejais buvo kepenų parenchimos sričių su perisinusoidinėmis lipidų turinčiomis žvaigždinėmis ląstelėmis. Be to, viename mėginyje periportaliniame pluoštiniame audinyje buvo rasta daug lipocitų, o tai tikriausiai rodo svarbų žvaigždžių ląstelių vaidmenį retinoidų metabolizme organizme, net ir organų cirozės stadijoje. Be to, atrodo, kad žvaigždinės ląstelės atlieka daugybę kitų funkcijų, jos taip pat randamos ekstrahepatiniuose organuose, tokiuose kaip kasa, plaučiai, inkstai ir žarnos, ir yra nuomonė, kad kepenų ir ekstrahepatinės žvaigždžių ląstelės sudaro išplitusią žvaigždžių ląstelių sistemą. kūnas, panašus į APUD sistemą. Pavyzdžiui, nepaisant fibrogeninių žvaigždžių ląstelių susiejimo su kepenų ciroze, jų aktyvinimas gali būti naudingas ūminio sužalojimo atveju, nes rezultatas yra tinkama stromos grandinė parenchiminių ląstelių regeneracijai.

Perihepatoceliulinės fibrozės sunkumas sergant lėtine HCV infekcija, remiantis morfometrine analize, turėjo reikšmingą atvirkštinę koreliaciją su lipidų turinčių žvaigždžių ląstelių tankiu - III fibrozės stadijoje ir organų ciroze jis buvo 0,20 ± 0,03 regėjimo lauke. vienetas, kuris yra žymiai mažesnis (r< 0,05), чем на стадиях фиброза 0 - I (5,01 ± 0,18) и II (2,02 ± 0,04).

Matricą gaminančių kepenų ląstelių fibrogeninis aktyvumas buvo išbandytas naudojant imunohistocheminį lygiųjų raumenų alfa-aktino ekspresijos tyrimą. Aktyvuotų žvaigždžių ląstelių citoplazmoje buvo rasta įvairaus intensyvumo imunohistocheminių reakcijų produktų, lokalizuotų kepenų skilčių viduje. Ypač reikšminga lygiųjų raumenų α-aktino ekspresija buvo pastebėta portalų zonų fibroblastų ir miofibroblastų citoplazmoje, kraujagyslių lygiųjų raumenų ląstelėse ir miofibroblastuose aplink centrines venas.

Dauguma duomenų apie ląstelinius fibrogenezės mechanizmus gaunama iš tyrimų su kepenų žvaigždžių ląstelėmis, tačiau akivaizdu, kad įvairios matricą gaminančios ląstelės (kiekviena turi specifinę lokalizaciją, imunohistocheminį ir ultrastruktūrinį fenotipą) prisideda prie kepenų fibrozės vystymosi. Tai apima vartų takų fibroblastus ir miofibroblastus, kraujagyslių lygiųjų raumenų ląsteles ir miofibroblastus aplink centrines venas, kurie aktyvuojami esant lėtiniam kepenų pažeidimui.

Išvada

Įrodytas kepenų žvaigždžių ląstelių vaidmuo organų fibrozės vystymuisi sergant lėtiniu hepatitu C. Fibrozei progresuojant lipidų turinčių žvaigždžių ląstelių skaitinis tankis ženkliai mažėja, o dalis populiacijos išlaiko vadinamąjį „poilsio būseną“. Metabolinės funkcijos fenotipas. „Miofibroblastų tipo“ kepenų žvaigždžių ląstelės, esančios fibrogeninės aktyvacijos būsenoje, pasižymi šiomis struktūrinėmis ir funkcinėmis savybėmis: lipidų lašelių skaičiaus sumažėjimas ir vėlesnis išnykimas, granuliuoto citoplazminio tinklo ir mitochondrijų hiperplazija, židinio proliferacija, imunohistocheminė ekspresija. į fibroblastus panašių savybių, įskaitant lygiųjų raumenų α-aktiną, ir periląstelinio kolageno fibrilių susidarymą Disse erdvėse.

Taigi, kepenų žvaigždžių ląstelės yra ne statiška, o dinamiška populiacija, tiesiogiai susijusi su intralobulinės perihepatoceliulinės matricos remodeliavimu.

Recenzentai:

Vavilinas V.A., medicinos mokslų daktaras, profesorius, vadovas. Vaistų metabolizmo laboratorija, Molekulinės biologijos ir biofizikos tyrimų institutas, Rusijos medicinos mokslų akademijos Sibiro skyrius, Novosibirskas;

Kliveris E.E., medicinos mokslų daktaras, vadovaujantis mokslo darbuotojas, Novosibirsko kraujotakos patologijos tyrimų instituto Patomorfologijos ir elektroninės mikroskopijos laboratorija, pavadinta akademiko E.N. Meshalkin iš Rusijos Federacijos sveikatos ir socialinės plėtros ministerijos, Novosibirskas.

Darbą redakcija gavo 2011 metų rugpjūčio 15 dieną.

Bibliografinė nuoroda

Postnikova O.A., Nepomnyashchikh D.L., Aidagulova S.V., Vinogradova E.V., Kapustina V.I., Nokhrina Zh.V. KEPENŲ ŽVAIGŽDĖS LĄSTELIŲ STRUKTŪRINĖS IR FUNKCINĖS CHARAKTERISTIKOS FIBROZĖS DINAMIKOJE // Pagrindinis tyrimas. - 2011. - Nr.10-2. – P. 359-362;
URL: http://fundamental-research.ru/ru/article/view?id=28817 (prisijungimo data: 2020-01-30). Atkreipiame jūsų dėmesį į leidyklos „Gamtos istorijos akademija“ leidžiamus žurnalus

Pagrindinis endotoksinų šaltinis organizmeyra gramneigiama žarnyno flora. Šiuo metu neabejotina, kad kepenys yra pagrindinis organas endotoksinų valymas. Endotoksiną pirmiausia pasisavina ląstelė Kami Kupffer (KK), sąveikaujantis su membranos receptoriumi CD 14. Gali prisijungti prie receptoriaus kaip pats lipopolisacharidas(LPS), ir jo kompleksas su lipidą A jungiančiu baltymu plazmos gumulas. LPS sąveika su kepenų makrofagais sukelia reakcijų kaskadą, pagrįstą jų gamyba ir išsiskyrimu. citokinų ir kitų biologiškai aktyvių jonų tarpininkai.

Yra daug publikacijų apie makro vaidmenįkepenyse (LK) įsisavinant ir pašalinant bakterijų LPS, tačiau endotelio sąveika su kitais mezenchiminė ląstelės, ypač perisinusoidinis Ito ląstelių, praktiškai nėra tiriamas.

TYRIMO METODAS

Baltiesiems žiurkių patinams, sveriantiems 200 g, buvo sušvirkšta į pilvaplėvės ertmę 1 ml sterilaus fiziologinio tirpalo. labai išgrynintas liofilizuotas LPS E. coli padermė 0111 0,5 dozėmis,2,5, 10, 25 ir 50 mg/kg. 0,5, 1, 3, 6, 12, 24, 72 valandų ir 1 savaitės laikotarpiais vidaus organai buvo pašalinti anestezijos metu ir patalpinti į buferinį 10% formaliną. Medžiaga buvo įterpta į parafino blokus. 5 µm storio pjūviai buvo nudažyti imunohistocheminisstreptavidinas-biotinas antikūnų prieš desminą metodu, α - sklandžiai - raumenų aktinas (A-GMA) ir branduolinis antigenas gerai besidauginančios ląstelės ( PCNA“, Dako"). Desminas buvo naudojamas kaip žymeklis perisinusoidinisIto ląstelės, A-GMA - kaipžymeklis ve miofibroblastai, PCNA - proliferuojančios ląstelės. Norint nustatyti endotoksiną kepenų ląstelėse, išgrynintas anti-Re-glikolipidasantikūnų (Bendrosios ir klinikinės patologijos institutas KDO, Maskva).

TYRIMO REZULTATAI

Vartojant 25 mg/kg ir didesnę dozę, šokas buvo pastebėtas praėjus 6 valandoms po LPS vartojimo. mirtinas. Ūmus LPS poveikis kepenų audiniams sukėlė Ito ląstelių aktyvavimą, kuris pasireiškė jų skaičiaus padidėjimu. Skaičius desminpozityvus ląstelės padidėjo nuo 6 valandų po LPS injekcijos ir pasiekė maksimumą ma iki 48-72 h (1 pav., a, b).

Ryžiai. 1. Žiurkių kepenų skyriai sy, apdorotas LSAB -aš- chennymiantikūnai prieš des mano(grupė α - sklandžiai gimdos kaklelio aktinas (c), x400 (a, b) x200 (c).

a – prieš įvedant endotoksinąįjungtas, vienišas desminpozityvusIto ląstelės periportalinėje zonoje; b– 72 valpo endotoksino vartojimo apie: daug desminpozityvus Ito ląstelės; in- 120 valandų po en įvedimo dotoksinas: α - lygiųjų raumenų yra tik aktinoco lygiųjų raumenų ląstelėse kah laivai.

1 savaitės numeris desminpozityvus Ląstelių sumažėjo, betbuvo didesnis nei etaloniniai rodikliai. At Šiuo atveju mes nepastebėjome išvaizdos A-GMA teigiamas ląstelės sinusuose dah kepenys. vidinis teigiamas kontrolė, kai dažomas antikūnais prieš A-GMA padeda nustatyti lygiųjų raumenų ląstelesvartų takų veninės kraujagyslės, kuriose yra A-GMA (1 pav., in). Todėl, nepaisant Ito ląstelių skaičiaus padidėjimo, vieną kartą LPS poveikis nesukelia transformacijos ( transdiferenciacija) į miofibroblastus.

Ryžiai. 2. Kepenų sekcijosžiurkės, gydomos LSAB - pažymėti antikūnai prieš PCNA. a – prieš įvedant en dotoksinas: vienasdauginančių genų patocitų, x200; b - 72 valandos po endotoksino įvedimo: daug proliferuojančių hepatocitų, x400.

Didėjantis kiekis desminpozityvus ląstelės prasidėjo portalo zonoje. Nuo 6 iki 24 val. po LPS vartojimo perisinusoidinis ląstelės buvo aptiktos tik aplink portalų traktus, t.y. 1-oje aci zonoje noosa. 48-72 val., kai buvo pastebėtos aguonosmaksimalus kiekis desminpozityvus klijai srovė, jie atsirado ir kitose acinus zonose; nepaisant to, dauguma Ito ląstelių vis dar buvo periportaliai.

