Vetlek_Item Object ( => vetlek_cps_availability_alarms => vetlek_cps_customers => vetlek_cps_properties_to_groups => vetlek_cps_items => vetlek_cps__seq_items => vetlek_cps_images => vetlek_cps_images_to_items => vetlek_cps__seq_images => vetlek_cps_properties => vetlek_cps_properties_to_items => vetlek_cps_items_to_groups => /var/www/www-root/data/www /vetlek.ru/img/shop/items/ => /img/shop/items/ => 5129 => Serumas nuo pastereliozės, salmoneliozės, escherichiozės, paragripo-3 ir infekcinio galvijų rinotracheito, buteliukas 100 ml => = >

SUDĖTIS IR IŠLEIDIMO FORMA
Serumas nuo pastereliozės, salmoneliozės, escherichiozės, paragripo-3 ir infekcinio galvijų rinotracheito yra biologinis produktas, gaunamas iš jaučių kraujo, hiperimunizuoto su inaktyvuotomis salmoneliozės, escherichiozės ir pastereliozės, avirulentinio parafinito viruso ir infekcinio 3 padermio patogenų padermėmis. Išvaizda tai šviesiai geltonas skystis su rausvu atspalviu, laikymo metu susidaro nedidelės nuosėdos, kurios lengvai lūžta purtant buteliuką. Serumas supakuotas į 100 ml stiklinius buteliukus, pagamintus iš tamsaus stiklo, hermetiškai uždarytus polimeriniais dangteliais ir susuktus į aliuminio dangtelius.

FARMAKOLOGINĖS SAVYBĖS
Hiperimuninis serumas padeda formuoti pasyvų imunitetą galvijų salmoneliozės, pastereliozės, E. coli, infekcinio rinotracheito ir paragripo-3 sukėlėjams, kurių intensyvumas yra 10 dienų. Vakcinos naudojamos intensyviam aktyviam gyvūnų imunitetui nuo infekcijų formuoti. Serumo veikimo mechanizmas pagrįstas patogeninių antigenų surišimu ir neutralizavimu specifiniais biologinio produkto antikūnais. Hiperimuninis serumas yra veiksmingas gydant minėtas ligas, ypač ankstyvosiose infekcinio proceso stadijose, ir gerai derinamas su vaistais simptominis gydymas(antimikrobiniai vaistai ir probiotikai).

INDIKACIJOS
Skirti galvijams specifinei salmoneliozės, pastereliozės, escherichiozės, paragripo-3 ir infekcinio rinotracheito profilaktikai ir gydymui.

DOZĖS IR NAUDOJIMO METODAS
Prieš įvedant serumą, švirkštus ir adatas būtina sterilizuoti. Kiekvienam gyvūnui naudojama atskira sterili adata. Prieš vartojimą buteliuką reikia stipriai sukratyti, o injekcijos vietą apdoroti 70 % etilo alkoholiu. Prieš įvedant buteliuką reikia pašildyti vandens vonioje iki 36–38 ºС temperatūros. NUO prevencinis tikslas serumas gyvūnams švirkščiamas po oda du kartus su 7-10 dienų intervalu: veršeliams po 20-30 ml, suaugusiems gyvuliams po 30-60 ml. NUO terapinis tikslas Serumas švirkščiamas į raumenis arba į veną Pradinis etapas infekcinė liga: veršeliai 40-60 ml, suaugę gyvuliai 60-120 ml. Nebuvimas terapinis poveikis jau po injekcijos rodo kitokią ligos etiologiją, diagnozei patikslinti reikėtų atlikti papildomus laboratorinius tyrimus.

ŠALUTINIAI POVEIKIAI
Labai retais atvejais, padidėjus individualiam gyvūnų jautrumui, galimos alerginės reakcijos.

KONTRAINDIKACIJOS
Naudojant serumą, kontraindikacijų nenustatyta.

Kraujas jau paimtas iš 1000 gyvūnų, serumas išpilstytas ir nemokamai išdalintas beveik 20 tūkstančių vaikų. Taigi buvo įrodyta, kad pramoninė išrūgų gamyba skerdykloje, laikantis aseptikos ir sanitarinių taisyklių, yra įmanoma.

Seroterapijos įmonė papildomų garantijų nesuteikia – neturi teisės atlikti gyvūno donoro skrodimo.

Mūsų gamyboje naudojama technologija gali atrodyti ne tokia griežta aseptikos požiūriu nei klasikinis metodas. Tačiau jis turi didelį greičio pranašumą, nes serumas visiškai gaminamas kraujo mėginių ėmimo dieną.

Jei dabartinės aplinkybės paskatino mus gaminti išrūgas skerdykloje, aišku, kad tai laikina priemonė, nes hematogenas ir terapinis serumas galima atlikti tik specializuoto instituto sąlygomis.

