1

Enfeksiyöz viral kaynaklı fibroz ve siroz gelişiminin dinamiklerinde karaciğer yıldız hücre popülasyonunun ultrastrüktürel, immünohistokimyasal ve morfometrik analizi yapıldı. Lipid damlacıklarının azalması ve fibroblast benzeri özelliklerin senkronize ekspresyonu ile karakterize edilen karaciğer yıldız hücrelerinin fibrojenik aktivasyonu ortaya çıktı - düz kas a-aktinine karşı pozitif bir immünohistokimyasal reaksiyon, granüler sitoplazmik retikulumun hiperplazisi ve çok sayıda hücre içi oluşumu. kollajen fibrilleri. Fibrozis gelişimi sırasında lipid içeren stellat hücrelerin sayı yoğunluğundaki ilerleyici azalmaya rağmen, retinoidlerin birikme işlevini sürdürme ihtiyacının devam ettiği gösterilmiştir - karaciğer sirozunda, lipid içeren stellat hücreler bulundu. lifli septa ve lobüllerin içinde. Karaciğer yıldız hücrelerinin polimorfik heterojen bir popülasyon olduğu sonucuna varıldı. geniş bir yelpazede fonksiyonel aktivite.

fibrogenez

karaciğerin yıldız hücreleri

üst yapı

immünohistokimya

1. Balabaud C., Bioulac-Sage P., Desmouliere A. Hepatik yıldız hücrelerinin karaciğer rejenerasyonundaki rolü // J. Hepatol. - 2004. - Cilt. 40. – S. 1023–1026.

2. Brandao D.F., Ramalho L.N.Z., Ramalho F.S. Karaciğer sirozu ve hepatik stellat hücreler // Acta Cirúrgica Brasileira. - 2006. - Cilt. 21. – S. 54–57.

3. Desmet V.J., Gerber M., Hoofnagle J.H. Kronik hepatitin sınıflandırılması: Tanı, derecelendirme ve evreleme // Hepatoloji. - 1994. - Cilt. 19. - S. 1523-1520.

4. Gabele E., Brenner D.A., Rippe R.A. Karaciğer fibrozu: Fibrojenik hepatik stellat hücrenin amplifikasyonuna yol açan sinyaller // Ön. Biosc. - 2003. - Cilt. 8. – S. 69–77.

5. Geerts A. Yıldız hücrelerinin kökeni hakkında: mezodermal, endodermal veya nöro-ektodermal? // J. Hepatol. - 2004. - Cilt. 40. – S. 331–334.

6. Gutierrez-Ruiz M.C., Gomez-Quiroz L.E. Karaciğer fibrozu: hücre modeli cevaplarının aranması // Liver Intern. - 2007. - Cilt. 10. – S. 434–439.

7. Kisseleva T., Brenner D.A. Hepatik yıldız hücrelerinin fibrogenezdeki rolü ve fibrozisin tersine çevrilmesi // J. Gastroenterol. hepatol. - 2007. - Cilt. 22.–S.S73–S78.

8. Ryder S.D. Hepatit C'li hastalarda hepatik fibrozun ilerlemesi: ileriye dönük bir tekrar karaciğer biyopsisi çalışması // Gut. - 2004. - Cilt. 53. – S. 451–455.

9. Schuppan D., Afdhal N.H. Karaciğer sirozu // Lancet. - 2008. - Cilt. 371. - S. 838-851.

10. Senoo H. Hepatik yıldız hücrelerinin yapısı ve işlevi // Med. elektron. mikrosc. - 2004. - Cilt. 37. – S. 3–15.

Karaciğer stellat hücreleri (lipositler, İto hücreleri, yağ biriktiren karaciğer hücreleri) hepatositler ve sinüzoidlerin endotel astarı arasındaki Disse boşluklarında lokalizedir ve retinoid homeostazının düzenlenmesinde lider bir rol oynar ve A vitamininin %80'e kadarını biriktirir. . Disse alanı, transsinüzoidal değişim sağlayan en büyük işlevsel sorumluluk alanıdır. Deneysel modeller ve hücre kültürü kullanılarak, hepatik yıldız hücrelerinin A vitamini içeren büyük sitoplazmik lipid damlacıklarına farklılaştığı gösterilmiştir; bu fenotip "dinlenme" olarak yorumlanır.

Karaciğerde fibrozis ve siroz gelişiminde yıldız hücrelerinin rolüne artan bir önem verilmektedir. Fibrojenik uyaranları aldıktan sonra, "dinlenme" yıldız hücreleri "transdiferansiye olur", bir miyofibroblast benzeri fenotip kazanır ve kollajen, proteoglikanlar ve hücre dışı matrisin diğer bileşenlerini üretmeye başlar. Santral damarlar, sinüzoidler veya portal damarlar seviyesindeki fibrozis, karaciğerin normal hemodinamiğini sınırlar, bu da gelecekte metabolik olarak verimli parankimde bir azalmaya yol açar - portal hipertansiyon ve portosistemik şant. Disse boşluklarında bağ dokusunun birikmesi, dolaşımdaki makromoleküllerin temizlenmesine müdahale ederek, hücreler arası etkileşimleri değiştirerek ve karaciğer hücresi işlev bozukluğuna yol açarak kan ve hepatositler arasındaki normal metabolik trafiği bozar.

Aktive edilmiş yıldız hücrelerinin dinlenme fenotipine geri dönüp dönemeyeceği konusunda çelişkili görüşler vardır. Karaciğer fibrojenik stellat hücrelerinin, örneğin retinoidlere maruz kaldıklarında veya tip I fibriller kollajen veya bazal membran bileşenleri dahil hücre dışı matris bileşenleri ile etkileşime girdiğinde, aktivasyon sürecini kısmen düzleştirebildiğine dair kanıtlar elde edilmiştir. Bu sorunun çözümü, fibrozisin tersine çevrilebilirliği sorununun ve karaciğer sirozunun tedavisine yönelik terapötik yaklaşımların geliştirilmesi sorununun altında yatmaktadır.

Bu çalışmanın amacı- bir kronik HCV enfeksiyonu modelinde fibrotik değişikliklerin dinamiklerinde karaciğer yıldız hücrelerinin yapısal ve fonksiyonel özellikleri hakkında kapsamlı bir çalışma yürütmek.

Malzeme ve araştırma yöntemleri

Fibrotik değişikliklerin çeşitli aşamalarında kronik HCV enfeksiyonunda karaciğer biyopsi örneklerinin kapsamlı bir ışık-optik, elektron-mikroskobik ve morfometrik çalışması yapıldı (fibrozis şiddetine göre 4 eşit gruba bölünmüş 100 örnek). Lipid içeren yıldız hücrelerin en iyi yarı ince kesitlerde, fibrojenik yıldız hücrelerde - yalnızca ultra ince kesitlerde veya immünohistokimyasal görüntüleme kullanılarak görüntülenebildiğine dikkat etmek önemlidir.

Karaciğer numuneleri, Millonig'in fosfat tamponunda (pH 7.2-7.4) hazırlanan, 4°C'ye soğutulmuş %4'lük bir paraformaldehit çözeltisi içinde sabitlendi; parafin kesitler, van Gieson'a göre Perls reaksiyonu ile kombinasyon halinde hematoksilen ve eozin ile boyandı ve elastik liflerin Weigert's resorsinol fuksin ile ek olarak boyanması ve bir PAS reaksiyonu gerçekleştirildi. Yarı ince kesitler Schiff reaktifi ve azure II ile boyandı. Çalışma bir Leica DM 4000B evrensel mikroskobunda (Almanya) gerçekleştirilmiştir. Mikrograflar bir Leica DFC 320 dijital kamera ve Leica QWin yazılımı kullanılarak alındı. Uranil asetat ve kurşun sitrat ile kontrast oluşturan ultra ince kesitler, bir JEM 1010 elektron mikroskobunda 80 kW hızlanma voltajında ​​incelenmiştir.

Karaciğer fibrozunun evresi, portal fibrozdan (evre I) porto-central vaskülarize septa oluşumu ve parankimin nodüler transformasyonu ile siroz arasında değişen 4 puanlık bir ölçekte belirlendi. Karaciğer yıldız hücreleri ve diğer matris üreten hücresel elementler, düz kas a-aktin ekspresyonu ile fibrozisin dinamiklerinde tespit edildi.

Matris üreten karaciğer hücrelerinde düz kas a-aktin ekspresyonu, reaksiyon ürünleri için negatif kontrol streptavidin-biyotin görüntüleme sistemi ile iki aşamalı dolaylı immünoperoksidaz yöntemi kullanılarak test edildi. Kullanılan birincil antikorlar, 1:25 oranında seyreltilmiş düz kas a-aktinine (NovoCastra Lab. Ltd, UK) yönelik fare monoklonal antikorları; ikincil antikorlar olarak - evrensel biyotinlenmiş antikorlar. İmmünohistokimyasal reaksiyonun ürünleri diaminobenzidin kullanılarak görselleştirildi, ardından kesitler Mayer hematoksilen ile zıt boyandı. Lipid içeren yıldız hücrelerin sayı yoğunluğu, 38.000 um2'lik bir görsel alan biriminde yarı ince kesitlerde değerlendirildi. İstatistiksel veri işleme için Student's t-testi kullanıldı; Hata olasılığı P 0.05'ten küçükse, karşılaştırılan parametrelerdeki farklılıklar anlamlı kabul edildi.