Galbūt taip yra dėl to, kad periportaliaiesančios CC fiksuoja pirmieji endotoksinas, patenkantis iš žarnyno per vartų veną arba iš sisteminės kraujotakos. Ak tityvuotas QC gamina platų asortimentą citokinų, kurie, kaip manoma, skatina Ito ląstelių aktyvavimą ir transdiferenciacija juos į miofibroblastus. Akivaizdu, kad todėl Ito ląstelės, esančios šalia aktyvuotų kepenų makrofagų (1-oje acinuso zonoje), pirmosios reaguoja į citokinų išsiskyrimą. Tačiau savo tyrime jų nepastebėjome. transdiferenciacija in miofibroblastai, ir tai rodo, kad CK ir hepatocitų išskiriami citokinai gali būti veiksnys, palaikantis jau prasidėjusį procesą. transdiferenciacija, bet jie tikriausiai negali to sukelti, kai kepenys veikia vienu LPS.

Ląstelių proliferacinio aktyvumo padidėjimas taip pat buvo pastebėtas daugiausia 1-oje acinuso zonoje. Tai tikriausiai reiškia, kad visi (arba beveik visi) procesai yra skirti apie- ir parakrininis tarpląstelinės sąveikos reguliavimas, tęsiasi periportalinėse zonose. Pastebėtas proliferuojančių ląstelių skaičiaus padidėjimas praėjus 24 val. po LPS vartojimo; teigiamų ląstelių skaičius padidėjo iki 72 val. (maksimalus proliferacinis aktyvumas, 2 pav. a, b). Daugėjo ir hepatocitai, ir sinusoidinės ląstelės. Tačiau dažymas PCNA neduoda gebėjimas nustatyti proliferacijos tipą vairuojant sinusoidines ląsteles. Remiantis literatūra, endotoksino veikimas padidina QC numeris. Jie mano, kad tai apie gaunama tiek dėl kepenų makrofagų dauginimosi, tiek dėl monocitų migracijos iš kitų organų. CK išskiriami citokinai gali padidinti Ito ląstelių proliferacinį pajėgumą. Todėl logiška manyti, kad besidauginančias ląsteles vaizduoja perisinusoidinis Ito ląstelės. Mūsų užfiksuotas jų skaičiaus padidėjimas, matyt, būtinas norint padidinti augimo faktorių sintezę ir atkurti tarpląstelinę matricą pažeidimo sąlygomis. Tai gali būti viena iš kompensacinių-regeneracinių kepenų reakcijų grandžių, nes Ito ląstelės yra pagrindinis ekstraląstelinės matricos komponentų, kamieninių ląstelių faktoriaus ir hepatocitų augimo faktoriaus, dalyvaujančių atstatyme ir diferenciacijoje, šaltinis. rovka kepenų epitelio ląstelės. Nėra ta pati Ito ląstelių transformacija į miofibroblastai rodo, kad vieno endotoksinų agresijos epizodo nepakanka kepenų fibrozei išsivystyti.

Taigi, ūminis endotok poveikis sina sukelia skaičiaus padidėjimą desminpozityvus Ito ląstelės, kurios yra netiesioginis kepenų pažeidimo požymis. Kiekis perisinusoidinis ląstelių padaugėja, matyt, dėl jų dauginimosi. Vienas endotoksinų agresijos epizodas sukelia apsisukimą mano aktyvinimas perisinusoidinis Ito ląstelės ir nepriveda prie transdiferenciacijaį miofibroblastus. Šiuo atžvilgiu galima daryti prielaidą, kad aktyvavimo mechanizmuose ir transdiferenciacija Ito ląstelėse dalyvauja ne tik endotoksinas ir citokinai, bet ir kai kurie kiti tarpląstelinės sąveikos veiksniai.

LITERATŪRA

1. Majanskis D.N., Wisse E., Decker K. // Naujos sienos hepatologija. Novosibirskas, 1992 m.

2. Salachovas I.M., Ipatovas A.I., Konevas J.V., Jakovlevas M.Y. // Sėkmės modernus, biol. 1998. T. 118, leidimas. 1. S. 33-49.

3. Jakovlevas M. Yu. // Kazanė . m vienetų žurnalas 1988. Nr. 5. S. 353-358.

4. Freudenbergas N., Piotraschke J., Galanos C. et al. // Virchows Arch. [b]. 1992 m. t. 61.P. 343-349.

5. Gressneris A. M. // Hepatogastronerologija. 1996 t. 43. P. 92-103.

6. Schmidtas C, Bladt F., Goedecke S. ir kt. // Gamta. 1995 t. 373, Nr.6516. P. 699-702.

7. protingas E., Braet F., Luo D. ir kt. // Toksikolis. Pathol. 1996 m. t. 24, Nr.1. P. 100-111.

Raktažodžiai

Kepenys / ITO STAR CELLS/ MORFOLOGIJA / CHARAKTERISTIKOS / VITAMINAS A / FIBROZĖ

anotacija mokslinis straipsnis apie fundamentinę mediciną, mokslinio darbo autorius - Tsyrkunovas V.M., Andrejevas V.P., Kravčukas R.I., Kondratovičius I.A.

Įvadas. Ito žvaigždžių ląstelių (ISC) vaidmuo apibrėžiamas kaip vienas iš pirmaujančių kepenų fibrozės vystymuisi, tačiau intravitalinė ITO struktūros vizualizacija klinikinė praktika naudotas minimaliai. Darbo tikslas: remiantis intravitalinių kepenų biopsijos mėginių citologinio identifikavimo rezultatais, pateikti HCI struktūrines ir funkcines charakteristikas. Medžiagos ir metodai. Naudoti klasikiniai biopsijos mėginių šviesos ir elektroninės mikroskopijos metodai bei originalūs metodai, naudojant itin plonus pjūvius, fiksavimą ir dažymą. Rezultatai. Lėtiniu hepatitu C sergančių pacientų kepenų biopsijos mėginių šviesos ir elektroninės mikroskopijos fotoiliustracijos rodo struktūrines HSC ypatybes įvairiuose etapuose (poilsio, aktyvacijos) ir virsmo miofibroblastais procese. Išvados. Originalių HCI klinikinio morfologinio identifikavimo ir funkcinės būklės vertinimo metodų panaudojimas pagerins kepenų fibrozės diagnostikos ir prognozavimo kokybę.

Susijusios temos fundamentinės medicinos moksliniai darbai, mokslinio darbo autorius - Tsyrkunovas V.M., Andrejevas V.P., Kravčukas R.I., Kondratovičius I.A.

• Klinikinė kepenų citologija: Kupffer ląstelės

  2017 / Tsyrkunovas V.M., Andrejevas V.P., Kravčiukas R.I., Prokopčikas N.I.

• Autologinių mezenchiminių kamieninių ląstelių, persodintų į kepenis sergant virusine ciroze, morfologinio poveikio stebėjimas (klinikinis stebėjimas)

  2018 / Aukashnk S.P., Alenikova O.V., Tsyrkunov V.M., Isaykina Ya.I., Kravchuk R.I.

• Klinikinė kepenų morfologija: nekrozė

  2017 / Tsyrkunov V.M., Prokopchik N.I., Andreev V.P., Kravchuk R.I.

• Kepenų žvaigždžių ląstelių polimorfizmas ir jų vaidmuo fibrogenezėje

  2008 / Aidagulova S.V., Kapustina V.I.

• Sinusoidinių kepenų ląstelių struktūra pacientams, užsikrėtusiems ŽIV / hepatito C virusu

  2013 / Matievskaya N. V., Tsyrkunov V. M., Kravchuk R. I., Andreev V. P.

• Mezenchiminės kamieninės ląstelės kaip perspektyvus metodas kepenų fibrozei/cirozei gydyti

  2013 / Lukashik S. P., Aleinikova O. V., Tsyrkunov V. M., Isaykina Ya. I., Romanova O. N., Shimansky A. T., Kravchuk R. I.

• Žiurkių kepenų miofibroblastų išskyrimas ir auginimas eksplantacijos būdu

  2012 / Miyanovich O., Shafigullina A. K., Rizvanov A. A., Kiyasov A. P.

• Patologiniai kepenų fibrozės susidarymo aspektai sergant HCV infekcija ir kitais kepenų pažeidimais: šiuolaikinės koncepcijos

  2009 / Lukašikas S. P., Tsyrkunovas V. M.

• Žiurkių miofibroblastų, gautų iš kepenų vartų takų struktūrų eksplantacijos būdu, analizė

  2013 / Miyanovich O., Katina M. N., Rizvanov A. A., Kiyasov A. P.

• Persodintos kepenų žvaigždžių ląstelės dalyvauja organų regeneracijoje po dalinės hepatektomijos be pavojaus išsivystyti kepenų fibrozei

  2012 / Shafigullina A. K., Gumerova A. A., Trondin A. A., Titova M. A., Gazizov I. M., Burganova G. R., Kaligin M. S., Andreeva D. I., Rizvanov A. A., Mukhammedov A. R., Kiyasov A. P.

įžanga. Ito žvaigždžių ląstelių (Hepatic Stellate Cells, HSC) vaidmuo buvo nustatytas kaip vienas iš pirmaujančių kepenų fibrozės vystymosi srityje, tačiau klinikinėje praktikoje HSC struktūrų intravitalinės vizualizacijos naudojimas yra minimalus. Darbo tikslas – remiantis intravitalinių kepenų biopsijos mėginių citologinės identifikacijos išvadomis, pateikti struktūrinę ir funkcinę HSC charakteristiką. medžiagos ir metodai. Taikyti klasikiniai biopsijos mėginių šviesos ir elektroninės mikroskopijos metodai, naudojant originalią ultraplonų pjūvių, fiksavimo ir dažymo metodiką. rezultatus. Lėtiniu hepatitu C sergančių pacientų kepenų biopsijos mėginių HSC struktūrinės charakteristikos pateiktos šviesos ir elektroninės mikroskopijos nuotraukų iliustracijose. HSC vaizduojami skirtinguose etapuose (poilsio, aktyvacijos) ir transformacijos į miofibroblastus proceso metu. Išvados. Originalių HSC klinikinio ir morfologinio identifikavimo ir funkcinės būklės vertinimo metodų panaudojimas leidžia pagerinti kepenų fibrozės diagnostikos ir prognozės kokybę.