Gyvūnų atranka. Lione skerdyklos vyriausiasis veterinarijos gydytojas daktaras Guieux ir veterinarijos inspektorius daktaras Fontenay patys atrenka donorus iš galvijų, kuriems lemta aprūpinti mūsų miestą mėsa. Pasirinktas gyvūnas yra paženklintas ant dešiniojo peties, kad būtų lengviau kontroliuoti. Po skerdimo gyvūnų organai yra kruopščiai tikrinami. Yra žinoma, kad skrodimas yra patikimiausias tuberkuliozės nustatymo metodas.

Vėlesnės operacijos parodys, kad sergančio gyvūno serumas niekada nebuvo vartojamas.

Gyvūnų kraujo mėginių ėmimas. Kraujo paėmimo patalpoje jautį donorą saugiai laiko automatinis jungas.

Veterinarijos gydytojas dezinfekuoja odą jodu gyvūno kaklo lygyje ir skalpeliu padaro pjūvį šioje vietoje. jugulinė vena. Venų punkcija atliekama trokaru, sterilizuotu ilgo virinimo būdu. Kai tik pasirodo kraujas, prie trokaro pritvirtinama autoklavuota guminė žarna, kad jis būtų tiesiogiai ir aseptiškai prijungtas prie defibrinatoriaus.

Defibrinavimo technologija ir defibrinatoriaus sterilizavimo metodas aprašyti toliau.

Iš kiekvieno gyvūno gaunama 8-10 litrų kraujo, kuris pasveriamas ant svarstyklių, esančių po aparatu. Siekiant palengvinti sanitarinės kontrolės veikimą, kiekvienas defibrinatorius turi etiketę su gyvūno donoro duomenimis.

Reikėtų pažymėti, kad kraujo mėginių ėmimas atliekamas aseptiškai dėl uždaros visų komponentų grandinės: troakaro, guminės žarnos ir defibrinatoriaus, kurie yra iš anksto sterilizuoti.

Gautą kraują nuo venos punkcijos momento, kol jis paverčiamas serumu ir laikomas šaldytuvuose, lydi etiketė su kraujo paėmimo data.

Kraujo defibrinacija. Daugumoje seroterapijos įstaigų kraujas, pilamas į stiklinius indus, spaudžiamas apkrovos atskiria serumą. Tokiomis sąlygomis kraujas, pirmą kartą gautas iš galvijų, turi mažai serumo (apie 10%). Štai kodėl Liono seroterapijos centre naudojama speciali technologija, kuri suteikia 50% serumo ir per trumpesnį laiką.

Daktaras Merrier sugebėjo sukurti šį metodą iš dalies po išvadų, kurias jis padarė Karališkajame Roterdamo institute ir Seroterapijos institute Milane.

Kai tik šiuose institutuose gaunamas kraujas, jis defibrinuojamas steriliais aparatais, primenančiais sviesto kekes. Per 5 minutes kraujas suplakamas nuo oro apsaugotame inde. Būtina griežtai laikytis defibrinacijos laiko: esant jo trūkumui, gali atsirasti krešėjimas, o esant pertekliui - hemolizė (dėl raudonųjų kraujo kūnelių plyšimo). Būtina naudoti laboratorinį laikrodį, leidžiantį pažymėti tiksliai 15 minučių defibrinacijos.

Fig. viršuje. 4 matyti, kad kraujo paėmimų skaičius pasiekė 1000, tai užfiksuota Centro herbe.

centrifugavimas. Iš karto po defibrinacijos aparatai perkeliami į laboratoriją, esančią už kelių metrų nuo kraujo paėmimo patalpos. Kiekvieno defibrinatoriaus turinys apdorojamas atskirai, kad būtų galima pašalinti sergančio gyvūno serumą.

Nekrešėjęs kraujas po defibrinacijos praleidžiamas per Alfa Laval separatorių (mūsų pritaikytą pieno separatorių išrūgų gamybai). Veikiant išcentrinei jėgai, kraujas padalijamas į lygias dalis: raudoname yra raudoni rutuliukai, o skaidrus – serumas (fibrinas lieka ant defibrinatoriaus ašmenų).

Iš vieno gyvūno gaunama 8-10 litrų kraujo arba apie 4-5 litrus serumo, kuris supilamas į Pyrex buteliuką, sterilizuotą 180°C temperatūroje. Ant buteliuko pritvirtinama defibrinatoriaus etiketė, o kortelė užpildoma tuo pačiu numeriu, kad būtų užtikrinta sanitarinė kontrolė.