Araştırma sonuçları ve tartışma

Hastaların karaciğerinde minimal fibrotik değişiklikler ile kronik hepatit C, bir kural olarak, sadece yarı-ince ve ultra-ince bölümlerde açıkça görülebilen ve sitoplazmada büyük lipid damlalarının mevcudiyeti ile Disse boşluklarında farklılaşan oldukça fazla sayıda yıldız hücresi bulunur. Yıldız hücrelerinin retinoid içeren "dinlenme" durumundan fibrojenik hücrelere dönüşümüne, lipid damlacıklarının sayısında kademeli bir azalma eşlik eder. Bu bağlamda, gerçek yıldız hücre sayısı, kapsamlı bir elektron mikroskobik ve immünohistokimyasal çalışma kullanılarak belirlenebilir.

Üzerinde Ilk aşamalar fibrozis (0, I) yarı-ince kesitlerin çalışmasında, karaciğer yıldız hücrelerinin popülasyonu, belirgin polimorfizm ile ayırt edildi - boyut, şekil, lipid damlalarının sayısı ve bunların renklendirici özellikleri keskin bir şekilde değişti: lipid içeren materyalin farklı hücrelerdeki ozmiofilikliği dikkat çekmiştir. Müstahzarlarda sitoplazmik lipid damlacıklarının mevcudiyeti ile görüntülenen karaciğer yıldız hücrelerinin sayı yoğunluğu, görsel alanın birimi başına 5.01 ± 0.18 idi.

Yıldız hücrelerinin ultrastrüktürünün özellikleri, lipid damlacıklarının elektron yoğunluğunun heterojenliği ile sadece aynı hücre içinde değil, aynı zamanda farklı lipositler arasında da ilişkilidir: elektron geçirgen bir lipid substratının arka planına karşı daha ozmiofilik bir marjinal kenar göze çarpıyordu; ek olarak, çekirdekler keskin bir şekilde polimorfiktir ve sitoplazmik süreçlerin uzunluğu değişkendir. Lipid içeren stellat hücrelerin ultrastrüktürel özellikleri arasında, lipid damlacıklarının varlığı ile birlikte, mitokondri de dahil olmak üzere zar organellerinde zayıf olan çok az miktarda sitoplazmik matris not edilebilir ve bu nedenle, görünüşe göre, bu liposit fenotipi " dinlenme" veya "pasif" .

Fibrozis II ve III aşamalarında, çoğu stellat hücrenin üst yapısı, hem lipid içeren hem de fibroblast benzeri hücrelerin morfolojik özelliklerinin eşzamanlı varlığı olan karışık veya geçiş fenotipini elde etti. Bu tür lipositlerde çekirdekler, nükleolemmanın derin invaginasyonlarına, daha büyük bir nükleolusa ve lipid damlacıklarını tutan artan sitoplazma hacmine sahipti. Aynı zamanda, granüler sitoplazmik retikulumun mitokondri, serbest ribozomları, polisomları ve tübüllerinin sayısı keskin bir şekilde arttı. Kural olarak, lipid damlacıklarının ve mitokondrinin bir zar teması vardı, bu da lipidlerin "kullanımını" gösteriyordu. Birçok hücrede, lipit damlacıklarının bozunması, daha sonra ekzositoz ile elimine edilen otofagozomların oluşumu ile gerçekleştirildi. Bazı durumlarda, karışık bir fenotipin yıldız hücrelerinin çoğalması kaydedildi.

Karaciğer sirozu aşamasında en çok sayıda olan matris üreten stellat hücreler, lipid granüllerinin tamamen yokluğu, fibroblast benzeri bir form, gelişmiş bir protein sentezleme bölmesi ve sitoplazmada kontraktil fibril yapılarının oluşumu ile karakterize edildi; Periselüler olarak Disse boşluklarında, belirli bir enine çizgili çok sayıda kollajen fibril demeti lokalize edildi.

Genel olarak, intralobüler perisinüzoidal fibrogenezin eşlik ettiği kronik hepatit C'nin ilerlemesi ile birlikte, morfolojik özellikler karaciğer yıldız hücrelerinin aktivasyonu, A vitamini biriktiren "pasif" olarak adlandırılanlardan fibrojenik ve çoğalan hücrelere dönüşümleri.

Karaciğer sirozuna dönüşüm aşamasında, lipid içeren yıldız hücrelerinin sayısal yoğunluğunda, fibrojenik dönüşümlerini gösteren önemli bir azalma oldu. Bununla birlikte, karaciğerde oluşan siroz durumunda, izole vakalarda, perisinüzoidal lipid içeren stellat hücrelere sahip karaciğer parankim alanları vardı. Ek olarak, bir örnekte, periportal fibröz dokuda çok sayıda liposit bulundu, bu muhtemelen stellat hücrelerin vücuttaki retinoidlerin metabolizmasındaki önemli rolünü, hatta organ sirozu aşamasında bile gösterir. Ek olarak, yıldız hücrelerin bir dizi başka işlevi var gibi görünmektedir, ayrıca pankreas, akciğerler, böbrekler ve bağırsaklar gibi ekstrahepatik organlarda da bulunurlar ve hepatik ve ekstrahepatik yıldız hücrelerinin, yaygın bir yıldız hücre sistemi oluşturduğuna dair bir görüş vardır. APUD sistemine benzer vücut. Örneğin, fibrojenik stellat hücrelerin karaciğer sirozu ile ilişkisine rağmen, bunların aktivasyonu akut yaralanma vakalarında faydalı bir rol oynayabilir, çünkü sonuç parankimal hücrelerin rejenerasyonu için uygun bir stromal devredir.

Morfometrik analize göre, kronik HCV enfeksiyonunda perihepatoselüler fibrozun şiddeti, lipid içeren yıldız hücrelerin sayısal yoğunluğu ile önemli bir ters korelasyona sahipti - fibroz III aşamasında ve organ sirozu ile, görsel alan başına 0.20 ± 0.03 idi. önemli olan daha az olan birim (r< 0,05), чем на стадиях фиброза 0 - I (5,01 ± 0,18) и II (2,02 ± 0,04).

Matris üreten karaciğer hücrelerinin fibrojenik aktivitesi, bizim tarafımızdan düz kas alfa-aktin ekspresyonu üzerinde bir immünohistokimyasal çalışma kullanılarak test edildi. Hepatik lobüller içinde lokalize olan aktive stellat hücrelerin sitoplazmasında değişen yoğunlukta immünohistokimyasal reaksiyonların ürünleri bulundu. Portal bölgelerin fibroblast ve miyofibroblastlarının sitoplazmasında, damarların düz kas hücrelerinde ve merkezi damarlar etrafındaki miyofibroblastlarda özellikle düz kas a-aktininin anlamlı ekspresyonu kaydedildi.

Fibrogenezin hücresel mekanizmalarına ilişkin verilerin çoğu, hepatik stellat hücreler üzerinde yapılan çalışmalardan gelmektedir, ancak çeşitli matris üreten hücrelerin (her biri belirli bir lokalizasyona, immünohistokimyasal ve ultrastrüktürel fenotipe sahiptir) hepatik fibroz gelişimine katkıda bulunduğu açıktır. Bunlar, kronik karaciğer hasarı koşullarında aktive olan portal yolların fibroblastlarını ve miyofibroblastlarını, vasküler düz kas hücrelerini ve merkezi damar çevresindeki miyofibroblastları içerir.

Çözüm

Karaciğer stellat hücrelerinin kronik hepatit C'de organ fibrozunun gelişimindeki rolü gösterilmiştir. Fibrozisin ilerlemesiyle, lipid içeren yıldız hücrelerinin sayısal yoğunluğu önemli ölçüde azalırken, popülasyonun bir kısmı sözde "dinlenme"yi korur. " metabolik fonksiyon için fenotip. Fibrojenik aktivasyon durumundaki "miyofibroblast benzeri" karaciğer stellat hücreleri, aşağıdaki yapısal ve işlevsel özelliklerle karakterize edilir: lipid damlacıklarının sayısında bir azalma ve ardından kaybolması, granüler sitoplazmik retikulum ve mitokondri hiperplazisi, fokal proliferasyon, immünohistokimyasal ekspresyon düz kas α-aktin dahil olmak üzere fibroblast benzeri özellikler ve Disse boşluklarında periselüler kollajen fibrillerinin oluşumu.

Bu nedenle, karaciğer yıldız hücreleri statik değil, intralobüler perihepatoselüler matrisin yeniden şekillenmesinde doğrudan yer alan dinamik bir popülasyondur.

İnceleyenler:

Vavilin V.A., Tıp Bilimleri Doktoru, Profesör, Başkan. İlaç Metabolizması Laboratuvarı, Moleküler Biyoloji ve Biyofizik Araştırma Enstitüsü, Rusya Tıp Bilimleri Akademisi Sibirya Şubesi, Novosibirsk;

Kliver E.E., Tıp Bilimleri Doktoru, Lider Araştırmacı, Patomorfoloji ve Elektron Mikroskobu Laboratuvarı, Novosibirsk Dolaşım Patolojisi Araştırma Enstitüsü, akademisyen E.N. Rusya Federasyonu Sağlık ve Sosyal Kalkınma Bakanlığı Novosibirsk'ten Meshalkin.