Mokslinio darbo tekstas tema „Klinikinė kepenų citologija: Ito stellate ląstelės“

UDC 616.36-076.5

KLINIKINĖ KEPENŲ CITOLOGIJA: ITO žvaigždžių ląstelės

Tsyrkunovas V. M. ( [apsaugotas el. paštas]), Andrejevas V.P. ( [apsaugotas el. paštas]), Kravčiukas R. I. ( [apsaugotas el. paštas]), Kondratovičius I. A. ( [apsaugotas el. paštas]) EE "Grodino valstybinis medicinos universitetas", Gardinas, Baltarusija

Įvadas. Ito žvaigždžių ląstelių (ISC) vaidmuo apibrėžiamas kaip vienas iš pirmaujančių vystant fibrozę kepenyse, tačiau klinikinėje praktikoje intravitalinė ITO struktūros vizualizacija naudojama minimaliai.

Darbo tikslas: remiantis intravitalinių kepenų biopsijos mėginių citologinio identifikavimo rezultatais, pateikti HCI struktūrines ir funkcines charakteristikas.

Medžiagos ir metodai. Naudoti klasikiniai biopsijos mėginių šviesos ir elektroninės mikroskopijos metodai bei originalūs metodai, naudojant itin plonus pjūvius, fiksavimą ir dažymą.

Rezultatai. Lėtiniu hepatitu C sergančių pacientų kepenų biopsijos mėginių šviesos ir elektroninės mikroskopijos fotoiliustracijos rodo struktūrines HSC ypatybes įvairiuose etapuose (poilsio, aktyvacijos) ir virsmo miofibroblastais procese.

Išvados. Originalių HCI klinikinio morfologinio identifikavimo ir funkcinės būklės vertinimo metodų panaudojimas pagerins kepenų fibrozės diagnostikos ir prognozavimo kokybę.

Raktažodžiai: kepenys, Ito žvaigždžių ląstelės, morfologija, savybės, vitaminas A, fibrozė.

Įvadas

Nepalanki daugelio įvairių etiologijų lėtinių difuzinių kepenų pažeidimų, įskaitant lėtinį hepatitą C (CHC), baigtis yra kepenų fibrozė, kurios vystymosi pagrindiniai dalyviai yra aktyvuoti fibroblastai, kurių pagrindinis šaltinis yra aktyvuotos Ito stellate ląstelės (SSC). .

HSC, sinonimas – kepenų žvaigždžių ląstelės, riebalus kaupiančios ląstelės, perisinusoidiniai lipocitai, žvaigždžių ląstelės (angl. Hepatic Stellate Cell, HSC, Cell of Ito, Ito cell). Pirmą kartą ZKI 1876 m. aprašė K. Kupfferis ir pavadino žvaigždinėmis ląstelėmis („Stemzellen“). T. Ito, radęs juose riebalų lašelių, iš pradžių pavadino juos riebalus sugeriančiais („shibo-sesshusaibo“), o paskui, nustatęs, kad riebalus pačios ląstelės gamina iš glikogeno, riebalus kaupiančių ląstelių („shibo“). -chozosaibo“). 1971 metais K. Wake'as įrodė Kupferio žvaigždžių ląstelių ir riebalus kaupiančių Ito ląstelių tapatumą ir kad šios ląstelės „saugo“ vitaminą A.

Apie 80 % organizme esančio vitamino A kaupiasi kepenyse, o iki 80 % visų kepenų retinoidų nusėda HKI riebaliniuose lašuose. Chilomikronų sudėtyje esantys retinolio esteriai patenka į hepatocitus, kur paverčiami retinoliu, sudarydami vitamino A kompleksą su retinolį rišančiu baltymu (RBP), kuris išskiriamas į perisinusoidinę erdvę, iš kur jį nusodina ląstelės.

K. Popperio nustatytas glaudus HCI ryšys su kepenų fibroze parodė jų dinaminę, o ne statinę funkciją – galimybę tiesiogiai dalyvauti intralobulinės perihepatoceliulinės matricos remodeliavime.

Pagrindinis kepenų morfologinio tyrimo metodas, kuris atliekamas siekiant įvertinti intravitalinių biopsijos mėginių pokyčius, yra šviesos mikroskopija, kuri klinikinėje praktikoje leidžia nustatyti reprodukcijos aktyvumą.

deginimas ir chroniškumo stadija. Metodo trūkumas – maža skiriamoji geba, neleidžianti įvertinti ląstelių struktūrinių ypatybių, tarpląstelinių organelių, inkliuzų, funkcinių savybių. Intravitalinis elektroninis mikroskopinis ultrastruktūrinių kepenų pakitimų tyrimas leidžia papildyti šviesos mikroskopijos duomenis ir padidinti jų diagnostinę vertę.

Šiuo atžvilgiu kepenų HSC identifikavimas, jų fenotipo tyrimas transdiferenciacijos procese ir jų dauginimosi intensyvumo nustatymas yra svarbiausias indėlis numatant kepenų ligų pasekmes, taip pat į patomorfologiją ir fibrogenezės patofiziologija.

Tikslas – pateikti HCI struktūrines ir funkcines charakteristikas remiantis intravitalinių kepenų biopsijos mėginių citologinio identifikavimo rezultatais.

medžiagos ir metodai

Buvo gauta intravitalinė kepenų biopsija aspiracinė biopsija kepenų pacientams, sergantiems CHC (HCV+ RNR), iš kurių buvo gautas raštiškas informuotas sutikimas.

Pusiau plonų pjūvių šviesos mikroskopijai 0,5 × 2 mm dydžio pacientų kepenų biopsijos mėginiai buvo fiksuoti dviguba fiksacija: pirmiausia pagal Sato Taizan metodą, tada audinių mėginiai papildomai 1 valandą fiksuojami 1 proc. osmio fiksatorius, paruoštas ant 0,1 M fosfato Sorenseno buferio, pH 7,4. Kalio dichromato (K2Cr2O7) arba chromo anhidrido kristalų (1 mg/mL) buvo pridėta į 1% osmio tetroksidą, kad būtų geriau atskleistos tarpląstelinės struktūros ir intersticinė medžiaga pusiau plonose pjūviuose. Po mėginių dehidratacijos serijoje alkoholio tirpalai didėjant koncentracijai ir acetonui, jie buvo patalpinti į iš anksto polimerizuotą butilmetakrilato ir stireno mišinį ir polimerizuoti 550C temperatūroje. Pusiau plonos sekcijos (1 µm storio) buvo nudažytos nuosekliai

azure II-bazinis fuksinas. Mikrografijos buvo padarytos naudojant skaitmeninę vaizdo kamerą (Leica FC 320, Vokietija).

Atliktas elektronų mikroskopinis tyrimas su 0,5x1,0 mm dydžio kepenų biopsijos mėginiais, fiksuotais 1 % osmio tetroksido tirpalu 0,1 M Millonig buferyje, pH 7,4, +40 C temperatūroje 2 valandas. Po dehidratacijos kylančiuose alkoholiuose ir acetone mėginiai buvo supilti į aralditą. Iš gautų blokų Leica EM VC7 ultramikrotomu (Vokietija) buvo paruoštos semitino sekcijos (400 nm) ir nudažytos metileno mėlynu. Preparatai buvo ištirti šviesos mikroskopu ir parinkta vieno tipo vieta tolesniam ultrastruktūrinių pokyčių tyrimui. Itin plonos pjūviai (35 nm) buvo nudažyti 2% uranilo acetatu 50% metanolyje ir švino citratu pagal E. S. Reynoldsą. Elektronų mikroskopiniai preparatai buvo tiriami naudojant JEM-1011 elektroninį mikroskopą (JEOL, Japonija), padidinus 10 000–60 000, esant 80 kW greitėjimo įtampai. Vaizdams gauti buvo naudojamas kompleksas iš Olympus MegaViewIII skaitmeninio fotoaparato (Vokietija) ir iTEM vaizdo apdorojimo programinės įrangos (Olympus, Vokietija).

Rezultatai ir DISKUSIJA

HSC yra perisinusoidinėje erdvėje (Disse) kišenėse tarp hepatocitų ir endotelio ląstelių; jie turi ilgus procesus, prasiskverbiančius giliai tarp hepatocitų. Daugumoje publikacijų, skirtų šiai HSC populiacijai, pateikiamas jų schematiškas vaizdas, leidžiantis nurodyti tik „teritorinę“ HSC priklausomybę kepenyse ir aplinkinių „kaimynų“ atžvilgiu (1 pav.).

HSC glaudžiai liečiasi su endotelio ląstelėmis per nepilnos bazinės membranos komponentus ir intersticines kolageno skaidulas. Nervų galūnės prasiskverbia tarp SC ir parenchiminių ląstelių, todėl Disse erdvė apibrėžiama kaip erdvė tarp parenchiminių ląstelių plokštelių ir

HCl ir endotelio ląstelių kompleksas.

Manoma, kad HSC atsiranda iš prastai diferencijuotų mezenchiminių ląstelių besivystančių kepenų skersinėje pertvaroje. Eksperimento metu nustatyta, kad kraujodaros kamieninės ląstelės dalyvauja formuojant HSC ir kad šis procesas nėra susijęs su ląstelių susiliejimu.

Sinusoidinės ląstelės (SC), pirmiausia HSC, vaidina pagrindinį vaidmenį visų tipų kepenų regeneracijoje. Fibrozinis kepenų regeneravimas vyksta dėl HSC ir kamieninių ląstelių kamieninių funkcijų slopinimo. kaulų čiulpai. Žmogaus kepenyse HSC sudaro 5–15%, tai yra viena iš 4 mezenchiminės kilmės SC atmainų: Kupferio ląstelės, endoteliocitai ir Pb ląstelės. SC telkinyje taip pat yra 20-25% leukocitų.

HCl citoplazmoje yra riebalų intarpų su retinoliu, trigliceridais, fosfolipidais, cholesteroliu, laisvuoju riebalų rūgštis, a-aktinas ir desminas. ZKI vizualizuojamas naudojant aukso chlorido dažymą. Eksperimento metu buvo nustatyta, kad HKI diferenciacijos nuo kitų miofibroblastų žymuo yra jų reelino baltymo ekspresija.

HSC egzistuoja ramybės būsenoje („neaktyvus HSC“), trumpalaikės ir ilgalaikės aktyvuotos būsenos, kurių kiekvienai būdinga genų ekspresija ir fenotipas (α-IgMA, ICAM-1, chemokinai ir citokinai).

Neaktyvios būsenos HSC turi apvalią, šiek tiek pailgą arba netaisyklingą formą, didelį branduolį ir ryškų vizualinį ženklą - lipidų inkliuzus (lašus), kuriuose yra retinolio (2 pav.).