Į serumą pridedamas specialus antiseptikas, paskaičiuotas taip, kad jis būtų pakankamai aktyvus, nepažeidžiant serumo skaidrumo ir skonio. Į 1 litrą serumo taip pat įpilama 100 ml tirpalo, kuriame yra 1:1000 formalino ir 1:5000 Syunuxol. (Tarp paruošimų centrifuga kruopščiai dezinfekuojama antiseptiku.)

Iš esmės raudonoji kraujo frakcija turėtų būti grąžinta mėsininkams juodajam pudingui gaminti, tačiau dažniausiai ji lieka nepanaudota, todėl iš jos galima gaminti sirupą pagal žemiau aprašytą technologiją.

Ypatingi kraujo sirupo gaminimo atvejai. Sirupas turi du privalumus: leidžia panaudoti raudonąją kraujo dalį, likusią gavus serumą, ir yra malonaus, vaikams patinkančio skonio.

Dėl glicerino trūkumo sunku paruošti sirupą ilgalaikiam saugojimui, tačiau labai aktyvų produktą galima pasigaminti vandenyje ir duoti vaikams po 2-3 valgomuosius šaukštus per dieną. Į raudonąją kraujo dalį įpilama 20% geriamojo vandens, o sirupas laikomas ledynuose, kol atliekama sanitarinė kontrolė. Tada pridėkite lygią 100 proc. cukraus sirupas(cukrų galima gauti iš komandų, kurioms skirtas sirupas, kortelių).

Į sirupą dedamas citrinos arba apelsinų ekstraktas, neutralizuojantis kraujo skonį, išpilstomas į 250 ml butelius.

Serumo tindalizacija. Iškart po centrifugavimo, ty praėjus mažiau nei vienai valandai po kraujo mėginio paėmimo, serumas 56°C temperatūroje vieną valandą slankioja. Norėdami tai padaryti, jis nuleidžiamas į vandens vonią su automatiškai palaikoma temperatūra. Tindalizacija šioje temperatūroje (kai serumas koaguliuoja aukštesnėje temperatūroje) būtina norint iš dalies sterilizuoti serumą, nors jo paruošimo greitis savaime yra aseptikos garantas.

Reikėtų pažymėti, kad kiekviename penkių litrų buteliuke yra originali defibrinatoriaus etiketė, todėl serumo numeracija atitinka gyvūnų donorų numeraciją.

Valdymo failas. Kortelė leidžia bet kada patikrinti gyvūno donoro kilmę, išrūgų paruošimo etapus, išpilstymo datą, taip pat išrūgų paskirstymą.

Sanitarinė kontrolė. Kol indai laikomi šaldytuve, veterinarijos inspektoriai atlieka gyvūnų donorų sanitarinę kontrolę. Po jų paskerdimo atliekama nuodugni skrodimas, siekiant atskleisti menkiausius tuberkuliozės simptomus. Jei nustatoma liga, atitinkamą serumą galima lengvai išimti. Yra žinoma, kad kiekvieno gyvūno kraujas apdorojamas atskirai, o serumas yra atskiruose sunumeruotuose buteliukuose.

Vaikų higienos visuomeninio komiteto seroterapijos centras Liono skerdyklose

Kontrolinis numeris...

Jautienos serumas litrais

Aukščiau pateikta kortelė ir etiketė apsaugo nuo painiavos.

Lione ypač griežtos sanitarinės priemonės, nes tie patys veterinarai atrenka gyvulius, ima kraują ir tikrina mėsą.

Įrangos sterilizavimas. Gyvūnų serumai yra puiki terpė daugintis mikrobams, juos galima sterilizuoti tik iš dalies. Esant aukštesnei nei 56 ° temperatūrai, jie koaguliuoja ir tampa drumsti, jei pridedamas stiprus antiseptikas. Todėl visose išrūgų gamybos operacijose būtinas maksimalus sterilumas, prieš naudojimą įranga turi būti pritvirtinta.

Atskiri defibrinatoriai sterilizuojami taip: naktį prieš kraujo paėmimą jie užpildomi antiseptinis tirpalas, o likus kelioms valandoms iki kraujo mėginių paėmimo, jie išleidžiami iš antiseptiko naudojant čiaupą, esantį apatiniame aparato kostiume. Serumo centrifugos taip pat apdorojamos antiseptiku, įskaitant kiekvieno defibrinatoriaus turinio apdorojimą.

Elektrinėje orkaitėje 180 ° C temperatūroje visi stikliniai indai sterilizuojami, įskaitant penkių litrų talpos indus išrūgoms laikyti.

250 ml talpos buteliukai serumui taip pat sterilizuojami 180°C temperatūroje. Siekiant supaprastinti operaciją, indai yra dėžėse, kurios naudojamos išpilstymui ir platinimui visuomenei.

Galvijų serumas ląstelių kultūroms - 100 ml., 200 ml., 400 ml., skystas, sterilus.