Çalışma, editörler tarafından 15 Ağustos 2011'de alındı.

bibliyografik bağlantı

Postnikova O.A., Nepomnyashchikh D.L., Aidagulova S.V., Vinogradova E.V., Kapustina V.I., Nokhrina Zh.V. FİBROZİS DİNAMİĞİNDE CİĞER YILDIZ HÜCRELERİNİN YAPISAL VE FONKSİYONEL ÖZELLİKLERİ // Basit Araştırma. - 2011. - Hayır. 10-2. – S. 359-362;
URL: http://fundamental-research.ru/ru/article/view?id=28817 (erişim tarihi: 30.01.2020). "Doğa Tarihi Akademisi" yayınevi tarafından yayınlanan dergileri dikkatinize sunuyoruz.

Vücuttaki ana endotoksin kaynağıGram negatif bir bağırsak florasıdır. Şu anda, karaciğerin ana organ olduğuna şüphe yok. endotoksin temizleme. Trdotoksin önce hücre tarafından alınır Kami Kupffer (KK), membran reseptörü ile etkileşime girer CD 14. Reseptöre kendisi olarak bağlanabilir lipopolisakkarit(LPS), ve lipid A bağlayıcı protein ile kompleksi plazma yumru. LPS'nin karaciğer makrofajları ile etkileşimi, üretim ve salıverilmesine dayanan bir dizi reaksiyonu tetikler. sitokinlerin iyonu ve diğer biyolojik olarak aktif arabulucular.

Makronun rolü hakkında birçok yayın var.Karaciğerin (LK) bakteriyel LPS'nin alımı ve temizlenmesinde, bununla birlikte, endotelin diğerleriyle etkileşimi mezenkimal hücreler, özellikle perisinüzoidal Ito hücreleri tarafından pratik olarak incelenmemiştir.

ARAŞTIRMA YÖNTEMİ

200 g ağırlığındaki beyaz erkek sıçanlara 1 ml steril salin içinde intraperitoneal olarak enjekte edildi. son derece saflaştırılmış liyofilize LPS E. koli 0,5'lik dozlarda 0111 suşu,2.5, 10, 25 ve 50 mg/kg. 0,5, 1, 3, 6, 12, 24, 72 saat ve 1 haftalık periyotlarda iç organlar anestezi altında çıkarıldı ve tamponlu %10 formalin içine yerleştirildi. Materyal parafin bloklara gömüldü. 5 µm kalınlığındaki kesitler boyandı immünohistokimyasalstreptavidin-biotin desmine karşı antikor yöntemiyle, α - düz- kas aktin (A-GMA) ve nükleer antijen iyi çoğalan hücreler ( PCNA, " Dako"). İşaretleyici olarak Desmin kullanıldı perisinüzoidalIto hücreleri, A-GMA - olarak işaretleyici ve miyofibroblastlar, PCNA - çoğalan hücreler. Karaciğer hücrelerinde endotoksin tespit etmek için saflaştırılmış anti-Re-glikolipidantikorlar (Genel ve Klinik Patoloji Enstitüsü KDO, Moskova).

ÇALIŞMA SONUÇLARI

25 mg/kg ve üzeri dozlarda, LPS uygulamasından 6 saat sonra şok gözlenmiştir. ölümcül. Karaciğer dokusunda LPS'ye akut maruz kalma, sayılarında bir artış ile kendini gösteren Ito hücrelerinin aktivasyonuna neden oldu. Sayı deminpozitif LPS enjeksiyonundan 6 saat sonra hücreler arttı ve maksimuma ulaştı ma ila 48-72 saat (Şek. 1, a, b).

Pirinç. 1. Sıçan karaciğer bölümleri sy, işlenmiş LSAB -ben- Chennymides'e karşı antikorlar benim(bir grup α - düz servikal aktin (c), x400 (a, b) x200 (c).

a - endotoksin uygulanmadan önceaçık, tek deminpozitifPeriportal bölgedeki Ito hücreleri; b- 72 saatendotoksin verildikten sonra üzerinde: sayısız deminpozitifİto hücreleri; içinde- tr'nin tanıtılmasından 120 saat sonra dotoksin: α - düz kas ny aktin sadece mevcutdüz kas hücrelerinde co kah gemiler.

1'de hafta numarası deminpozitif hücreler azaldı amakriterlerinden daha yüksekti. saat Bu durumda, görünümünü gözlemlemedik. A-GMA-pozitif sinüsteki hücreler dah karaciğer. dahili pozitif A-GMA'ya karşı antikorlarla boyandığında kontrol düz kas hücrelerini tanımlamak için görev yaptıA-GMA içeren portal yolların venöz damarları (Şekil 1, içinde). Bu nedenle, Ito hücrelerinin sayısındaki artışa rağmen, bir kez LPS'nin etkisi dönüşüme yol açmaz ( farklılaşma) onları miyofibroblastlara dönüştürür.

Pirinç. 2. Karaciğer bölümlerisıçanlar, tedavi edildi LSAB - etiketli antikorlar PCNA. a - tr'nin tanıtılmasından önce dotoksin: tekçoğalan genler patositler, x200; b - endotoksinin uygulanmasından 72 saat sonra: çok sayıda çoğalan hepatosit, x400.

Artan miktar deminpozitif portal bölgesi içinde başlayan hücreler. LPS uygulamasından sonra 6 saatten 24 saate kadar perisinüzoidal hücreler sadece portal yolların çevresinde bulundu, yani. 1. aci bölgesinde noosa. 48-72 saat arasında haşhaş görüldüğündemaksimum miktar deminpozitif zamk mevcut, acinusun diğer bölgelerinde de ortaya çıktılar; yine de, Ito hücrelerinin çoğu hala periportal yerleşimliydi.

Belki de bunun nedeni, periportal olarakbulunan CC'ler ilk yakalayanlardır bağırsaktan portal damar yoluyla veya sistemik dolaşımdan gelen endotoksin. Ak tivated QC geniş bir ürün yelpazesi üretir Ito hücrelerinin aktivasyonunu tetiklediği düşünülen sitokinler ve farklılaşma onları miyofibroblastlara dönüştürürler. Açıkça, bu nedenle, aktive edilmiş karaciğer makrofajlarının yakınında (asinüsün 1. bölgesinde) bulunan Ito hücreleri, sitokinlerin salınımına ilk tepki verenlerdir. Ancak çalışmamızda bunları gözlemlemedik. farklılaşma içinde miyofibroblastlar CK ve hepatositler tarafından salgılanan sitokinlerin, halihazırda başlamış olan süreci destekleyen bir faktör olarak hizmet edebileceğini düşündürmektedir. farklılaşma, ancak muhtemelen karaciğerin tek bir LPS maruziyeti ile tetikleyemezler.

Hücrelerin proliferatif aktivitesinde bir artış da esas olarak asinusun 1. bölgesinde gözlendi. Bu muhtemelen tüm (veya hemen hemen tüm) süreçlerin dışarı çıkmayı amaçladığı anlamına gelir. hakkında- ve hücreler arası etkileşimlerin parakrin regülasyonu, periportal bölgelerde ilerler. LPS uygulamasından 24 saat sonra çoğalan hücrelerin sayısında bir artış gözlemlendi; pozitif hücre sayısı 72 saate kadar arttı (maksimum proliferatif aktivite, Şekil 2, a, b). Hem hepatositler hem de sinüzoid hücreler çoğaldı. Ancak renklendirme PCNA Vermez proliferi türünü belirleme yeteneği sinüzoidal hücreleri sürmek. Literatüre göre, endotoksinin etkisi bir artışa yol açar. QC sayısı. hakkında olduğunu düşünüyorlar hem karaciğer makrofajlarının proliferasyonu nedeniyle hem de monositlerin diğer organlardan göç etmesi nedeniyle ilerler. CK tarafından salınan sitokinler, Ito hücrelerinin proliferatif kapasitesini artırabilir. Bu nedenle, çoğalan hücrelerin şu şekilde temsil edildiğini varsaymak mantıklıdır. perisinüzoidal Ito hücreleri. Bizim tarafımızdan kaydedilen sayılarındaki artış, büyüme faktörlerinin sentezini arttırmak ve hücre dışı matrisi hasar koşulları altında restore etmek için görünüşte gereklidir. Bu, karaciğerin telafi edici-rejeneratif reaksiyonlarındaki bağlantılardan biri olabilir, çünkü Ito hücreleri, onarım ve farklılaşmada yer alan hücre dışı matris, kök hücre faktörü ve hepatosit büyüme faktörü bileşenlerinin ana kaynağıdır. karaciğerin rovka epitel hücreleri. Mevcut olmayan Ito hücrelerinin aynı dönüşümü miyofibroblastlar endotoksin saldırganlığının bir bölümünün karaciğer fibrozu gelişimi için yeterli olmadığını gösterir.