Lipidų lašelių skaičius neaktyviame HSC siekia 30 ir daugiau, jie yra artimo dydžio, greta vienas kito, spaudžiasi į branduolį ir stumia jį į periferiją (2 pav.). Maži inkliuzai gali būti tarp didelių lašų. Lašelių spalva priklauso nuo fiksatoriaus ir medžiagos spalvos. Vienu atveju jos yra šviesios (2a pav.), kitu – tamsiai žalios (2b pav.).

1 pav. ICH (žvaigždinė ląstelė, perisinusoidinis lipocitas) išsidėstymo Disse perisinusoidinėje erdvėje (Disse erdvėje) schema, interneto šaltinis

2 pav. – CCI, kurios yra neaktyvios būsenos

a - apvalios formos HCI su dideliu kiekiu šviesių lipidų lašelių (baltos rodyklės), hepatocitų (Hz) su sunaikinta citoplazma (juoda rodyklė); b - HCI su tamsiais lipidų lašeliais, glaudžiai kontaktuojančiais su makrofagu (Mf); a-b - pusiau plonos sekcijos. Azure II dažymas - pagrindinė purpurinė. Mikrografijos. Padidėjęs 1000; c - HCl su lipidų lašelių gausa (daugiau nei 30), netaisyklingos formos (6000 dydžio); d-ultrastruktūriniai HCI komponentai: l-lipidų lašai, mitochondrijos (oranžinės rodyklės), GRES (žalios rodyklės), Golgi kompleksas (raudona rodyklė), sw. 15 000; c-d – elektronogramos

Naudojant elektroninę mikroskopiją, šviesaus lipidinio substrato fone susidaro labiau osmiofilinis kraštinis apvadas (5a pav.). Daugumoje „poilsio“ HSC kartu su dideliais lipidų inkliuzais yra pastebimai mažas kiekis citoplazminės matricos, kurioje yra mažai mitochondrijų (Mx) ir granuliuoto endoplazminio tinklo (GRES). Tuo pačiu metu aiškiai matomi vidutiniškai išsivysčiusio Golgi komplekso skyriai 3–4 suplotų cisternų su šiek tiek praplatintais galais krūvos pavidalu (2d pav.).

Tam tikromis sąlygomis aktyvuoti HSC įgauna mišrų arba pereinamąjį fenotipą, derindami tiek lipidų turinčių, tiek į fibroblastus panašių ląstelių morfologines savybes (3 pav.).

Pereinamasis HCI fenotipas taip pat turi savo morfologinių ypatybių. Ląstelė įgyja pailgos formos, lipidų inkliuzų skaičius mažėja, o nukleolemos invaginacijų skaičius mažėja. Citoplazmos tūris didėja, joje yra daug GRES cisternų su surištomis ribosomomis ir laisvomis ribosomomis, Mx. Yra plokščių Golgi komplekso komponentų hiperplazija, kurią sudaro keli 3–8 suplotų cisternų krūvos, padidėja lizosomų, dalyvaujančių skaidyme, skaičius.

3 pav. - ZKI, kurie yra pereinamojo laikotarpio būsenoje

a - ZKI (baltos rodyklės). Perpjauta pusiau. Azure II dažymas - pagrindinė purpurinė. Mikrografija. Padidėjęs 1000; b - pailgos formos ZKI su nedideliu kiekiu lipidų lašelių; uv. 8000; c - HCI kontaktuojantis su Kupfferio ląstelėmis (CC) ir limfocitais (Lc), SW. 6000. (Hz - hepatocitas, l - lipidų lašai, E - eritrocitas); d - mitochondrijos (oranžinės rodyklės), GRES (žalios rodyklės), c.Goldji (raudona rodyklė), lizosomos (mėlynos rodyklės), magn. b, c, d – elektronų difrakcijos modeliai

lipidų lašeliai (3d pav.). GRES komponentų ir Golgi komplekso hiperplazija yra susijusi su fibroblastų gebėjimu sintetinti kolageno molekules, taip pat modeliuoti jas po transliacijos hidroksilinimo ir glikozilinimo būdu endoplazminiame tinkle ir Golgi komplekso elementuose.

Nepažeistose kepenyse HCI, būdami ramios būsenos, savo procesais padengia sinusoidinį kapiliarą. HCl procesai skirstomi į 2 tipus: perisinusoidinius (subendotelinius) ir interhepatoceliulinius (4 pav.).

Pirmieji palieka ląstelės kūną ir tęsiasi palei sinusoidinio kapiliaro paviršių, padengdami jį plonomis į pirštą panašiomis šakomis. Jie yra padengti trumpais gaureliais ir turi būdingus ilgus mikroiškyšulius, besitęsiančius dar toliau išilgai kapiliarinio endotelio vamzdelio paviršiaus. Tarphepatoceliulinės ataugos, įveikusios hepatocitų plokštelę ir pasiekusios gretimą sinusoidą, skirstomos į kelias perisinusoidines ataugas. Taigi FQI vidutiniškai apima daugiau nei du gretimus sinusoidus.

Pažeidus kepenis, suaktyvėja HSC ir vyksta fibrogenezės procesas, kuriame išskiriamos 3 fazės. Jie vadinami iniciacija, pailgėjimu ir skyrimu (pluoštinio audinio išsiskyrimu). Šį „poilsio“ HSC transformacijos į fibrozuojančius miofibroblastus procesą inicijuoja citokinai (^-1, ^-6,

4 pav. Perisinusoidiniai (subendoteliniai) ir tarphepatoceliuliniai procesai (ataugos) HCI

a) ZKI (geltonos rodyklės), atsirandančios iš ląstelės kūno, procesas, uv. 30 000; b - HCI procesas, esantis palei sinusoidinio kapiliaro paviršių, kuriame yra lipidų lašas, SW. 30 000; c) HCI subendoteliniuose procesuose. Endotelio ląstelių procesai (rožinės rodyklės); d - tarphepatoceliulinis HCI procesas; HCI ir hepatocitų membranų sunaikinimo sritis (juodos rodyklės), patinusi 10 000. Elektronogramos

TOT-a), nepakankamai oksiduoti medžiagų apykaitos produktai, reaktyviosios deguonies rūšys, azoto oksidas, endotelinas, trombocitus aktyvinantis faktorius (PDGF), plazminogeno aktyvatorius, transformuojantis augimo faktorius (TGF-1), acetaldehidas ir daugelis kitų. Tiesioginiai aktyvatoriai yra oksidacinio streso būsenos hepatocitai, Kupferio ląstelės, endoteliocitai, leukocitai, trombocitai, gaminantys citokinus (parakrininiai signalai) ir pats ZKI (autokrininė stimuliacija). Aktyvaciją lydi naujų genų ekspresija (įtraukimas į darbą), ekstraląstelinės matricos citokinų ir baltymų sintezė (I, III, Y tipo kolagenai).

Šiame etape HSC aktyvavimo procesas gali būti baigtas stimuliuojant HSC priešuždegiminių citokinų susidarymą, kurie slopina makrofagų TOT-a gamybą pažeistoje vietoje. Dėl to smarkiai sumažėja HSC skaičius, jie patiria apoptozę, o kepenyse nesivysto fibrozės procesai.

Antroje fazėje (ilgai), esant ilgalaikiam nuolatiniam parakrininiam ir autokrininiam aktyvuojančių dirgiklių poveikiui, HSC „išlaikomas“ aktyvuotas fenotipas, kuriam būdinga HSC transformacija į susitraukiančias miofibroblastines ląsteles, kurios sintetina ekstraląstelinį fibrilinį kolageną.

Aktyvuotam fenotipui būdingas proliferacija, chemotaksė, susitraukimas, retinoidų atsargų praradimas ir ląstelių, panašių į miofibroblastines ląsteles, susidarymas. Taip pat demonstruoja aktyvuoti ZKI padidintas turinys naujų genų, tokių kaip a-SMA, ICAM-1, chemokinai ir citokinai. Ląstelių aktyvacija rodo ankstyvą fibrogenezės stadiją ir yra prieš padidėjusią ECM baltymų gamybą. Susidarę pluoštiniai audiniai pertvarkomi dėl matricos skilimo, naudojant matricos metaloproteinazes (matricosmetaloproteinazes – MMP). Savo ruožtu matricos irimą reguliuoja MMP audinių inhibitoriai (matricos metaloproteinazių audinių inhibitoriai – TIMP). MMP ir TIMP yra nuo cinko priklausomų fermentų šeimos nariai. MMP yra sintetinami HSC kaip neaktyvūs profermentai, kurie aktyvuojami skilus propeptidui, bet yra slopinami sąveikaujant su endogeniniais TIMP, TIMP-1 ir TIMP-2. HSC gamina 4 tipų membranos tipo MMP, kuriuos aktyvuoja IL-1 p. Tarp MMP ypač svarbi yra MMP-9, neutrali matricos metaloproteinazė, kuri veikia prieš 4 tipo kolageną, kuris yra bazinės membranos dalis, taip pat prieš iš dalies denatūruotus 1 ir 5 tipo kolagenus.

HCI populiacijos, turinčios įvairių tipų kepenų pažeidimus, padidėjimas vertinamas pagal daugelio mitogeninių faktorių, susijusių tirozino kinazės receptorių ir kitų nustatytų mitogenų, sukeliančių ryškiausią HKI proliferaciją, aktyvumą: endotelinas-1, trombinas, FGF. fibroblastų augimo faktorius, PDGF – endotelio augimo faktoriaus kraujagyslės, IGF – į insuliną panašus augimo faktorius. HSC kaupimasis kepenų pažeidimo vietose vyksta ne tik dėl šių ląstelių dauginimosi, bet ir dėl jų nukreiptos migracijos į šias zonas chemotaksės būdu, dalyvaujant tokiems chemoatraktantams kaip PDGF ir leukocitų chemoatraktantas-MCP (monocitų chemotaktinis baltymas). 1) .

Aktyvuotuose HSC lipidų lašelių skaičius sumažėja iki 1–3, kai jie yra priešinguose ląstelės poliuose (5 pav.).

Suaktyvinti HSC įgauna pailgą formą, reikšmingas citoplazmos sritis užima Golgi kompleksas, atsiskleidžia gana daug GRES cisternų (baltymų sintezės rodiklis eksportui). Sumažėja kitų organelių skaičius: randama mažai laisvų ribosomų ir polisomų, pavienės mitochondrijos, netaisyklingos lizosomos (6 pav.).

2007 m. HSC pirmą kartą buvo pavadintos kepenų kamieninėmis ląstelėmis, nes jos išreiškia vieną iš hematopoetinių mezenchiminių kamieninių ląstelių žymenų – CD133.