Surenkama iš karvių širdies iki 3 metų. Skaidrus skystis nuo šiaudų geltonumo iki rausvai oranžinės spalvos.

Laikymo metu leidžiamas nežymus opalescencija ir nežymios flokuliuojančios nuosėdos, kurios purtant suyra. Skaidrumas (optinio tankio vienetas): ne daugiau 0,45; pH: nuo 7,4 iki 8,2; baltymai, (g/l): nuo 60,0 iki 80,0; hemoglobinas, (g/l): ne daugiau 0,5; sterilus; nėra mikoplazmų ir virusų; specifinis aktyvumas - žmogaus embriono raumenų ir kaulų audinio LEC, LEC tipo arba diploidinių ląstelių kultūroms: monosluoksnio susidarymas 3-4 dienas, proliferacijos indeksas po 5 pasažo ne mažesnis kaip 2,0; sandėliavimas ir transportavimas: tamsoje nuo -10°C iki -20°C temperatūroje.

Geriausias iki data:

2 metai -20°C, 1 metai nuo +2°C iki +8°C. Transportas: šaldytas.
Atitirpinant galvijų serumą ląstelių kultūroms, gali atsirasti fibrino, kuris neturi įtakos serumo kokybei.
Vežant serumą 1-2 savaites +4 °C temperatūroje, galimas dalinis augimo savybių praradimas, serumo drumstumas su mažų nuosėdų ir riebalinio žiedo atsiradimu buteliuko viršutinėje dalyje. Gavus tokį serumą, jį reikia nedelsiant užšaldyti. Tokiu atveju serumo tinkamumo laikas sutrumpėja iki 1,5 metų.
Jeigu pirkėjui neįmanoma pristatyti (arba pirkėjas nenori mokėti už pristatymą) šaldytų išrūgų, pirkėjas turi pateikti garantinį raštą, kuriame nurodoma, kad pretenzijų gamintojui dėl galimo pakeitimo nėra. išvaizda ir serumo kokybė, nurodant pageidaujamą serumo tiekimo būdą.

Skirtingi galvijų serumo pavadinimai: galvijų serumas, galvijų serumas, galvijų serumas, galvijų serumas.

Kaina: pageidaujant

Prekę į krepšelį galite įdėti nurodę kiekį

Patento RU 2460786 savininkai:

Išradimas yra susijęs su biotechnologijomis. Kraujo serumo gavimo metodas apima du etapus. Pirmajame etape gaunamas vietinis suaugusių galvijų kraujo serumas. Tuo pačiu metu kraujas aseptiškai imamas tik iš bulių širdies į polikarbonato butelius, į kuriuos pirmiausia pilamas 100-200 ml 5% natrio chlorido tirpalo. Buteliukai pripildomi krauju maždaug puse savo tūrio ir perkeliami į +1-+2°C temperatūros šaldytuvą, pastatomi 35° kampu 72 valandoms. Tada išrūgos išsiurbiamos ir iš anksto išvalomos EKS filtrais +2-+6°C temperatūroje. Po to polietileno kanistrai pripildomi išrūgų ir laikomi -(15-20)°C temperatūroje mažiausiai savaitę. Antrasis etapas – ląstelių augimą slopinančių medžiagų pašalinimas iš bulių kraujo serumo vienkartinio užšaldymo ir atšildymo metodu. Surenkami viršutiniai šviesūs serumo sluoksniai, pradedant nuo viršaus iki sąsajos tarp jų ir hemolizuotų sluoksnių, o preliminarus išvalymas atliekamas per EKS giluminius filtrus. Tada sterilizuojantis filtravimas atliekamas per membraninius filtrus +2-+6°C temperatūroje. Metodas leidžia gauti serumą, tinkamą gyvūnų ir žmogaus ląstelėms, įskaitant hibridomas, auginti, padidinti serumo išeigą iki paimamo kraujo tūrio ir pagerinti jo kokybę. 6 tab., 5 pr.

Išradimas yra susijęs su biotechnologijomis ir gali būti naudojamas gyvūnų, žmonių ir hibridomos ląstelių linijų auginimui.

Žinomuose literatūriniuose šaltiniuose šio kraujo serumo gavimo technologija aprašyta labai paviršutiniškai (Ląstelių kultūros metodai biochemikams / R.A. Adams: Išversta iš anglų kalbos – M.: Mir. – 1983. – 264 p.; gyvūnų ląstelė kultūroje / Red. prof. L.P. Dyakonova. - M.: Leidykla "Sputnik +". - 2009. - 656 p.), o šaltinis internete (http:wwwleitran.ru/page.php?al=sivorotka) iš viso nepateikia informacijos apie jo gamybą.