Böylece endotok'a akut maruziyet sina sayısında artışa neden olur deminpozitif Karaciğer hasarının dolaylı bir işareti olan Ito hücreleri. Miktar perisinüzoidal Görünüşe göre çoğalmalarının bir sonucu olarak hücreler artar. Tek bir endotoksin saldırganlığı bölümü tersine dönmeye neden olur aktivasyonum perisinüzoidal Ito hücreleri ve yol açmaz farklılaşma miyofibroblastlara dönüşür. Bu bağlamda, aktivasyon mekanizmalarında ve farklılaşmaİto hücrelerinde sadece endotoksin ve sitokinler değil, aynı zamanda hücreler arası etkileşimin diğer bazı faktörleri de rol oynar.

EDEBİYAT

1. Mayalar G.N., Wisse E., Decker K. // Yeni ufuklar hepatoloji. Novosibirsk, 1992.

2. Salakhov I.M., Ipatov A.I., Konev Yu.V., Yakovlev M.Yu. // Başarılar modern, biyo. 1998. Cilt 118, Sayı. 1. S. 33-49.

3. Yakovlev M.Yu. // Kazan . m birim dergi 1988. No. 5. S. 353-358.

4. Freudenberg N., Piotraschke J., Galanolar C. et herkes. // Virchow'lar Kemer [b]. 1992. cilt. 61.P. 343-349.

5. Gresner A. M. // hepatogastroneroloji. 1996 Cilt 43. S. 92-103.

6. Schmidt C, Bladt F., Goedecke S. ve ark. // Doğa. 1995 Cilt 373, No. 6516. S. 699-702.

7. bilge E., Braet F., Luo D. ve ark. // toksikol. Patol. 1996. Cilt 24, No. 1. S. 100-111.

anahtar kelimeler

KARACİĞER / İTO YILDIZ HÜCRELERİ/ MORFOLOJİ / KARAKTERİSTİK / A VİTAMİNİ / FİBROZİS

dipnot temel tıp üzerine bilimsel makale, bilimsel çalışmanın yazarı - Tsyrkunov V.M., Andreev V.P., Kravchuk R.I., Kondratovich I.A.

Giriiş. İto stellat hücrelerinin (ISC) rolü, karaciğerde fibrozis gelişiminde önde gelenlerden biri olarak tanımlanır, ancak İTO yapısının intravital görselleştirilmesi klinik uygulama minimal olarak kullanılır. Çalışmanın amacı: intravital karaciğer biyopsi örneklerinin sitolojik tanımlama sonuçlarına dayanarak HCI'nin yapısal ve fonksiyonel özelliklerini sunmaktır. Malzemeler ve yöntemler. Biyopsi örneklerinin klasik ışık ve elektron mikroskobu yöntemleri ve ultra ince kesitler, fiksasyon ve boyama kullanan orijinal teknikler kullanıldı. Sonuçlar. Kronik hepatit C'li hastalardan alınan karaciğer biyopsi örneklerinin ışık ve elektron mikroskopisi foto-illüstrasyonları, farklı aşamalarda (dinlenme, aktivasyon) ve miyofibroblastlara dönüşüm sürecinde HSC'lerin yapısal özelliklerini göstermektedir. Sonuçlar. Orijinal klinik morfolojik tanımlama yöntemlerinin kullanılması ve HCI'nin fonksiyonel durumunun değerlendirilmesi, karaciğer fibrozunun teşhis ve tahmin kalitesini artıracaktır.

İlgili konular temel tıp üzerine bilimsel çalışmalar, bilimsel çalışmanın yazarı - Tsyrkunov V.M., Andreev V.P., Kravchuk R.I., Kondratovich I.A.

• Klinik Karaciğer Sitolojisi: Kupffer hücreleri

  2017 / Tsyrkunov V.M., Andreev V.P., Kravchuk R.I., Prokopchik N.I.

• Viral sirozda karaciğere nakledilen otolog mezenkimal kök hücrelerin morfolojik etkilerinin izlenmesi (klinik gözlem)

  2018 / Aukashnk S.P., Alenikova O.V., Tsyrkunov V.M., Isaykina Ya.I., Kravchuk R.I.

• Karaciğerin klinik morfolojisi: nekroz

  2017 / Tsyrkunov V.M., Prokopchik N.I., Andreev V.P., Kravchuk R.I.

• Karaciğer yıldız hücrelerinin polimorfizmi ve fibrogenezdeki rolleri

  2008 / Aidagulova S.V., Kapustina V.I.

• HIV/hepatit C virüsü ile koenfeksiyonlu hastalarda sinüzoidal karaciğer hücrelerinin yapısı

  2013 / Matievskaya N.V., Tsyrkunov V.M., Kravchuk R.I., Andreev V.P.

• Karaciğer fibrozu/siroz tedavisinde umut verici bir yöntem olarak mezenkimal kök hücreler

  2013 / Lukashik S.P., Aleinikova O.V., Tsyrkunov V.M., Isaykina Ya.I., Romanova O.N., Shimansky A.T., Kravchuk R.I.

• Eksplantasyon yoluyla sıçan karaciğer miyofibroblastlarının izolasyonu ve ekimi

  2012 / Miyanovich O., Shafigullina A.K., Rizvanov A.A., Kiyasov A.P.

• HCV enfeksiyonu ve diğer karaciğer lezyonlarında karaciğer fibrozu oluşumunun patolojik yönleri: modern kavramlar

  2009 / Lukashik S.P., Tsyrkunov V.M.

• Eksplantasyon yoluyla karaciğerin portal yollarının yapılarından elde edilen sıçan miyofibroblastlarının analizi

  2013 / Miyanovich O., Katina M.N., Rizvanov A.A., Kiyasov A.P.

• Nakledilen karaciğer stellat hücreleri, karaciğer fibrozu gelişme riski olmadan kısmi hepatektomi sonrası organ rejenerasyonunda yer alır.

  2012 / Shafigullina A.K., Gumerova A.A., Trondin A.A., Titova M.A., Gazizov I.M., Burganova G.R., Kaligin M.S., Andreeva D.I., Rizvanov A.A., Mukhammedov A.R., Kiyasov A.P.

giriiş. Ito stellate hücrelerinin (Hepatik Stellat Cells, HSC) rolü, karaciğer fibrozunun gelişiminde önde gelenlerden biri olarak tanımlanmıştır, ancak klinik uygulamada HSC yapılarının intravital görselleştirilmesinin kullanımı minimaldir. Çalışmanın amacı, intravital karaciğer biyopsi örneklerinin sitolojik tanımlama bulgularına dayanarak HSC'nin yapısal ve fonksiyonel özelliklerini sunmaktır. Malzemeler ve yöntemler. Biyopsi örneklerinin klasik ışık ve elektron mikroskobu yöntemleri, orijinal teknik içinde ultra ince kesitler, fiksasyon ve boyama uygulandı. Sonuçlar. Kronik hepatit C'li hastalardan alınan karaciğer biyopsi örneklerinin HSC'sinin yapısal özellikleri, ışık ve elektron mikroskobunun fotoğraf çizimlerinde sunulmaktadır. HSC'ler farklı aşamalarda (dinlenme, aktivasyon) ve miyofibroblastlara dönüşüm süreci sırasında tasvir edilir. Sonuçlar. Orijinal klinik ve morfolojik tanımlama yöntemlerinin kullanılması ve HSC'nin fonksiyonel durumunun değerlendirilmesi, karaciğer fibrozisinin tanı ve prognozunun kalitesini iyileştirmeye izin verir.

Bilimsel çalışmanın metni "Klinik Karaciğer Sitolojisi: Ito stellate hücreleri" konusunda

UDC 616.36-076.5

KLİNİK KARACİĞER SİTOLOJİSİ: İTO Yıldız Hücreleri

Tsyrkunov V.M. ( [e-posta korumalı]), Andreev V.P. ( [e-posta korumalı]), Kravchuk R.I. ( [e-posta korumalı]), Kondratovich I.A. ( [e-posta korumalı]) EE "Grodno Devlet Tıp Üniversitesi", Grodno, Beyaz Rusya

Giriiş. İto yıldız hücrelerinin (ISC'ler) rolü, karaciğerde fibroz gelişiminde önde gelenlerden biri olarak tanımlanır, ancak klinik uygulamada İTO'ların yapısının intravital görselleştirilmesi minimal olarak kullanılır.

Çalışmanın amacı: İntravital karaciğer biyopsi örneklerinin sitolojik tanımlama sonuçlarına dayanarak HCI'nin yapısal ve fonksiyonel özelliklerini sunmak.

Malzemeler ve yöntemler. Biyopsi örneklerinin klasik ışık ve elektron mikroskobu yöntemleri ve ultra ince kesitler, fiksasyon ve boyama kullanan orijinal teknikler kullanıldı.

Sonuçlar. Kronik hepatit C'li hastalardan alınan karaciğer biyopsi örneklerinin ışık ve elektron mikroskopisi foto-illüstrasyonları, farklı aşamalarda (dinlenme, aktivasyon) ve miyofibroblastlara dönüşüm sürecinde HSC'lerin yapısal özelliklerini göstermektedir.

Sonuçlar. Klinik morfolojik tanımlama ve HCI'nin fonksiyonel durumunun değerlendirilmesi için orijinal yöntemlerin kullanılması, karaciğer fibrozisinin tanı ve tahmin kalitesini iyileştirecektir.