5 pav. – CCI aktyvuotos būsenos

a, b - HCI (mėlynos rodyklės) su atskirais lipidų intarpais, lokalizuotais priešinguose branduolio poliuose. Perisinusoidinis jungiamasis audinys(6a pav.) ir tarpląstelinės matricos sluoksnis aplink hepatocitus (6b pav.) nusidažo raudonai. Citotoksiniai limfocitai (violetinės rodyklės). Endotelio ląstelė (balta rodyklė). Glaudus kontaktas tarp plazmos ląstelės (raudona rodyklė) ir hepatocitų. Pusiau ploni pjūviai. Azure II dažymas - pagrindinė purpurinė. Mikrografijos. Padidėjęs 1000 ; c, d - ultrastruktūriniai HCI komponentai: mitochondrijos (oranžinės rodyklės), Golgi kompleksas (raudona rodyklė), jo osmiofiliškesnės cis pusės cisternos, nukreiptos į išplėstus granuliuoto endoplazminio tinklo elementus (žalios rodyklės), lizosoma (mėlyna rodyklė) (didelis). 10 000 ir 20 000 atitinkamai); c, d – elektronų difrakcijos modeliai

Miofibroblastai, kurių normaliose kepenyse nėra, turi tris galimus šaltinius: pirmasis yra intrauterinio kepenų vystymosi metu; vartų traktuose miofibroblastai supa kraujagysles ir tulžies latakai brendimo metu ir visiškai išsivysčius kepenims, jie išnyksta ir vartų traktuose pakeičiami vartų fibroblastais; antroji - su kepenų pažeidimu, jie susidaro dėl portalinių mezenchiminių ląstelių ir ramybės būsenos HSC, rečiau dėl pereinamųjų epitelio-mezenchiminių ląstelių. Jiems būdingas CD45-, CD34-, Desmin+, glijos fibrilinis baltymas, susijęs su (GFAP)+ ir Thy-1+.

Naujausi tyrimai parodė, kad hepatocitai, cholangiocitai ir endotelio ląstelės gali tapti miofibroblastais per epitelio arba endotelio-mezenchiminį perėjimą (EMT). Šios ląstelės apima žymenis, tokius kaip CD45-, albuminas+ (ty hepatocitai), CD45-, CK19+ (ty cholangiocitai) arba Tie-2+ (endotelio ląstelės).

6 pav. – Didelis HSC fibrozinis aktyvumas

a, b - miofibroblastas (Mfb), ląstelėje yra didelis branduolys, GRES elementai (raudonos rodyklės), daugybė laisvų ribosomų, polimorfinių pūslelių ir granulių, pavienės mitochondrijos ir ryškus vizualizacijos ženklas - aktino gijų pluoštas citoplazmoje (geltonas). rodyklės); nuvedė. 12 000 ir 40 000; c, d, e, f - didelis fibrozinis HSC aktyvumas, kai citoplazmoje yra retinoidų turinčių lipidų lašelių. Daugybė kolageno fibrilių pluoštų (baltos rodyklės) išlaikė (a) ir prarado (d, e, f) specifinį skersinį dryželį; nuvedė. 25 000, 15 000, 8 000, 15 000. Elektronogramos

Be to, kaulų čiulpų ląstelės, susidedančios iš fibrocitų ir cirkuliuojančių mezenchiminių ląstelių, gali transformuotis į miofibroblastus. Tai CD45+ (fibrocitai), CD45+/- (cirkuliuojančios mezenchiminės ląstelės), 1+ tipo kolagenas, CD11d+ ir 11+ klasės MHC (7 pav.).

Literatūros duomenys patvirtina ne tik glaudų ryšį tarp ovalinių ląstelių dauginimosi ir proliferacijos sinusoidinės ląstelės, bet ir duomenys apie galimą HSC diferenciaciją į kepenų epitelį, kuri buvo vadinama perisinusoidinių ląstelių mezenchimine-epiteline transformacija.

Fibrogeninės aktyvacijos būsenoje į miofibroblastus panašūs HSC, kartu su lipidų lašelių skaičiaus sumažėjimu ir vėlesniu išnykimu, pasižymi židinio proliferacija (8 pav.), fibroblastų tipo žymenų, įskaitant lygiųjų raumenų α-aktiną, imunohistochemine ekspresija. , ir periląstelinių kolageno fibrilių susidarymas Disse erdvėse.

Fibrozės vystymosi fazėje didėjanti kepenų audinio hipoksija tampa veiksniu, lemiančiu papildomą priešuždegiminių adhezijos molekulių perteklinę ekspresiją kamieninėse ląstelėse - 1CAM-1, 1CAM-2, VEGF, priešuždegiminis.

Kanalinių kepenų progenitorinių ląstelių sąveika su kepenų miofibroblastais

Į miofibroblastus panašūs HSC fibrogeninės aktyvacijos būsenoje.

7 pav. – HSC miofibroblastinės aktyvacijos dalyviai

stiprūs chemoattraktantai – M-CSF, MCP-1 (monocitų chemotaktinis baltymas-1) ir SGS (citokinų sukeltas neutrofilų chemoattraktantas) ir kiti, skatinantys priešuždegiminių citokinų susidarymą (TGF-b, PDGF, FGF, PAF, SCF, ET-1) ir sustiprina fibrogenezės procesus kepenyse, sudarant sąlygas nuolatiniam HSC ir fibrogenezės procesų aktyvavimui.

Naudojant mikroskopinius preparatus, perikapiliarinė fibrozė pasireiškia perisinusoidinio jungiamojo audinio ir tarpląstelinio matricos sluoksnio aplink hepatocitus (dažnai miršta) ryškiai raudona spalva. Ant elektroninių mikroskopinių preparatų fibroziniai pokyčiai vizualizuojami arba susiformavusių didelių kolageno skaidulų pluoštų, išlaikiusių skersinį dryžuotumą, arba masyvių pluoštų pavidalu.

Disse skaidulinės masės, kuri yra išbrinkusios kolageno skaidulos, praradusios periodinį dryžuotumą, erdvėje (9 pav.).

Autorius šiuolaikinės idėjos, fibrozė yra dinamiškas procesas, kuris gali progresuoti ir regresuoti (10 pav.).

Neseniai buvo pasiūlyta keletas specifinių ICD žymenų: vitamino A (VA) žydėjimas lipidų lašeliuose, GFAP, p75 NGF receptorius ir sinaptofizinas. Atliekami kepenų HCI dalyvavimo kepenų kamieninių ląstelių proliferacijoje ir diferenciacijoje tyrimai.

Ištyrėme retinolį surišančio baltymo (RBP-4), kuris sudaro kompleksą su VA, kiekį, kurio koncentracija kraujo plazmoje paprastai koreliuoja su organizmo aprūpinimu VA, kurio 80% yra HCl.

Santykis tarp turinio

8 pav. – Židinio HSC proliferacija fibrogeninės aktyvacijos būsenoje

a - HCI hiperplazija (baltos rodyklės) išsiplėtusių sinusoidų spindyje; b - transdiferencijuotų HSC (baltos rodyklės), endotelio ląstelės (rožinė rodyklė) proliferacija. Pusiau ploni pjūviai. Azure II dažymas - pagrindinė purpurinė. Mikrografijos. Padidėjęs 1000

9 pav. – paskutinė HSC miofibroblastinio aktyvavimo stadija

a, b - perisinusoidinė fibrozė (baltos rodyklės). Persinusoidinis jungiamasis audinys ir tarpląstelinis matricos sluoksnis aplink hepatocitus (b) nudažomas raudonai baziniu fuksinu. HSC aktyvuojami ir transformuojami į fibroblastus (mėlynos rodyklės). Hz pav. a – hepatocitas su sunaikinta citoplazma. Pusiau ploni pjūviai. Azure II dažymas - pagrindinė purpurinė. Mikrografijos. Padidėjęs 1000; c, d - perizinusoidinė ir perihepatoceliulinė fibrozė kepenų skiltyje, padidėjęs kolageno skaidulų fibrilių elektronų tankis; mitochondrijų matricos kondensacija hepatocituose (oranžinė rodyklė). Padidinkite atitinkamai 8 000 ir 15 000. elektronogramos

1 lentelė. RBP-4 kiekio rodikliai pacientams, sergantiems įvairių etiologijų kepenų ciroze (LC) ir lėtiniu hepatitu (CH), ng/ml (M±m)

Grupė n M±m p

Kepenų cirozė 17 23,6±2,29<0,05

CG, AsAT norma 16 36,9±2,05* >0,05

CG, ASAT >2 normos 13 33,0±3,04* >0,05

CG, ALT norma 13 37,5±3,02* >0,05

CG, ALT >2 normos 21 35,9±2,25* >0,05

Kontrolė 15 31,2±2,82

Pastaba: p – reikšmingi skirtumai su kontrole (p<0,05); * - достоверные различия между ЦП и ХГ (р<0,05)

Klaidinga skiltelė, apsupta pluoštinės pertvaros su pluoštine pertvara. Dažymas pagal Masso - netikros skilties ratas. Dažymas pagal u.Uv.x50 Masson. Padidinti x200

10 paveikslas. Virusine ciroze sergančio paciento netikros skilties įvykių dinamika praėjus 6 mėnesiams po autologinių mezenchiminių kamieninių ląstelių transplantacijos į kepenis

Aš valgau RBP-4 ir 4 stadijos fibrozę (cirozę), priešingai nei lėtinis hepatitas, kurio atveju tokia priklausomybė nebuvo pastebėta, nepaisant biocheminių uždegimo aktyvumo žymenų kepenyse.

Į šį faktą būtina atsižvelgti pagrindžiant pakaitinę terapiją, siekiant pašalinti VA trūkumą organizme, kuris gali atsirasti dėl IKT potencialo išsekimo dėl fibrozės progresavimo kepenyse.

1. Maksimalų HCI struktūrinės ir funkcinės būklės įvertinimo efektyvumą užtikrina intravitalinio biopsijos mėginio morfologinis tyrimas, kartu naudojant ląstelių vizualizavimo metodų kompleksą (šviesos, itin plonų pjūvių elektroninė mikroskopija ir originalūs fiksavimas ir dažymas).

2. HCI morfologinio tyrimo rezultatai leidžia gerinti fibrozės diagnostikos in vivo kokybę, ją stebėti ir prognozuoti lėtinių difuzinių kepenų pakitimų baigtis aukštesniu šiuolaikiniu lygiu.

3. Morfologinių išvadų rezultatai leis gydytojui formuluojant galutinę diagnozę papildomai įtraukti patikslintus duomenis apie chroniškumo stadiją (fibrozės stabilizavimąsi, progresavimą ar išnykimą) gydymo eigoje.