Yra žinomas suaugusių galvijų kraujo serumo gavimo būdas, kurį laikėme artimu analogu: paimant kraują iš gyvulių iš širdies ar jungo venos, nusodinant, surenkant ir sterilizuojant galutinio produkto filtravimą, aprašytą redaguotoje žinyne. pateikė B. I. Antonovas ( Laboratoriniai tyrimai veterinarijoje: vadovas / B.I.Antonovas, V.Borisova, P.M.Volkovas ir kt., red. B.I.Antonova. - M.: Agropromizdat. - 1986. - 352 p.). Tačiau šis analogas turi reikšmingų trūkumų:

1. Kraujas imamas ir iš karvių, ir iš bulių (gerai žinoma, kad gyvulių kraujo serumas labai skiriasi nuo lyties);

2. Kraujo mėginiai imami dviem būdais: iš širdies be aseptikos ir iš jungo venos su aseptika, tačiau 10 litrų butelių pripildymo iki 5 litrų žymos trukmė yra 6-10 minučių ir daugiau;

3. Krauju pripildyti tik stikliniai buteliai, kurie dažnai dūžta ir yra potencialus su jais dirbančių darbuotojų traumų šaltinis, be to, brangūs;

4. Išrūgų dumblas atliekamas šaldytuve 24-48 valandas +6-+10°C temperatūroje, o š. aukštos temperatūros sparčiai dauginasi vulgari mikroflora, dėl kurios sumažėja galutinio produkto kokybė;

5. Serumo išeiga yra nereikšminga (20-25 % paimto kraujo tūrio), nes buteliukų sienelėms drėkinti ir kraujui paimti iš jungo venos naudojamas fiziologinis NaCl tirpalas;

6. Surinktos išrūgos pašildomos iki +30-+37°С išankstiniam išvalymui per EKS giluminius filtrus, o po to sterilizuojant filtravimą per miliporinius membraninius filtrus. Atsižvelgiant į tai, kad išrūgų filtravimas yra ilgas procesas, aukštoje temperatūroje jose greitai kaupiasi mikroflora, o tai neigiamai veikia jo kokybę;

7. Dėl baltymų nusodinimo ir patikimesnei sterilizacijai rekomenduojamas 2-3 kartus didesnis išrūgų filtravimas, kuris padidina galutinio produkto paruošimo laiką ir eksploatacinių medžiagų kainą;

8. Šia technologija gautas serumas neatitinka daugelio fizikinių ir cheminių parametrų ir yra netinkamas gyvūninės kilmės ląstelių kultivavimui.

Kitas analogas, bet tik skirtas kokybės charakteristikas, matome vaisiaus karvių kraujo serumą, kuris iki šiol laikomas geriausiu biologiniu priedu maistinėse terpėse, skirtose auginti gyvūnų ir žmonių ląstelių kultūras (TU FS 42-7BC-85), patvirtintas SSRS Sveikatos apsaugos ministerijos 1985 m. balandžio 4 d. .

Kad išradimo tikslas būtų aiškus, 1 lentelėje parodytos ląstelių augimo inhibitorių ir kitų kokybės rodiklių koncentracijos natūraliame suaugusių galvijų kraujo serume pagal TU 49.24 b-82 ir natūralaus karvių vaisiaus kraujo serume pagal TU FS 42-7BC-85, patvirtintas SSRS Sveikatos apsaugos ministerijos 1985 m. balandžio 4 d.

Techniniu požiūriu artimiausias sprendimas yra suaugusių galvijų kraujo serumo gavimo būdas, aprašytas 1994 m. kovo 5 d. RF patente Nr. šio išradimo prototipas.

Technologinis procesas pagal šį patentą apima vietinių gyvūnų kraujo serumų užšaldymą -(15-20)°C temperatūroje 24-48 valandas, po to atšildymą kambario temperatūroje, lengvų serumo sluoksnių surinkimą, pradedant nuo viršaus iki sąsajos. su hemolizuotomis frakcijomis, sterilizuojantis filtravimas ir gautų preparatų kokybės kontrolė.

Išradimo tikslas – ženkliai padidinti serumo išeigą paimamo kraujo tūriui, pagerinti jo kokybę, taip pat gauti suaugusių galvijų kraujo serumą, tinkamą gyvūnų ir žmogaus ląstelėms, įskaitant hibridomas, auginti, pašalinant atskirus inhibitorius. vietinis bulių ląstelių augimo kraujo serumas.

Uždavinį mes išsprendžiame tuo, kad taikant suaugusių galvijų kraujo serumo gavimo būdą, buvo atlikti reikšmingi, tiesiogiai priešingi esamiems literatūros šaltiniams, jo gamybos technologijos pakeitimai.