Anahtar kelimeler: karaciğer, Ito yıldız hücreleri, morfoloji, özellikler, A vitamini, fibrozis.

giriiş

Kronik hepatit C (CHC) dahil olmak üzere çeşitli etiyolojilerdeki kronik yaygın karaciğer lezyonlarının çoğunun olumsuz bir sonucu, ana katılımcıların aktifleştirilmiş fibroblastlar olduğu, ana kaynağı aktif Ito stellat hücreleri (SSC'ler) olan karaciğer fibrozisidir. .

HSC, eşanlamlı - karaciğer yıldız hücreleri, yağ depolayan hücreler, perisinüzoidal lipositler, yıldız hücreler (İngiliz Hepatik Yıldız Hücresi, HSC, İto Hücresi, İto hücresi). ZKI ilk olarak 1876'da K. Kupffer tarafından tanımlanmış ve onun tarafından yıldız hücreleri ("Stemzellen") olarak adlandırılmıştır. T. Ito, içlerinde yağ damlaları bulduktan sonra, onları önce yağ emici (“shibo-sesshusaibo”) olarak adlandırdı ve daha sonra, yağın hücrelerin kendileri tarafından glikojen, yağ depolayan hücrelerden (“shibo”) üretildiğini belirledi. -chozosaibo") . 1971'de K. Wake, Kupffer yıldız hücrelerinin ve yağ depolayan Ito hücrelerinin kimliğini ve bu hücrelerin A vitamini "depoladığını" kanıtladı.

Vücuttaki A vitamininin yaklaşık %80'i karaciğerde birikir ve tüm karaciğer retinoidlerinin %80'e kadarı HKI yağ damlalarında birikir. Şilomikronların bileşimindeki retinol esterler, hepatositlere girerler, burada retinole dönüştürülürler ve hücreler tarafından biriktiği perisinüzoidal boşluğa salgılanan retinol bağlayıcı protein (RBP) ile bir A vitamini kompleksi oluştururlar.

HCI'nin K. Popper tarafından kurulan karaciğer fibrozu ile yakın bağlantısı, statik fonksiyondan ziyade dinamik olduğunu gösterdi - intralobüler perihepatoselüler matrisin yeniden şekillenmesine doğrudan katılma yeteneği.

İntravital biyopsi örneklerindeki değişiklikleri değerlendirmek için gerçekleştirilen karaciğerin morfolojik incelemesinin ana yöntemi, klinik uygulamada üreme aktivitesinin kurulmasını mümkün kılan ışık mikroskobudur.

yanma ve kronikleşme aşaması. Yöntemin dezavantajı, hücrelerin yapısal özelliklerinin, hücre içi organellerin, inklüzyonların ve fonksiyonel özelliklerinin değerlendirilmesine izin vermeyen düşük çözünürlüktür. Karaciğerdeki ultrastrüktürel değişikliklerin ömür boyu elektron mikroskobik incelemesi, ışık mikroskobu verilerini tamamlamayı ve teşhis değerlerini artırmayı mümkün kılar.

Bu bağlamda, hepatik HSC'lerin tanımlanması, transdiferansiasyon sürecinde fenotiplerinin incelenmesi ve proliferasyonlarının yoğunluğunun belirlenmesi, karaciğer hastalıklarının sonuçlarının tahmin edilmesinin yanı sıra patomorfoloji ve fibrogenezin patofizyolojisi.

Amaç - intravital karaciğer biyopsi örneklerinin sitolojik tanımlama sonuçlarına dayanarak HCI'nin yapısal ve fonksiyonel özelliklerini sunmak.

Malzemeler ve yöntemler

tarafından intravital karaciğer biyopsisi alındı. aspirasyon biyopsisi Yazılı bilgilendirilmiş onam alınan KHC (HCV+ RNA) hastalarında karaciğer.

Yarı ince kesitlerin ışık mikroskobu için, 0,5 x 2 mm boyutlarındaki hastaların karaciğer biyopsi örnekleri çift fiksasyon ile sabitlendi: önce Sato Taizan yöntemine göre, daha sonra doku örnekleri ek olarak 1 saat boyunca %1 oranında fikse edildi. 0.1 M fosfat Sorensen tamponu, pH 7.4 üzerinde hazırlanan osmiyum fiksatif. Potasyum dikromat (K2Cr2O7) veya kromik anhidrit kristalleri (1 mg/mL) %1 osmiyum tetroksite ilave edilerek yarı ince kesitlerde hücre içi yapıları ve interstisyel maddeyi daha iyi ortaya çıkardı. Bir serideki numunelerin dehidrasyonundan sonra alkol çözeltileri artan konsantrasyon ve aseton ile önceden polimerize edilmiş bir butil metakrilat ve stiren karışımına yerleştirildiler ve 55°C'de polimerize edildiler. Yarı ince kesitler (1 µm kalınlığında) sırayla boyandı

masmavi II-temel fuksin. Mikrograflar bir dijital video kamera (Leica FC 320, Almanya) kullanılarak elde edildi.

0,1 M Millonig tamponu, pH 7.4, +40C'de 2 saat boyunca %1'lik bir osmiyum tetroksit çözeltisi ile sabitlenmiş, 0.5x1.0 mm boyutundaki karaciğer biyopsi numunelerinin numunelerinde elektron mikroskobik bir çalışma gerçekleştirilmiştir. Artan alkoller ve asetonda dehidrasyondan sonra numuneler araldite döküldü. Elde edilen bloklardan bir Leica EM VC7 ultramikrotomu (Almanya) üzerinde yarı ince kesitler (400 nm) hazırlandı ve metilen mavisi ile boyandı. Preparatlar bir ışık mikroskobu altında incelendi ve ultrastrüktürel değişikliklerin daha ileri çalışması için tek tip bir bölge seçildi. Ultra ince kesitler (35 nm), E.S. Reynolds'a göre %50 metanol ve kurşun sitrat içinde %2 uranil asetat ile zıt boyandı. Elektron mikroskobik preparasyonlar, bir JEM-1011 elektron mikroskobu (JEOL, Japonya) kullanılarak, 80 kW'lık bir hızlanma voltajında ​​10.000–60.000 büyütmede incelenmiştir. Görüntü elde etmek için bir Olympus MegaViewIII dijital kameradan (Almanya) ve iTEM görüntü işleme yazılımından (Olympus, Almanya) bir kompleks kullanıldı.

sonuçlar ve tartışma

HSC'ler, hepatositler ve endotel hücreleri arasındaki ceplerde perisinüzoidal boşlukta (Disse) bulunur; hepatositler arasında derinlemesine nüfuz eden uzun süreçlere sahiptirler. Bu HSC popülasyonuna adanan yayınların çoğunda, yalnızca HSC'lerin karaciğerdeki "bölgesel" ilişkisini ve çevredeki "komşuları" ile ilgili olarak belirlemeye izin veren şematik gösterimleri verilmiştir (Şekil 1).

HSC'ler, tamamlanmamış bir bazal membranın bileşenleri ve interstisyel kollajen lifleri yoluyla endotel hücreleri ile yakın temas halindedir. Sinir uçları, SC ve parankimal hücreler arasına nüfuz eder, bu nedenle Disse boşluğu, parankimal hücrelerin plakaları arasındaki boşluk olarak tanımlanır ve

HCI ve endotel hücrelerinin bir kompleksi.

HSC'lerin gelişmekte olan karaciğerin enine septumundaki zayıf farklılaşmış mezenkimal hücrelerden kaynaklandığına inanılmaktadır. Deney, hematopoietik kök hücrelerin HSC'lerin oluşumunda rol oynadığını ve bu sürecin hücre füzyonundan kaynaklanmadığını buldu.

Sinüzoidal hücreler (SC'ler), öncelikle HSC'ler, her türlü karaciğer rejenerasyonunda lider bir rol oynar. Karaciğerin fibroz rejenerasyonu, HSC ve kök hücrelerin kök fonksiyonlarının inhibisyonu sonucu oluşur. kemik iliği. İnsan karaciğerinde, HSC'ler, mezenkimal kökenli 4 çeşit SC'den biri olan %5-15'ini oluşturur: Kupffer hücreleri, endoteliyositler ve Pb hücreleri. SC havuzu ayrıca %20-25 lökosit içerir.

HCI sitoplazmasında retinol, trigliseritler, fosfolipidler, kolesterol, serbest yağ içeren inklüzyonlar vardır. yağ asidi, a-aktin ve desmin. ZKI, altın klorür boyaması kullanılarak görselleştirilir. Deneyde, diğer miyofibroblastlardan HKI farklılaşmasının belirtecinin, onların reelin proteininin ifadesi olduğu bulundu.

HSC'ler, her biri gen ekspresyonu ve fenotip (a-IgMA, ICAM-1, kemokinler ve sitokinler) ile karakterize edilen hareketsiz ("aktif olmayan HSC'ler"), geçici ve uzun vadeli aktif durumlarda bulunur.

Aktif olmayan bir durumdaki HSC'ler yuvarlak, hafif uzun veya düzensiz bir şekle, büyük bir çekirdeğe ve parlak bir görsel işarete sahiptir - retinol içeren lipid kapanımları (damlalar) (Şekil 2).