Literatūra

1. Ivashkin, V. T. Klinikiniai priešfibrozinių pokyčių simptomai: visos Rusijos vidaus ligų specialistų interneto kongreso paskaitos stenograma / V. T. Ivashkin, A. O. Bueverov // INTERNISTAS: Nacionalinė vidaus medicinos specialistų interneto draugija. - 2013. - Prieigos režimas: http://internistas. ru/publications/detail/6569/. - Priėjimo data: 2016-11-21.

2. Kiyasov, A.P. Ovalios ląstelės – spėjamos kepenų kamieninės ląstelės ar hepatoblastai? / A. P. Kiyasov, A. A. Gumerova, M. A. Titova // Ląstelių transplantacija ir audinių inžinerija. - 2006. - V. 2, Nr. 4. - S. 55-58.

1. Ivashkin, V. T. Klinicheskaya simptomatika dofibroticheskih izmenenij: stenogramma lekcii Vserossijskogo Internet-Kongressa specialistov po vnutrennim boleznyam / V. T. Ivashkin, A. O. Bueverov // INTERNIST: Nacionalinis "v. : Rezhipa 20 do13. - //internist.ru/publications/detail/6569/ - Duomenys peržiūrėti: 2016-11-21.

2. Kiyasov, A. P. Ovalios "nye kletki - predpolagaemye stvolovye kletki pecheni arba gepatoblasty? / A. P. Kiyasov, A. A. Gumerova, M. A. Titova // Kletochnaya transplantologiya i tkanevaya inzheneriya. - 2 t. 5, 2 t. – 58.

3. Apie sinusoidinių kepenų ląstelių ir kaulų čiulpų ląstelių vaidmenį teikiant sveikų ir pažeistų kepenų regeneracinę strategiją / A. V. Lundup [et al.] // Transplantologijos ir dirbtinių organų biuletenis. -2010 m. - T. XII, Nr. 1. - S. 78-85.

4. Serovas, V. V. Morfologiniai kriterijai, skirti įvertinti virusinio lėtinio hepatito B ir C etiologiją, aktyvumo laipsnį ir proceso stadiją / V. V. Serovas, L. O. Severgina // Patologijos archyvas. - 1996. - Nr. 4. - S. 61-64.

5. Kepenų žvaigždžių ląstelių struktūrinės ir funkcinės charakteristikos fibrozės dinamikoje / OA Postnikova [et al.] // Fundamentalieji tyrimai. - 2011. - Nr. 10.

6. Ultrastruktūrinis ir imunohistocheminis kepenų žvaigždžių ląstelių tyrimas infekcinės-virusinės genezės fibrozės ir cirozės dinamikoje / G. I. Nepomnyashchikh [et al.] // Eksperimentinės biologijos ir medicinos biuletenis. - 2006. - T. 142, Nr. 12. - S. 681-686.

7. Shcheglev, AI Struktūrinės ir metabolinės sinusoidinių kepenų ląstelių charakteristikos / AI Shcheglev, OD Mishnev // Šiuolaikinės biologijos sėkmė. - 1991. - V. 3, Nr. 1. - S. 73-82.

10. Dietinių retinoidų ir trigliceridų poveikis žiurkių kepenų žvaigždžių ląstelių ir žvaigždžių ląstelių lipidų lašelių lipidų sudėčiai / H. Moriwaki // J. Lipid. Res. - 1988. - T. 29. - R. 1523-1534.

13. Friedman, S. Hepatic fibrosis 2006: Report of the Third AASLD Single Topic Conference / S. Friedman, D. Rockey, B. Montgomery // Hepatology. - 2006. - T. 45 straipsnio 1 dalį. - R. 242-249.

18. Iredale, J. P. Kepenų žvaigždžių ląstelių elgsena sprendžiant kepenų pažeidimą / J. P. Iredale // Semin. LiverDis. -2001 m. – t. 21 straipsnio 3 dalį. - R. 427-436.

19. Kobold, D. Reelino ekspresija kepenų žvaigždžių ląstelėse ir kepenų audinių atstatymo metu: naujas žymuo, skirtas HSC diferencijuoti nuo kitų kepenų miofibroblastų / D. Kobold // J. Hepatol. - 2002. - T. 36 straipsnio 5 dalį. - R. 607-613.

20. Lepreux, S. Žmogaus kepenų miofibroblastai vystymosi metu ir ligos, daugiausia dėmesio skiriant portalui (myo)

3. O roli sinusoidinis "nyh kletok pecheni i kletok kostnogo mozga v obespechenii regeneratornoj strategii zdorovoj i povrezhdennoj pecheni / A. V. Lyundup // Vestnik transplantologii i iskusstvennyh organov. - 2010 m. II 8 T. - - - 8 m. .

4. Serov, V. V. Morfologicheskie kriterii ocenki ehtiologii, stepeni aktivnosti i stadii processa pri virusnyh chrononicheskih gepatitah V i S / V. V. Serov, L. O. Severgina // Arhiv patologii.

1996. - Nr. 4. - S. 61-64.

5. Struktūrinė funkcinė "naya harakteristika zvezdchatyh kletok pecheni v dinamike fibroza / O. A. Postnikova // Fundamental" nye issledovaniya. - 2011. - Nr. 10. - C. 359-362.

6. Ul "trastrukturnoe i immunogistohimicheskoe issledovanie zvezdchatyh kletok pecheni v dinamike fibroza i cirroza pecheni infekcionno-virusnogo geneza / G. I. Nepomnyashchih // Byulleten" ehk eksperimentinė "nojologii - i mediciny" 0.16.8 686.

7. SHCHeglev, A. I. Struktūrinė-metabolinė sinusoidinė charakteristika "nyh kletok pecheni / A. I. SHCHeglev, O. D. Mishnev // Uspekhi sovremennoj biologii. - 1991. - T. 3, No. 1. - S. 8.

8. CD34 kepenų žvaigždžių ląstelės yra progenitorinės ląstelės / C. Kordes // Biochem., Biophys. Res. Dažnas. - 2007. -T. 352 straipsnio 2 dalis. - P. 410-417.

9. Matricos baltymų degradacija sergant kepenų fibroze / M. J. Arthur // Pathol. Res. Praktika. - 1994. - T. 190(9-10).

10. Dietinių retinoidų ir trigliceridų poveikis žiurkių kepenų žvaigždžių ląstelių ir žvaigždžių ląstelių lipidų lašelių lipidų sudėčiai / H. Moriwaki // J. Lipid. Res. - 1988. - T. 29. - R. 1523-1534.

11. Vaisiaus kepenys susideda iš ląstelių, vykstančių epitelio-mezenchiminio perėjimo metu / J. Chagraoni // Kraujas. - 2003. - T. 101. - P. 2973-2982.

12. Biologinių mėginių fiksavimas, dehidratacija ir įterpimas / A. M. Glauert // Praktiniai elektroninės mikroskopijos metodai. - Niujorkas: Am. Elsevier, 1975. – T. 3, 1 dalis.

13. Friedman, S. Hepatic fibrosis 2006: Report of the Third AASLD Single Topic Conference / S. Friedman, D. Rockey, B. Montgomery // Hepatology. - 2006. - T. 45 straipsnio 1 dalį. - R. 242-249.

14. Gaga, M. D. Žmogaus ir rathepatinės žvaigždžių ląstelės gamina kamieninių ląstelių faktorių: galimas stiebo ląstelių pritraukimo mechanizmas sergant kepenų fibroze / M. D. Gaga // J. Hepatol. - 1999. - T. 30, Nr. 5. - P. 850-858.

15. Glauert, A. M. Aralditas kaip įterpimo terpė elektronų mikroskopijai / A. M. Glauert, R. H. Glauert // J. Biophys. Biochem. Citol. - 1958. - T. 4. - P. 409-414.

16. Kepenų žvaigždžių ląstelės ir vartų fibroblastai yra pagrindiniai kolagenų ir liziloksidazių šaltiniai normaliose kepenyse ir anksti po sužalojimo / M. Perepelyuk // Am. J Physiol. virškinimo traktas. Kepenų fiziol. - 2013. - T. 304 straipsnio 6 dalį. - P. 605614.

17. Hepatito C viruso šerdis ir nestruktūriniai baltymai sukelia fibrogeninį poveikį kepenų žvaigždžių ląstelėse / R. Bataller // Gastroenterologija. - 2004. - T. 126, iss. 2. - P. 529-540.

18. Iredale, J. P. Kepenų žvaigždžių ląstelių elgsena sprendžiant kepenų pažeidimą / J. P. Iredale // Semin. LiverDis. -2001 m. – t. 21 straipsnio 3 dalį. - R. 427-436.

19. Kobold, D. Reelino ekspresija kepenų žvaigždžių ląstelėse ir kepenų audinių taisymo metu: naujas žymuo, skirtas HSC diferencijuoti nuo kitų kepenų miofibroblastų / D. Kobold // J. Hepatol. - 2002. - T. 36 straipsnio 5 dalį. - R. 607-613.

20. Lepreux, S. Žmogaus kepenų miofibroblastai vystymosi metu ir ligos, daugiausia dėmesio skiriant portaliniams (mio) fibroblastams / S. Lepreux, A. Desmouliére

fibroblastai / S. Lepreux, A. Desmoulière // Front. fiziol. – 2015. – Prieigos būdas: http://dx.doi. org/10.3389/fphys.2015.00173. - Priėjimo data: 2016-10-31.

22. Mezenchiminių kaulų čiulpų kamieninių ląstelių transplantacija pacientams, sergantiems HCV susijusia kepenų ciroze / S. Lukashyk // J. Clin. Vertimas Hepatol. - 2014. - T. 2, iss. 4. - P. 217-221.

23. Millonig, G. A. Fosfatinio buferio privalumai osmio tetroksido tirpalams fiksuojant / G. A. Millonig // J. Appl. Fizika. - 1961. - T. 32. - P. 1637-1643.

t. 158. - P. 1313-1323.

t. 24. - P. 205-224.

29. Querner, F. Der mikroskopische Nachweis von Vitamin Aimanimalen Gewebe. Zur Kenntnis der paraplasmatischen Leberzellen-einschlüsse. Dritte Mitteilung / F. Querner // Klin. Wschr. - 1935. - T. 14. - P. 1213-1217.

30. Naujausi miofibroblastų biologijos pokyčiai: jungiamojo audinio remodeliavimo paradigmos / B. Hinz // Am. J. Patholas. - 2012. - T. 180. - P. 1340-1355.

35. Iš pertvaros transversum kilęs mezotelis sukuria kepenų žvaigždžių ląsteles ir perivaskulines mezenchimines ląsteles besivystančiose pelių kepenyse / K. Asahina // Hepatologija. -2011 m. – t. 53.-P. 983-995.

t. 50.-P. 66-71.