Skirtingai nuo šio išradimo, mūsų siūlomame projekte, jaučių kraujo serumo atšildymo metu pašalinamų komponentų procentas sumažinamas iki 5-10%, be to, kraujo serumas iš anksto filtruojamas +2-+6°C temperatūroje. per EKS filtrus, o paskui per bet kurios patikimos įmonės sterilizuojančius membraninius filtrus, pavyzdžiui: Millipore Intertec USA, jos filialas Airijoje arba Vladisart Russia. Šis suaugusių galvijų kraujo serumo gavimo būdas gyvūninės kilmės ląstelėms auginti apima du etapus:

1 etapas – esminis suaugusių galvijų natūralaus kraujo serumo gamybos pokytis, o tai labai reikšmingas pokyčio momentas. technologinis procesas: kraujo mėginiai imami tik iš bulių ir tik iš širdies aseptiškai su specialiomis sistemomis į stiklinius arba polikarbonato butelius, kurių talpa 10-20 litrų, į kuriuos pilamas 5% natrio chlorido tirpalas, kurio tūris yra 100-200 ml. preliminariai supiltas. Buteliai pripildomi kraujo, maždaug pusė jų tūrio, paliekami stovėti vertikali padėtis 2-3 valandas skerdykloje, o po to perkeliama į šaldytuvą, kurio temperatūra +1-+2 °C ir pastatoma 35 ° kampu 72 valandoms, po to nusistovėjęs serumas surenkamas specialia sistema ( jo išeiga iki paimto kraujo tūrio viršija 40%), išankstinis jo valymas EKS filtrais +2-+6°С temperatūroje, kuris supilamas į 20 litrų polietileno kanistrus ir laikomas -(15- 20)°С bent savaitę.

2 etapas – šaldant-atšildant iš bulių kraujo serumo pašalinamos ląstelės augimą slopinančios medžiagos (hemoglobino likutis, bendrieji lipidai, γ-globulinai ir kt.), surenkami viršutiniai šviesūs serumo sluoksniai, pradedant nuo viršus, iki jos ribos su hemolizuotomis frakcijomis, išankstinis valymas per EKS giluminius filtrus, o po to sterilizuojantis filtravimas per membraninius filtrus su 400-450 ml pakuotėmis 500 ml buteliukuose, sterilumo ir biologinio aktyvumo kontrolė.

Esminis skirtumas tarp galvijų kraujo serumo gavimo būdo yra tas, kad mes naudojame jo gamybos technologiją, kuri yra tiesiogiai priešinga esamiems metodams, kurių pagrindimas pateikiamas toliau keliuose pavyzdžiuose.

1 pavyzdys. Kraujo paėmimas iš bulių ir serumo atskyrimas.

Kraujo mėginiai iš bulių, siekiant gauti serumą, buvo imami laikantis aseptikos reikalavimų dviem aseptiniai metodai: iš jungo venos ir širdies į 10 litrų talpos stiklinius arba 20 litrų polikarbonato butelius, į kuriuos supilama 100-200 ml 5% natrio chlorido tirpalo.

Nustatėme, kad imant kraują iš bulių širdies 10 litrų butelių pripildymo iki 5 litrų žymos laikas buvo 1-2 minutės, o iš jungo venos - 8-10 minučių.

Paėmus kraują į butelius, jie 2 valandas stovėti vertikaliai kambario temperatūroje, o po to 72 valandoms dedami į šaldytuvą ant stelažų 35° kampu +1-+2°C temperatūroje. Buteliukų su krauju padėtis 35° kampu prisideda prie geresnio krešulių atsitraukimo, o +1-+2°C serumo dumblo temperatūra neleidžia daugintis netyčia į kraują patekusiai mikroflorai.

Pavyzdys 2. Lyginamasis bulių serumo atskyrimo tyrimas, priklausomai nuo kraujo paėmimo vietos ir procentais natrio chloridas tirpale.

Šio eksperimento rezultatai pateikti 2 lentelėje. Eksperimente yra trys variantai. Kiekvienoje versijoje 20 butelių, kurių kraujo tūris nuo 4,65 iki 5,10 litro. 1 variante kraujas buvo paimtas iš jungo venos į 10 litrų butelius, kuriuose buvo 100 ml 1% NaCl tirpalo. 2 variante kraujas buvo paimtas iš širdies 100 ml buteliukuose su 1% NaCl tirpalu, o 3 variante kraujas taip pat buvo paimtas iš širdies, tačiau į butelį buvo pilamas 100 ml 5% NaCl tirpalo.

Kaip matyti iš 2 lentelės, serumo išeiga iš kraujo, paimto iš bulių širdies butelyje su 1% NaCl tirpalu, yra žymiai didesnė nei iš kraujo, paimto iš jungo venos. Hipertoninio 5% NaCl tirpalo naudojimas, pilamas į butelius, kad sudrėkintų jų sieneles, prisideda prie dar didesnio serumo išsiskyrimo iš kraujo, paimto iš bulių širdies. Didelė išrūgų išeiga pagal siūlomą metodą vyksta ir gamybos sąlygomis. Taigi, pavyzdžiui, į 30 buteliukų buvo paimta 150 litrų kraujo, o po sedimentacijos išsiurbta 63 litrai serumo arba 42% kraujo tūrio.