Aktif olmayan bir HSC'deki lipit damlacıklarının sayısı 30 veya daha fazlasına ulaşır, boyutları birbirine yakındır, birbirine bitişiktir, çekirdeğe baskı yapar ve onu çevreye doğru iter (Şekil 2). Büyük damlalar arasında küçük kapanımlar bulunabilir. Damlaların rengi fiksatife ve malzemenin rengine bağlıdır. Bir durumda açık renklidirler (Şekil 2a), diğerinde koyu yeşildirler (Şekil 2b).

Şekil 1. Disse'nin perisinüzoidal alanında (Disse alanı), İnternet kaynağında ICH'nin (yıldız hücre, perisinüzoidal liposit) konumunun şeması

Şekil 2. - Aktif olmayan durumdaki CCİ'ler

a - yüksek miktarda açık renkli lipid damlacıkları (beyaz oklar), harap sitoplazmalı (siyah ok) hepatositler (Hz) içeren yuvarlak şekilli HCI; b - Bir makrofaj (Mf) ile yakın temas halinde olan koyu lipid damlacıkları olan HCI; a-b - yarı ince bölümler. Renklendirme masmavi II - temel macenta. Mikrograflar. Artırılmış 1000; c - Düzensiz bir şekle sahip (büyüklük 6.000) bol miktarda lipid damlacıkları (30'dan fazla) olan HCI; HCI'nin d-ultrastrüktürel bileşenleri: l-lipid damlaları, mitokondri (turuncu oklar), GRES (yeşil oklar), Golgi kompleksi (kırmızı ok), sw. 15.000; cd - elektronogramlar

Elektron mikroskobu ile, hafif bir lipid substratının arka planına karşı daha ozmiofilik bir marjinal kenar oluşur (Şekil 5a). Çoğu "dinlenme" HSC'de, büyük lipid kapanımları ile birlikte, mitokondri (Mx) ve granüler endoplazmik retikulum (GRES) bakımından zayıf, fark edilir derecede az miktarda sitoplazmik matris vardır. Aynı zamanda, orta derecede gelişmiş bir Golgi kompleksinin bölmeleri, uçları hafifçe genişletilmiş 3-4 düzleştirilmiş sarnıç yığını şeklinde açıkça görülmektedir (Şekil 2d).

Belirli koşullar altında, aktive edilmiş HSC'ler, hem lipid içeren hem de fibroblast benzeri hücrelerin morfolojik özelliklerini birleştiren karışık veya geçişli bir fenotip kazanır (Şekil 3).

HCI'nin geçiş fenotipi de kendi morfolojik özelliklerine sahiptir. hücre alır uzatılmış şekil, lipid kapanımlarının sayısı azalır ve nükleolemma invajinasyonlarının sayısı azalır. Bağlı ribozomlara ve serbest ribozomlara sahip çok sayıda GRES sarnıcı içeren sitoplazmanın hacmi artar, Mx. 3-8 düzleştirilmiş sarnıçtan oluşan birkaç yığınla temsil edilen lamellar Golgi kompleksinin bileşenlerinin hiperplazisi, bozulmaya dahil olan lizozomların sayısında bir artış vardır.

Şekil 3. - Geçiş durumunda olan ZKI

a - ZKI (beyaz oklar). Yarı kesim. Masmavi II boyama - temel macenta. Mikrograf. Artırılmış 1000; b - Uzatılmış bir şekle ve az miktarda lipid damlacıklarına sahip ZKI; uv. 8000; c - Kupffer hücreleri (CC) ve lenfosit (Lc), SW ile temas halinde HCI. 6000. (Hz - hepatosit, l - lipid damlaları, E - eritrosit); d - mitokondri (turuncu oklar), GRES (yeşil oklar), c Goldji (kırmızı ok), lizozomlar (mavi oklar), magn. b, c, d - elektron kırınım modelleri

lipid damlacıkları (Şekil 3d). GRES bileşenlerinin ve Golgi kompleksinin hiperplazisi, fibroblastların kolajen moleküllerini sentezleme ve ayrıca onları endoplazmik retikulumda ve Golgi kompleksinin elementlerinde translasyon sonrası hidroksilasyon ve glikosilasyon yoluyla modelleme yeteneği ile ilişkilidir.

Sağlam bir karaciğerde, sakin bir durumda olan HCI, süreçleri ile sinüzoidal kılcal damarları kaplar. HCI süreçleri 2 tipe ayrılır: perisinüzoidal (subendotelyal) ve interhepatoselüler (Şekil 4).

Birincisi hücre gövdesini terk eder ve sinüzoidal kılcal damarın yüzeyi boyunca uzanır ve onu parmak benzeri ince dallarla kaplar. Kısa villuslarla kaplıdırlar ve kılcal endotel tüpünün yüzeyi boyunca daha da uzanan karakteristik uzun mikro çıkıntılara sahiptirler. Hepatosit plakasını aşan ve komşu sinüzoide ulaşan interhepatoselüler büyümeler, birkaç perisinüzoidal büyümeye ayrılır. Böylece, FQI ortalama olarak ikiden fazla bitişik sinüzoidi kapsar.

Karaciğer hasarı ile HSC'nin aktivasyonu ve 3 fazın ayırt edildiği fibrogenez süreci meydana gelir. Bunlar başlama, uzama ve çözülme (fibröz dokunun çözülmesi) olarak adlandırılır. "Dinlenme" HSC'lerin fibrozan miyofibroblastlara dönüşüm süreci sitokinler (^-1, ^-6,

Şekil 4. - HCI'nin perisinüzoidal (subendotelyal) ve interhepatoselüler süreçleri (büyümeleri)

(a) hücre gövdesinden çıkan ZKI (sarı oklar) süreci, uv. 30.000; b - bir lipid damlası, SW içeren, sinüzoidal kılcal damarın yüzeyi boyunca yer alan bir HCI işlemi. 30.000; (c) HCI'nin endotel altı yerleşimli süreçleri. Endotel hücrelerinin süreçleri (pembe oklar); d - HCI'nin interhepatoselüler süreci; HCI ve hepatosit (siyah oklar) zarlarının tahribat alanı, şişmiş 10 000. Elektronogramlar

TOT-a), az oksitlenmiş metabolik ürünler, reaktif oksijen türleri, nitrik oksit, endotelin, trombosit aktive edici faktör (PDGF), plazminojen aktivatör, dönüştürücü büyüme faktörü (TGF-1), asetaldehit ve diğerleri. Doğrudan aktivatörler, oksidatif stres durumundaki hepatositler, Kupffer hücreleri, endoteliyositler, lökositler, sitokin üreten trombositler (parakrin sinyalleri) ve ZKI'nin kendisidir (otokrin uyarımı). Aktivasyona, yeni genlerin ifadesi (işe dahil edilmesi), hücre dışı matrisin sitokinlerinin ve proteinlerinin sentezi (kollajenler I, III, Y tipleri) eşlik eder.

Bu aşamada, HSC'lerde hasarlı bölgedeki makrofajlar tarafından TOT-a üretimini engelleyen anti-inflamatuar sitokinlerin oluşumunu uyararak HSC'lerin aktivasyon süreci tamamlanabilir. Sonuç olarak, HSC'lerin sayısı keskin bir şekilde azalır, apoptoza uğrarlar ve karaciğerde fibroz süreçleri gelişmez.

Aktive edici uyaranlara uzun süreli sabit parakrin ve otokrin maruziyeti ile ikinci fazda (uzun süreli), HSC'nin hücre dışı fibriller kollajen sentezleyen kasılmalı miyofibroblast benzeri hücrelere dönüşümü ile karakterize edilen aktif bir fenotip HSC'de "korunur".

Aktive fenotip, proliferasyon, kemotaksi, kontraktilite, retinoid depolarının kaybı ve myofibroblastik hücrelere benzeyen hücrelerin oluşumu ile karakterize edilir. Aktive edilmiş ZKI'ler de göstermektedir artan içerik a-SMA, ICAM-1, kemokinler ve sitokinler gibi yeni genler. Hücre aktivasyonu, fibrogenezin erken bir aşamasının başlangıcını gösterir ve ECM proteinlerinin artan üretiminden önce gelir. Ortaya çıkan fibröz dokular, matris metalloproteinazların (matriksmetaloproteinazlar - MMP'ler) yardımıyla matris bölünmesi nedeniyle yeniden şekillenir. Buna karşılık, matris parçalanması, MMP'lerin doku inhibitörleri (matriks metaloproteinazların doku inhibitörleri - TIMP'ler) tarafından düzenlenir. MMP'ler ve TIMP'ler çinko bağımlı enzim ailesinin üyeleridir. MMP'ler, HSC'lerde, propeptid bölünmesi üzerine aktive olan ancak endojen TIMP'ler, TIMP'ler-1 ve TIMP'ler-2 ile etkileşim üzerine inhibe edilen aktif olmayan proenzimler olarak sentezlenir. HSC'ler, IL-1 p tarafından aktive edilen 4 tip membran tipi MMP üretir. MMP'ler arasında, bazal membranın bir parçası olan tip 4 kollajene ve kısmen denatüre tip 1 ve 5 kollajenlere karşı aktiviteye sahip olan bir nötr matriks metalloproteinaz olan MMPs-9 özellikle önemlidir.