38. Thabut, D. Intrahepatinė angiogenezė ir sinusoidinis remodeliavimas sergant lėtinėmis kepenų ligomis: nauji portalinės hipertenzijos gydymo tikslai? / D. Thabut, V. Shah // J. Hepatol. - 2010. - T. 53. - P. 976-980.

39. Wake, K. Kepenų žvaigždžių ląstelės: trimatė struktūra, lokalizacija, nevienalytiškumas ir vystymasis / K.

// priekis. fiziol. – 2015. – Prieigos būdas: http://dx.doi. org/10.3389/fphys.2015.00173. - Priėjimo data: 2016-10-31.

21. Peroksisomų proliferatorių aktyvuojamų receptorių gama modulio-profibrogeninio ir uždegiminio poveikio ligandai kepenų žvaigždžių ląstelėse / F. Marra // Gastroenterologija. -2000. – t. 119. - P. 466-478.

22. Mezenchiminių kaulų čiulpų kamieninių ląstelių transplantacija pacientams, sergantiems HCV susijusia kepenų ciroze / S. Lukashyk // J. Clin. Vertimas Hepatol. - 2014. - T. 2, iss. 4.-R. 217-221.

23. Millonig, G. A. Fosfatinio buferio privalumai osmio tetroksido tirpalams fiksuojant / G. A. Millonig // J. Appl. Rizika. - 1961. - T. 32. - P. 1637-1643.

24. Ankstyvųjų proliferuojančių ovalinių ląstelių žiurkių kepenyse kilmė ir struktūrinė raida / S. Paku // Am. J. Hepatol. – 2001 m.

t. 158. - P. 1313-1323.

25. Miofibroblastų kilmė sergant kepenų fibroze / D. A. Brenneris // Fibrogenesis Tissue Repair. - 2012. - T. 5 tiekimas. 1. - S. 17.

26. Kepenų miofibroblastų kilmė ir funkcijos / S. Lemoinne // Biochim. Biofizė. acta. - 2013. - T. 1832(7). - P. 948-954.

27. Pinzani, M. PDGF ir signalo perdavimas kepenų žvaigždžių ląstelėse / M. Pinzani // Front. biosci. - 2002. - T. 7. - P. 1720-1726.

28. Popper, H. Vitamino A pasiskirstymas audiniuose, kaip nustatyta fluorescencine mikroskopija / H. Popper // Physiol. Rev. – 1944 m.

t. 24.-R. 205-224.

29. Querner, F. Der mikroskopische Nachweis von Vitamin Aimanimalen Gewebe. Zur Kenntnis der paraplasmatischen Leberzellen-einschlüsse. Dritte Mitteilung / F. Querner // Klin. Wschr. - 1935. - T. 14. - R. 1213-1217.

30. Naujausi miofibroblastų biologijos pokyčiai: jungiamojo audinio remodeliavimo paradigmos / B. Hinz // Am. J. Patholas. - 2012. - T. 180. - R. 1340-1355.

31. Reynolds, E. S. Švino citrato panaudojimas esant aukštam pH kaip elektroninė dėmė elektronų mikroskopijoje / E. S. Reynolds // J. Cell. Biol. - 1963. - T. 17. - P. 208-212.

32. Safadi, R. Imuninė kepenų fibrogenezės stimuliacija CD8 ląstelėmis ir transgeninio interleukino-10 susilpninimas iš hepatocitų / R. Safadi // Gastroenterologija. - 2004. - T. 127 straipsnio 3 dalį. - P. 870-882.

33. Sato, T. Ilgesnį laiką fosfatu buferuotame formaline fiksuoto mėginio elektronų mikroskopinis tyrimas / T. Sato, I. Takagi // J. Electron Microsc. - 1982. - T. 31, Nr. 4. - P. 423-428.

34. Senoo, H. Vitamin A-Storing Cells (Stellate Cells) / H. Senoo, N. Kojima, M. Sato // Vitam. Horm. - 2007. - T. 75.

35. Iš pertvaros transversum kilęs mezotelis sukuria kepenų žvaigždžių ląsteles ir perivaskulines mezenchimines ląsteles besivystančiose pelių kepenyse / K. Asahina // Hepatologija. -2011 m. – t. 53.-R. 983-995.

36. Stanciu, A. New data about ITO cell / A. Stanciu, C. Cotutiu, C. Amalinei, Rev. Med. Chir. soc. Med. Nat. Iasi. -2002 m. – t. 107, Nr. 2. - P. 235-239.

37. Suematsu, M. Profesorius Toshio Ito: aiškiaregis pericitų biologijoje / M. Suematsu, S. Aiso // Keio J. Med. – 2000.

t. 50.-R. 66-71.

38. Thabut, D. Intrahepatinė angiogenezė ir sinusoidinė remodeliacija sergant lėtinėmis kepenų ligomis: nauji portalinės hipertenzijos gydymo tikslai? / D. Thabut, V. Shah // J. Hepatol. - 2010. - T. 53.-R. 976-980.

39. Wake, K. Kepenų žvaigždžių ląstelės: trimatė struktūra, lokalizacija, heterogeniškumas ir raida / K. Wake // Proc. Jpn. Akad. Ser. B, fiz. Biol. sci. - 2006. - T.

Wake // Proc. Jpn. Akad. Ser. B, fiz. Biol. sci. - 2006. - T. 82 straipsnio 4 dalį. - P. 155-164.

82 straipsnio 4 dalį. - P. 155-164.

40. Wake, K. In Cells of the Hepatic sinusoid / K. Wake, H. Senoo // Kupffer Cell Foundation (Rijswijk, Nyderlandai). - 1986. - T. 1. - P. 215-220.

41. Watson, M. L. Audinių pjūvių dažymas elektroniniams mikroelementams sunkiaisiais metalais / M. L. Watson // J. Biophys. Biochem. Cyt. - 1958. - T. 4. - P. 475-478.

KLINIKINĖ KEPENŲ CITOLOGIJOS: ŽVAIGŽDŽIŲ LĄSTELĖS (KEpenų žvaigždžių ląstelės)

Tsyrkunovas V. M., Andrejevas V. P., Kravčiukas R. I., Kandratovičius I. A. Mokymo įstaiga „Gardino valstybinis medicinos universitetas“, Gardinas, Baltarusija

įžanga. Ito žvaigždžių ląstelių (Hepatic Stellate Cells, HSC) vaidmuo buvo nustatytas kaip vienas iš pirmaujančių kepenų fibrozės vystymosi srityje, tačiau klinikinėje praktikoje HSC struktūrų intravitalinės vizualizacijos naudojimas yra minimalus.

Darbo tikslas – remiantis intravitalinių kepenų biopsijos mėginių citologinės identifikacijos išvadomis, pateikti struktūrinę ir funkcinę HSC charakteristiką.

medžiagos ir metodai. Taikyti klasikiniai biopsijos mėginių šviesos ir elektroninės mikroskopijos metodai, naudojant originalią ultraplonų pjūvių, fiksavimo ir dažymo metodiką.

rezultatus. Lėtiniu hepatitu C sergančių pacientų kepenų biopsijos mėginių HSC struktūrinės charakteristikos pateiktos šviesos ir elektroninės mikroskopijos nuotraukų iliustracijose. HSC vaizduojami skirtinguose etapuose (poilsio, aktyvacijos) ir transformacijos į miofibroblastus proceso metu.

Išvados. Originalių HSC klinikinio ir morfologinio identifikavimo ir funkcinės būklės vertinimo metodų panaudojimas leidžia pagerinti kepenų fibrozės diagnostikos ir prognozės kokybę.

Sinusoidinės ląstelės (endotelio ląstelės, Kupfferio ląstelės, žvaigždinės ir duobutės ląstelės) kartu su hepatocitų dalimi, nukreipta į sinusoidės spindį, sudaro funkcinį ir histologinį vienetą.

endotelio ląstelės iškloti sinusoidus ir juose yra fenestrų, sudarančių laiptuotą barjerą tarp sinusoidės ir Disse erdvės. Kupferio ląstelės yra prijungtos prie endotelio.

žvaigždžių ląstelės kepenys yra Disse erdvėje tarp hepatocitų ir endotelio ląstelių. Disse erdvė yra audinių skysčio, kuris teka toliau į vartų zonų limfagysles. Didėjant sinusoidiniam slėgiui, padidėja limfos gamyba Disse erdvėje, o tai vaidina svarbų vaidmenį formuojant ascitą, pažeidžiant veninį nutekėjimą iš kepenų.

Kupfferio ląstelėje yra specifinių membraninių receptorių ligandams, įskaitant imunoglobulino Fc fragmentą ir komplemento C3b komponentą, kurie atlieka svarbų vaidmenį pateikiant antigeną.

Kupferio ląstelės aktyvuojamos generalizuotų infekcijų ar traumų metu. Jie specifiškai pasisavina endotoksiną ir reaguodami gamina daugybę faktorių, tokių kaip naviko nekrozės faktorius, interleukinai, kolagenazė ir lizosomų hidrolazės. Šie veiksniai padidina diskomforto ir negalavimo jausmą. Todėl toksinis endotoksino poveikis atsiranda dėl Kupfferio ląstelių sekrecijos produktų, nes jis pats savaime nėra toksiškas.

Kupferio ląstelė taip pat išskiria arachidono rūgšties metabolitus, įskaitant prostaglandinus.

Kupfferio ląstelė turi specifinius membraninius receptorius insulinui, gliukagonui ir lipoproteinams. N-acetilglikozamino, manozės ir galaktozės angliavandenių receptoriai gali tarpininkauti kai kurių glikoproteinų, ypač lizosomų hidrolazių, pinocitozei. Be to, jis tarpininkauja imuninių kompleksų, turinčių IgM, įsisavinimui.

Vaisiaus kepenyse Kupfferio ląstelės atlieka eritroblastoidinę funkciją. Kupferio ląstelių endocitozės atpažinimas ir greitis priklauso nuo opsoninų, plazmos fibronektino, imunoglobulinų ir tuftsino, natūralaus imunomoduliuojančio peptido. Šie „kepenų sietai“ filtruoja įvairaus dydžio makromolekules. Dideli, trigliceridų prisotinti chilomikronai per juos nepraeina, o mažesni, trigliceridų neturtingi, bet cholesterolio ir retinolio prisotinti likučiai gali prasiskverbti į Disse erdvę. Endotelio ląstelės šiek tiek skiriasi priklausomai nuo jų vietos skiltyje. Skenuojanti elektroninė mikroskopija rodo, kad susidarius pamatinei membranai fenestrijų skaičius gali gerokai sumažėti; šie pokyčiai ypač ryškūs sergančiųjų alkoholizmu 3 zonoje.