3 pavyzdys. Jaučių ir karvių kraujo serumo kokybiniai rodikliai.

Buvo atliktas bulių ir karvių kraujo serumo tyrimas pagal šiuos kokybinius rodiklius: optinis tankis, bendro baltymo ir likutinio hemoglobino kiekis, augimą skatinantis aktyvumas persodintose ląstelių kultūrose. Buliams, sveriantiems 300-400 kg ir karvėms, sveriančioms 400-450 kg, kraujas iš širdies buvo paimtas į 10 litrų talpos butelius, kuriuose buvo 100 ml 5% NaCl tirpalo, iki 5 litrų žymos, serumas ginamas už 72 valandų šaldytuve +1-+2°C temperatūroje, po to buvo paimti serumo mėginiai, kurie buvo užšaldyti, atšildyti ir sterilizuoti per membraninius filtrus.

Atskirų gyvūnų kraujo serumo skaidrumas (optinis tankis), bendras baltymas ir liekamasis hemoglobinas buvo nustatyti iš karto po serumo mėginių paėmimo, taip pat 10 minučių centrifugavus 1500 aps./min. Bendras baltymas buvo nustatytas biureto reakcija, o liekamasis hemoglobinas – hemiglobino cianido metodu po serumo centrifugavimo. Kraujo serumo augimą stimuliuojantis aktyvumas buvo įvertintas SPEV ir MDBK ląstelių kultūrose pagal proliferacijos indeksą po 72 valandų augimo, kai sėklų tankis yra 40 000 ląstelių/cm 2, ir pagal ląstelių populiacijos padidėjimo dažnumą po 5 dienų augimo sėjimo tankis 20 000 ląstelių/cm 2 . Ląstelės buvo kultivuojamos Carrel kolbose su 8 cm2 inokuliu Eagle's MEM terpėje su glutaminu, kanamicinu ir 10% serumu.

Kraujas paimtas iš 40 bulių ir 40 karvių. Šių eksperimentų rezultatai pateikti 3 lentelėje. Po 72 valandų dumblo karvių kraujo serumo optinis tankis viršijo bulių kraujo serumo tankį daugiau nei 2 kartus. Beveik toks pat santykis buvo ir šio rodiklio kintamumui. Po centrifugavimo sumažėjo karvių kraujo serumo optinis tankis, nors išliko kiek didesnis nei bulių. Karvių kraujo serume buvo užfiksuotos didesnės bendrojo baltymo ir likutinio hemoglobino koncentracijos, palyginti su šiais rodikliais bulių kraujo serume. Likučio hemoglobino variacijos koeficientas karvių kraujo serume viršijo 54 proc. Didelis optinis tankis ir likutinio hemoglobino koncentracija karvių kraujo serume, matyt, yra susiję su mažesniu atsparumu jų eritrocitų sunaikinimui. Karvių kraujo serumo augimą skatinantis aktyvumas (pagal proliferacijos indeksą ir ląstelių populiacijos padidėjimo daugumą) SPEV ir MDBK ląstelių kultūrose yra prastesnis už biologinį aktyvumą, gautą iš bulių kraujo.

4 pavyzdys. Kraujo paėmimo iš bulių širdies pranašumas, norint gauti serumą, skirtą ląstelių kultūrai.

Tyrimo tikslas – nustatyti serumų, gautų iš kraujo, paimto iš bulių jungo venos, miego arterijos ir širdies, biocheminės sudėties ypatumus bei įvertinti jų augimo savybes persodintose ląstelių kultūrose. Norint gauti serumą iš 18 veršelių, sveriančių 300–400 kg, 300 ml kraujo iš jungo venos, miego arterijos ir širdies buvo aseptiškai paimta į 500 ml buteliukus su 5 ml 5% NaCl tirpalo (2 buteliukai vienam gyvūnui). ir padėkite juos 35 ° kampu į šaldytuvą +2 ° C temperatūroje 48 valandoms. Nusistovėjęs serumas iš kiekvienos buteliukų poros buvo surenkamas atskirai, centrifuguojamas ir užšaldomas -15 °C temperatūroje, paėmus mėginius fizikiniams ir biocheminiams tyrimams. Prieš sterilizuojant filtravimą per membraninius filtrus, kraujo serumai, gauti iš širdies, miego arterijos ir jungo venos, buvo sumaišyti atskirai 200 ml.