Çeşitli karaciğer hasarı tiplerine sahip HCI popülasyonunda bir artış, önemli sayıda mitojenik faktörün, ilgili tirozin kinaz reseptörlerinin ve HKI'nin en belirgin proliferasyonuna neden olan diğer tanımlanmış mitojenlerin aktivitesi ile değerlendirilir: endotelin-1, trombin, FGF - fibroblast büyüme faktörü, PDGF - endotelyal büyüme faktörü damarları, IGF - insülin benzeri büyüme faktörü. HSC'lerin karaciğer hasarı alanlarında birikmesi, sadece bu hücrelerin proliferasyonu nedeniyle değil, aynı zamanda PDGF ve lökosit kemoatraktan-MCP (monosit kemotaktik protein- 1) .

Aktive edilmiş HSC'lerde lipid damlacıklarının sayısı hücrenin zıt kutuplarında konumlandıkları için 1-3'e düşürülür (Şekil 5).

Aktive edilmiş HSC'ler uzun bir şekil alır, sitoplazmanın önemli alanları Golgi kompleksi tarafından işgal edilir, çok sayıda GRES sarnıcı ortaya çıkar (ihracat için protein sentezinin bir göstergesi). Diğer organellerin sayısı azalır: az sayıda serbest ribozom ve polisom, tek mitokondri ve düzensiz lizozom bulunur (Şekil 6).

2007'de HSC'ler, hematopoietik mezenkimal kök hücrelerin belirteçlerinden biri olan CD133'ü ifade ettikleri için ilk olarak karaciğer kök hücreleri olarak adlandırıldı.

Şekil 5. - Etkinleştirilmiş durumdaki CCI'ler

a, b - Çekirdeğin zıt kutuplarında lokalize tek lipid kapanımlarına sahip HCI (mavi oklar). perisinüzoidal bağ dokusu(Şekil 6a'da) ve hepatosit çevresindeki hücreler arası matris tabakası (Şekil 6b'de) kırmızı ile boyanmıştır. Sitotoksik lenfositler (mor oklar). Endotel hücresi (beyaz ok). Plazma hücresi (kırmızı ok) ve hepatosit arasındaki yakın temas. Yarı ince kesimler. Renklendirme masmavi II - temel macenta. Mikrograflar. Artırılmış 1000 ; c, d - HCI'nin ultrastrüktürel bileşenleri: mitokondri (turuncu oklar), Golgi kompleksi (kırmızı ok), daha ozmiofilik cis tarafına bakan, granüler endoplazmik retikulumun genişletilmiş elemanlarının sarnıçları (yeşil oklar), lizozom (mavi ok) (magn .sırasıyla 10.000 ve 20.000); c, d - elektron kırınım modelleri

Normal karaciğerde bulunmayan miyofibroblastların üç potansiyel kaynağı vardır: birincisi karaciğerin intrauterin gelişimi sırasında, portal yollarda miyofibroblastlar damarları çevreler ve Safra Yolları olgunlaşmaları sırasında ve karaciğerin tam gelişmesinden sonra kaybolurlar ve portal yollarda portal fibroblastlar tarafından değiştirilirler; ikincisi - karaciğer hasarı ile, portal mezenkimal hücreler ve istirahat HSC'leri nedeniyle, daha az sıklıkla geçiş epitelyal-mezenkimal hücreler nedeniyle oluşurlar. CD45-, CD34-, Desmin+, (GFAP)+ ve Thy-1+ ile bağlantılı glial fibriller proteinin varlığı ile karakterize edilirler.

Son çalışmalar hepatositler, kolanjiyositler ve endotel hücrelerinin epitelyal veya endotelyal-mezenkimal geçiş (EMT) yoluyla miyofibroblastlar haline gelebileceğini göstermiştir. Bu hücreler, CD45-, albümin+ (yani hepatositler), CD45-, CK19+ (yani kolanjiyositler) veya Tie-2+ (endotel hücreleri) gibi belirteçleri içerir.

Şekil 6. - HSC'nin yüksek fibrotik aktivitesi

a, b - miyofibroblast (Mfb), hücre büyük bir çekirdek, GRES elemanları (kırmızı oklar), çok sayıda serbest ribozom, polimorfik veziküller ve granüller, tek mitokondri ve parlak bir görselleştirme işareti içerir - sitoplazmada (sarı) bir aktin filamenti demeti oklar); uzaklaştırdı. 12.000 ve 40.000; c, d, e, f - sitoplazmada retinoid içeren lipid damlacıklarının tutulması ile HSC'nin yüksek fibrotik aktivitesi. Çok sayıda kolajen fibril demeti (beyaz oklar) (a) korundu ve (d, e, f) spesifik enine çizgiyi kaybetti; uzaklaştırdı. 25.000, 15.000, 8.000, 15.000 Elektronogramlar

Ayrıca fibrositlerden ve dolaşan mezenkimal hücrelerden oluşan kemik iliği hücreleri miyofibroblastlara dönüşebilir. Bunlar CD45+ (fibrositler), CD45+/- (dolaşan mezenkimal hücreler), kollajen tip 1+, CD11d+ ve MHC sınıf 11+'dır (Şekil 7).

Literatür verileri, yalnızca oval hücrelerin proliferasyonu ile proliferasyon arasındaki yakın ilişkiyi doğrulamaz. sinüsoidal hücreler, aynı zamanda HSC'nin perisinüzoidal hücrelerin mezenkimal-epitelyal transformasyonu olarak adlandırılan hepatik epitele olası farklılaşmasına ilişkin veriler.

Fibrojenik aktivasyon durumunda, miyofibroblast benzeri HSC'ler, lipid damlacıklarının sayısında bir azalma ve ardından kaybolması ile birlikte, fokal proliferasyon (Şekil 8), düz kas a-aktin dahil olmak üzere fibroblast benzeri belirteçlerin immünohistokimyasal ekspresyonu ile karakterize edilir. ve Disse boşluklarında perisellüler kollajen fibrillerinin oluşumu.

Fibrozisin gelişme aşamasında, karaciğer dokusunun artan hipoksisi, kök hücrelerde pro-inflamatuar yapışma moleküllerinin ek aşırı ekspresyonunda bir faktör haline gelir - 1CAM-1, 1CAM-2, VEGF, proinflamatuar

Duktal hepatik progenitör hücrelerin karaciğer miyofibroblastları ile etkileşimi

Fibrojenik aktivasyon durumunda miyofibroblast benzeri HSC'ler.

Şekil 7. - HSC'nin miyofibroblastik aktivasyonunun katılımcıları

güçlü kemoatraktanlar - M-CSF, MCP-1 (monosit kemotaktik protein-1) ve SGS (sitokin aracılı nötrofil kemoatraktan) ve proinflamatuar sitokinlerin oluşumunu uyaran diğerleri (TGF-b, PDGF, FGF, PAF, SCF, ET-1 ) ve karaciğerdeki fibrogenez süreçlerini geliştirerek, devam eden HSC aktivasyonunun ve fibrogenez süreçlerinin kendi kendine devam eden indüksiyonu için koşullar yaratır.

Mikroskobik müstahzarlarda, perikapiller fibroz, perisinüzoidal bağ dokusunun ve hepatositlerin etrafındaki (genellikle ölmekte olan) hücreler arası matris tabakasının kırmızı renkte yoğun renklenmesi şeklinde kendini gösterir. Elektron mikroskobik preparasyonlarda, fibrotik değişiklikler, ya enine çizgiyi koruyan kollajen liflerinin oluşturduğu büyük demetler şeklinde ya da büyük bir formda görselleştirilir.

Periyodik çizgilerini kaybetmiş, şişmiş kollajen lifleri olan Disse fibröz kitlesinin boşluğunda birikintiler (Şekil 9).

İle modern fikirler fibrozis ilerleyebilen ve gerileyebilen dinamik bir süreçtir (Şekil 10).

Son zamanlarda, birkaç spesifik ICD belirteci önerilmiştir: lipid damlacıklarında A vitamini (VA), GFAP, p75 NGF reseptörü ve sinaptofizin. Karaciğer kök hücrelerinin proliferasyonu ve farklılaşmasında karaciğer HCI'nin rolü üzerine çalışmalar yürütülmektedir.