Sinusoidinės endotelio ląstelės aktyviai pašalina makromolekules ir mažas daleles iš kraujotakos naudojant receptorių sukeltą endocitozę. Jie turi paviršinius hialurono rūgšties (pagrindinio jungiamojo audinio polisacharido komponento), chondroitino sulfato ir glikoproteino, kurio gale yra manozės, receptorius, taip pat II ir III tipo receptorius FcIgG fragmentams ir lipopolisacharidus jungiančio baltymo receptorius. Endotelio ląstelės atlieka valymo funkciją, pašalindamos audinius žalojančius fermentus ir patogeninius veiksnius (tarp jų ir mikroorganizmus). Be to, jie išvalo kraują nuo sunaikinto kolageno ir suriša bei sugeria lipoproteinus.

kepenų žvaigždžių ląstelės(riebalus kaupiančios ląstelės, lipocitai, Ito ląstelės). Šios ląstelės yra Disse subendotelinėje erdvėje. Juose yra ilgų citoplazminių ataugų, kai kurios glaudžiai kontaktuoja su parenchiminėmis ląstelėmis, o kitos pasiekia keletą sinusoidų, kur gali dalyvauti reguliuojant kraujotaką ir taip paveikti portalinę hipertenziją. Normaliose kepenyse šios ląstelės yra tarsi pagrindinė retinoidų saugojimo vieta; morfologiškai jis atrodo kaip riebalų lašeliai citoplazmoje. Po šių lašelių išsiskyrimo žvaigždžių ląstelės tampa panašios į fibroblastus. Juose yra aktino ir miozino ir jie susitraukia, kai veikia endotelinu-1 ir medžiaga P. Pažeidus hepatocitus, žvaigždžių ląstelės netenka riebalų lašelių, dauginasi, migruoja į 3 zoną, įgyja fenotipą, panašų į miofibroblastų, ir gamina I, III tipą. ir IV kolageno, taip pat laminino. Be to, jie išskiria ląstelių matricos proteinazes ir jų inhibitorius, tokius kaip metaloproteinazių audinių inhibitorius (žr. 19 skyrių). Disse erdvės kolagenizacija sumažina su baltymais susietų substratų patekimą į hepatocitus.

Duobės ląstelės. Tai labai judrūs limfocitai – natūralūs žudikai, prisitvirtinę prie endotelio paviršiaus, nukreipto į sinusoidės spindį. Jų mikrovileliai arba pseudopodijos prasiskverbia į endotelio pamušalą, susijungdami su parenchiminių ląstelių mikrovileliais Disse erdvėje. Šios ląstelės ilgai negyvena ir atsinaujina cirkuliuojantys kraujo limfocitai, kurie diferencijuojasi į sinusoidus. Jie rodo būdingas granules ir pūsleles, kurių centre yra strypai. Duobės ląstelės turi spontanišką citotoksiškumą prieš naviką ir virusu užkrėstus hepatocitus.

Sinusoidinių ląstelių sąveika

Yra sudėtinga sąveika tarp Kupfferio ląstelių ir endotelio ląstelių, taip pat tarp sinusoidinių ląstelių ir hepatocitų. Ląstelių aktyvinimas kupferalipolisacharidais slopina hialurono rūgšties pasisavinimą endotelio ląstelėse. Šį poveikį gali sukelti leukotrienai. Sinusoidinių ląstelių gaminami citokinai gali stimuliuoti arba slopinti hepatocitų proliferaciją.



Tarpląstelinis ryšys gali būti realizuotas parakrinine sekrecija ir tiesioginiais ląstelių kontaktais. Yra žinoma, kad kepenų perisinusoidinės ląstelės (HPC) nustato regioninę kamieninių ląstelių nišą ir nustato jų diferenciaciją. Tuo pačiu metu HPC išlieka prastai apibūdintas molekuliniu ir ląstelių lygiu.

Projekto tikslas buvo ištirti žiurkių kepenų perisinusoidinių ląstelių sąveiką su įvairiomis kamieninėmis ląstelėmis, tokiomis kaip žmogaus virkštelės kraujo mononuklearinių ląstelių frakcija (UCB-MC) ir iš žiurkės kaulų čiulpų gautų daugiapotencinių mezenchiminių stromos ląstelių (BM-MMSC).

medžiagos ir metodai. Žiurkės BM-MSC ir HPC, žmogaus UCB-MC ląstelės buvo gautos naudojant standartinius metodus. Norėdami ištirti HPC parakrininį reguliavimą, kartu auginome UCB-MC arba BM-MMSC ląsteles su HPC, naudodami Boyden kameras ir kondicionuotas HPC ląstelių terpes. Skirtingai pažymėtos ląstelės buvo auginamos kartu, o jų sąveika buvo stebima fazinio kontrasto fluorescencine mikroskopija ir imunocitochemija.

rezultatus. Pirmąją auginimo savaitę buvo vitamino A autofluorescencija dėl PHC gebėjimo kaupti riebalus. BM-MMSC parodė didelį gyvybingumą visuose bendros kultūros modeliuose. Po 2 dienų inkubacijos kondicionuotoje terpėje BM-MMSC kartu su HPC, pastebėjome MMSC morfologijos pokyčius – sumažėjo jų dydis ir trumpėjo jų daigai. α-Smooth Muscle Aktino ir desmino ekspresija buvo panaši į miofibroblastą – tarpinę Ito ląstelių kultūros formą in vitro. Šie pokyčiai gali atsirasti dėl parakrininės stimuliacijos HPC. Didžiausias HPC poveikis UCB-MC ląstelėms buvo pastebėtas bendroje kontaktinėje kultūroje, todėl UCB-MC ląstelėms svarbu sukurti tiesioginius kontaktus tarp ląstelių, kad būtų išlaikytas jų gyvybingumas. Mes nepastebėjome jokio ląstelių sintezės tarp HPC / UCB ir HPC / BM-MMSC ląstelių bendrose kultūrose. Tolesniuose eksperimentuose planuojame tirti HPC gaminamus augimo faktorius, skirtus kamieninėms ląstelėms diferencijuoti kepenyse.

Įvadas.

Tarp įvairių kepenų ląstelių yra ypač įdomu perisinusoidinės kepenų ląstelės (Ito ląstelės). Dėl augimo faktorių ir ekstraląstelinės matricos komponentų išskyrimo jie sukuria hepatocitų mikroaplinką, o daugybė mokslinių tyrimų parodė kepenų žvaigždžių ląstelių gebėjimą formuoti mikroaplinką pirmtakinėms ląstelėms (įskaitant kraujodaros) ir daryti įtaką jų diferenciacijai į hepatocitai. Šių ląstelių populiacijų tarpląstelinė sąveika gali būti vykdoma parakrinine augimo faktorių sekrecija arba tiesioginiais tarpląsteliniais kontaktais, tačiau šių procesų molekulinis ir ląstelinis pagrindas lieka neištirtas.

Tyrimo tikslas.

Sąveikos mechanizmų tyrimas Ito ląstelės su hematopoetinėmis (HSC) ir mezenchiminėmis (MMSC) kamieninėmis ląstelėmis in vitro sąlygomis.

Medžiagos ir metodai.

Žiurkių kepenų Ito ląstelės buvo išskirtos dviem skirtingais fermentiniais metodais. Tuo pačiu metu stromos MMSC buvo gauti iš žiurkių kaulų čiulpų. Hematopoetinių kamieninių ląstelių, išskirtų iš žmogaus virkštelės kraujo, mononuklearinė frakcija. Ito ląstelių parakrininis poveikis buvo tiriamas kultivuojant MMSC ir HSC terpėje, kurioje augo Ito ląstelės, ir kartu kultivuojant ląsteles, atskirtas pusiau pralaidžia membrana. Ištirta tarpląstelinių kontaktų įtaka auginant ląsteles. Siekiant geriau vizualizuoti, kiekviena populiacija buvo pažymėta individualia fluorescencine etikete. Ląstelių morfologija buvo įvertinta faziniu kontrastu ir fluorescencine mikroskopija. Kultivuotų ląstelių fenotipinės savybės buvo tiriamos imunocitochemine analize.

Rezultatai.

Per savaitę po perisinusoidinių ląstelių išskyrimo pastebėjome jų gebėjimą autofluorescencuoti dėl jų gebėjimo kaupti riebalus. Tada ląstelės perėjo į tarpinę augimo fazę ir įgavo žvaigždžių formą. Pradinėse Ito ląstelių auginimo su žiurkės kaulų čiulpų MMSC stadijose MMSC gyvybingumas buvo išlaikytas visuose auginimo variantuose. Antrą dieną, kai MMSC buvo auginami Ito ląstelių auginimo terpėje, pasikeitė MMSC morfologija: sumažėjo jų dydis, sutrumpėjo procesai. Alfa lygiųjų raumenų aktino ir desmino ekspresija MMSC padidėjo, o tai rodo jų fenotipinį panašumą su miofibroblastais, tarpine aktyvuotų Ito ląstelių augimo stadija in vitro. Mūsų duomenys rodo Ito ląstelių išskiriamų parakrininių faktorių poveikį MMSC savybėms kultūroje.

Remiantis hematopoetinių kamieninių ląstelių auginimu kartu su Ito ląstelėmis, buvo įrodyta, kad hematopoetinės kamieninės ląstelės išlieka gyvybingos tik tada, kai jos kartu auginamos su Ito ląstelėmis. Remiantis mišrių kultūrų fluorescencine analize, skirtingų populiacijų ląstelių susiliejimo reiškinys nebuvo atskleistas.

Išvados. Norint išlaikyti hematopoetinių kamieninių ląstelių gyvybingumą, tiesioginis tarpląstelinis kontaktas su Ito ląstelėmis yra lemiamas veiksnys. Parakrininis reguliavimas buvo pastebėtas tik tada, kai MMSC buvo auginami maistinėje terpėje, kurioje augo Ito ląstelės. Ito ląstelių gaminamų specifinių veiksnių įtakos HSC ir MMSC diferenciacijai ląstelių kultūroje tyrimą planuojama atlikti būsimuose tyrimuose.

Shafigullina A.K., Trondin A.A., Shaikhutdinova A.R., Kaligin M.S., Gazizov I.M., Rizvanov A.A., Gumerova A.A., Kiyasov A.P.
SEI HPE "Federalinės sveikatos ir socialinės plėtros agentūros Kazanės valstybinis medicinos universitetas"