PH ir optinio tankio nustatymas, sterilumo kontrolė, taip pat kraujo serumo augimą skatinančių savybių vertinimas atliktas įprastiniais metodais. Bendras baltymas nustatytas biureto reakcija, liekamasis hemoglobinas - hemiglobino cianido metodu, cholesterolis - su "Konelab" (Suomija) reagentais, be to, mažos molekulinės masės azotinėmis medžiagomis (kreatininu, karbamidu ir šlapimo rūgštimi), pigmentais (tiesioginiu ir bendru). bilirubinas), fermentai (LDH, CPK, glutamino transferazė, amilazė, AST, šarminė fosfatazė, AlAT), neorganinės medžiagos (kalcis, geležis, fosforas), gliukozė naudojant Rendox reagentus Daytona Rendox prietaise (Didžioji Britanija) ir išrūgų baltymų elektroforezė. buvo atliktas celiuliozės acetato filtrais Vladisart tipo - FMAC-0,45-(80 100) -11106, kurių porų dydis 0,45 μm. Skaitmeninei medžiagai buvo atliktas kompiuterinis statinis apdorojimas, apskaičiuojant rezultatų aritmetinį vidurkį (M), aritmetinę vidurkio paklaidą (m), standartinį nuokrypį (σ), variacijos koeficientą (CV) ir rezultatų skirtumų reikšmę (P). Microsoft Excel. Išvardintų bulių kraujo serumų tyrimų rezultatai pateikti 4 lentelėje.

Norint įvertinti galvijų kraujo serumų augimą skatinančias savybes, kaip ląstelių modeliai buvo panaudotos transplantuojamos inkstų linijos SPEV (kiaulės embrionas) ir MDBK (karvės embrionas). Į Eagle's MEM terpę su glutaminu ir kanamicinu buvo pridėta 10 % koncentracijos sterilaus kraujo serumo iš jungo venos, miego arterijos ir bulių širdies. Norint apskaičiuoti proliferacijos indeksą (PI), ląstelių suspensija buvo pasėta į 2 ml su 3 cm 2 inokuliacijos plotu, kai sėjimo tankis buvo 42 000 ląstelių/cm 2 . Po 72 augimo valandų buvo suskaičiuotas ląstelių skaičius gautame viename sluoksnyje. Su kiekviena kultūra buvo atlikti 8 eksperimentai, eksperimentuose ląstelių skaičius Gorjajevo kameroje buvo skaičiuojamas 4 kartus. SPEV ir MDBK ląstelių proliferacinio aktyvumo terpėse su skirtingų kraujotakos sistemos dalių bulių kraujo serumais rezultatai pateikti 5 lentelėje.

Ląstelių kultūrų, auginamų terpėje su serumu, gautu iš kraujo, paimto iš miego arterijos ir jungo venos, proliferacija buvo mažesnė nei ląstelių, išaugintų terpėje su kraujo serumu iš širdies, o tai neabejotinai lemia skirtinga jų biocheminė sudėtis.

5 pavyzdys. Ląstelių augimą stabdančių medžiagų pašalinimas iš vietinio bulių kraujo serumo užšaldymo – atšildymo būdu. Atskiri serumo mėginiai turi skirtingą biocheminę sudėtį, priklausomai nuo daugelio veiksnių: gyvūnų šėrimo ir laikymo, sezono, veislės, lyties ir kt. Užšaldymas ir atšildymas leidžia gauti nuspėjamos biocheminės sudėties kraujo serumą ląstelių kultūroms.

Iš visų išrūgų gavimo užšaldymo - atšildymo būdu pasirinkome variantą, įskaitant: vieną bulių vietinio kraujo serumo užšaldymą - (15–20) °C temperatūroje mažiausiai 7 dienas, po to atšildymą + 20- + 40 ° C, lengvų serumo sluoksnių surinkimas, pradedant nuo viršaus, iki sąsajos su hemoliziniais sluoksniais, preliminarus, o paskui sterilizuojantis filtravimas ir gautų preparatų kokybės kontrolė.

Pagrindiniai fiziniai ir cheminiai galvijų kraujo serumo parametrai, lyginant su natūraliu serumu, yra mažesni, būtent: baltymų koncentracija - 1,19-1,94; laisvas hemoglobinas - po 1,32-2,94; bendrojo lipidų - 1,56-2,64 karto, įskaitant bendrą cholesterolį - 1,37-2,53 karto.

Remiantis serumo baltymų elektroforezės poliakrilamido gelyje rezultatais, kraujo serumuose, gautuose šaldant-atšildant, palyginti su natūraliais kraujo serumais, santykinė albuminų koncentracija didėja ir γ-globulinų koncentracija mažėja, o α koncentracija. - ir β-globulinai išlieka praktiškai nepakitę.

Galvijų kraujo serumo, gauto šaldant – atšildant, sudėties rodikliai pateikti 6 lentelėje.