VA ile bir kompleks oluşturan retinol bağlayıcı proteinin (RBP-4) içeriğini inceledik ve konsantrasyonu kan plazmasındaki normal olarak vücudun %80'i HCI içinde olan VA ile sağlanması ile ilişkilidir.

içerik arasındaki ilişki

Şekil 8. - Fibrojenik aktivasyon durumunda HSC'nin fokal proliferasyonu

a - dilate sinüzoidlerin lümeninde HCI hiperplazisi (beyaz oklar); b - transdiferansiye HSC'lerin (beyaz oklar), endotel hücresinin (pembe ok) proliferasyonu. Yarı ince kesimler. Renklendirme masmavi II - temel macenta. Mikrograflar. Artırılmış 1000

Şekil 9. - HSC'nin miyofibroblastik aktivasyonunun son aşaması

a, b - perisinüzoidal fibroz (beyaz oklar). Peri-sinüzoidal bağ dokusu ve hepatositlerin (b) etrafındaki hücreler arası matris tabakası, bazik fuksin ile kırmızıya boyanmıştır. HSC'ler aktive edildi ve fibroblastlara dönüştü (mavi oklar). Şek. a - harap sitoplazmalı hepatosit. Yarı ince kesimler. Renklendirme masmavi II - temel macenta. Mikrograflar. Artırılmış 1000; c, d - karaciğer lobülünde perisinüzoidal ve perihepatoselüler fibroz, kollajen lif fibrillerinin elektron yoğunluğunun artması; hepatositte mitokondriyal matrisin yoğunlaşması (turuncu ok). Sırasıyla 8.000 ve 15.000'i artırın. elektronogramlar

Tablo 1. Çeşitli etiyolojilere sahip karaciğer sirozu (LC) ve kronik hepatit (CH) hastalarında RBP-4 içeriği göstergeleri, ng/ml (M±m)

Grup n M±m p

Karaciğer sirozu 17 23,6±2,29<0,05

CG, ASAT normu 16 36,9±2,05* >0,05

CG, ASAT >2 norm 13 33,0±3,04* >0,05

CG, ALT normu 13 37,5±3,02* >0,05

CG, ALT >2 norm 21 35,9±2,25* >0,05

Kontrol 15 31.2±2.82

Not: p - kontrol ile önemli farklılıklar (p<0,05); * - достоверные различия между ЦП и ХГ (р<0,05)

Fibröz bir septum ve fibröz bir septumla çevrili yalancı lobül. Masso'ya göre boyama - sahte bir lobül çemberi. u.Uv.x50 Masson'a göre boyama. x200'ü artır

Şekil 10 - Otolog mezenkimal kök hücrelerin karaciğere naklinden 6 ay sonra viral sirozlu bir hastanın yalancı lobülündeki olayların dinamikleri

Karaciğerdeki iltihaplanma aktivitesinin biyokimyasal belirteçlerinden bağımsız olarak, böyle bir bağımlılığın gözlenmediği kronik hepatitin aksine, RBP-4 ve fibrozun 4. aşamasını (siroz) yiyorum.

Bu gerçek, karaciğerdeki fibrozisin ilerlemesi nedeniyle BİT potansiyelinin tükenmesinden kaynaklanabilecek vücuttaki VA eksikliğini ortadan kaldırmak için replasman tedavisini doğrularken dikkate alınmalıdır.

1. HCI'nin yapısal ve fonksiyonel durumunun değerlendirilmesinin maksimum etkinliği, bir hücre görselleştirme teknikleri kompleksinin (ışık, ultra ince bölümlerin elektron mikroskobu ve orijinal yöntemlerin) eşzamanlı kullanımı ile bir intravital biyopsi örneğinin morfolojik bir çalışması ile sağlanır. sabitleme ve boyama).

2. HCI'nin morfolojik çalışmasının sonuçları, fibrozisin in vivo teşhisinin kalitesini iyileştirmeye, onu izlemeye ve kronik yaygın karaciğer lezyonlarının sonuçlarını daha yüksek bir modern seviyede tahmin etmeye izin verir.

3. Morfolojik sonuçların sonuçları, klinisyenin, nihai teşhisin formülasyonuna terapi sırasında kroniklik aşaması (stabilizasyon, ilerleme veya fibrozun çözülmesi) hakkında rafine verileri ek olarak dahil etmesine izin verecektir.

Edebiyat

1. Ivashkin, V. T. Fibrotik öncesi değişikliklerin klinik belirtileri: Tüm Rusya İnternet İç Hastalıkları Uzmanları Kongresi dersinin bir kopyası / V. T. Ivashkin, A. O. Bueverov // DAHİLİ: Ulusal İnternet İç Hastalıkları Uzmanları Derneği. - 2013. - Erişim modu: http://internist. ru/yayınlar/detay/6569/. - Erişim tarihi: 21.11.2016.

2. Kiyasov, A.P. Oval hücreler - varsayılan karaciğer kök hücreleri mi yoksa hepatoblastlar mı? / A.P. Kiyasov, A.A. Gumerova, M.A. Titova // Hücre transplantolojisi ve doku mühendisliği. - 2006. - C. 2, No. 4. - S. 55-58.

1. Ivashkin, V. T. Klinicheskaya simptomatika dofibroticheskih izmenenij: stenogramma lekcii Vserossijskogo Internet-Kongressa uzmanıov po vnutrennim boleznyam / V. T. Ivashkin, A. O. Bueverov // INTERNIST: http://www.internist.com http://www.internist.org : Rezhipa 20 do13. - //internist.ru/publications/detail/6569/ - Erişilen veri: 21/11/2016.

2. Kiyasov, A.P. Oval "nye kletki - predpolagaemye stvolovye kletki pecheni veya gepatoblasty? / A. P. Kiyasov, A. A. Gumerova, M. A. Titova // Kletochnaya transplantologiya i tkanevaya inzheneriya. - 2006. - 4. S. - 55. - 2006. - 4. S. - 58.

3. Sağlıklı ve hasarlı bir karaciğer için rejeneratif bir strateji sağlamada sinüzoidal karaciğer hücreleri ve kemik iliği hücrelerinin rolü hakkında / A. V. Lundup [ve diğerleri] // Transplantoloji ve yapay organlar bülteni. -2010. - T. XII, No. 1. - S. 78-85.

4. Serov, V. V. Viral kronik hepatit B ve C / V. V. Serov, L. O. Severgina // Patoloji Arşivi'nde etiyolojiyi, aktivite derecesini ve sürecin aşamasını değerlendirmek için morfolojik kriterler. - 1996. - No. 4. - S. 61-64.

5. Fibrozis dinamiklerinde karaciğer yıldız hücrelerinin yapısal ve fonksiyonel özellikleri / OA Postnikova [et al.] // Temel araştırma. - 2011. - Hayır. 10.

6. Enfeksiyöz viral oluşumun fibrozisi ve sirozu dinamiklerinde karaciğer yıldız hücrelerinin ultrastrüktürel ve immünohistokimyasal çalışması / G. I. Nepomnyashchikh [ve diğerleri] // Deneysel biyoloji ve tıp bülteni. - 2006. - T. 142, No. 12. - S. 681-686.

7. Shcheglev, AI Sinüzoidal karaciğer hücrelerinin yapısal ve metabolik özellikleri / AI Shcheglev, OD Mishnev // Modern biyolojinin başarıları. - 1991. - V. 3, No. 1. - S. 73-82.

10. Diyet retinoidi ve trigliseritin sıçan karaciğer yıldız hücrelerinin ve yıldız hücre lipid damlacıklarının lipid bileşimi üzerindeki etkileri / H. Moriwaki // J. Lipid. Araş. - 1988. - Cilt. 29. - R. 1523-1534.

13. Friedman, S. Hepatik fibrozis 2006: Üçüncü AASLD Tek Konu Konferansı Raporu / S. Friedman, D. Rockey, B. Montgomery // Hepatology. - 2006. - Cilt. 45(1). - R.242-249.

18. Iredale, J. P. Karaciğer Hasarının Çözülmesi Sırasında Hepatik Yıldız Hücre Davranışı / J. P. Iredale // Semin. Karaciğer Dis. -2001. - Cilt 21(3). - R. 427-436.

19. Kobold, D. Hepatik stellat hücrelerde ve hepatik doku onarımı sırasında reelin ifadesi: HSC'nin diğer karaciğer miyofibroblastlarından farklılaşması için yeni bir belirteç / D. Kobold // J. Hepatol. - 2002. - Cilt. 36(5). - R.607-613.

20. Lepreux, S. Portal (myo) odaklı gelişim ve hastalıklar sırasında insan karaciğer miyofibroblastları

3. O roli sinüzoidal "nyh kletok pecheni i kletok kostnogo mozga v obespechenii regeneratornoj strategii zdorovoj i povrezhdennoj pecheni / A. V. Lyundup // Vestnik transplantologii i iskusstvennyh organov. - 2010. - T. HII. - 2010. - T. HII. .

4. Serov, V. V. Morfologicheskie kriterii ocenki ehtiologii, stepeni aktivnosti ve stadii prosesa pri virüsnyh chrononiccheskih gepatitah V i S / V. V. Serov, L. O. Severgina // Arhiv patologii.

1996. - No. 4. - S. 61-64.

5. Strukturno-funkcional "naya harakteristika zvezdchatyh kletok pecheni v dinamike fibroza / O. A. Postnikova // Temel" nye issledovaniya. - 2011. - No. 10. - C. 359-362.

6. Ul "trastrukturnoe i immunogistohimicheskoe issledovanie zvezdchatyh kletok pecheni v dinamike fibroza i cirroza pecheni infekcionno-virusnogo geneza / G. I. Nepomnyashchih // Byulleten" ehksperimental "nojologii. - 6 - 6. 686.

7. SHCHeglev, A. I. Strukturno-metabolicheskaya harakteristika sinüzoidal "nyh kletok pecheni / A. I. SHCHeglev, O. D. Mishnev // Uspekhi sovremennoj biologii. - 1991. - T. 3, No. 1. - S. 73-82.

8. CD34 hepatik yıldız hücreleri progenitör hücrelerdir / C. Kordes // Biochem., Biophys. Araş. Yaygın. - 2007. - Cilt. 352(2). - S. 410-417.

9. Karaciğer fibrozunda matris proteinlerinin bozulması / M. J. Arthur // Pathol. Araş. Pratik yapın. - 1994. - Cilt. 190(9-10).

10. Diyet retinoidi ve trigliseritin sıçan karaciğer yıldız hücrelerinin ve yıldız hücre lipid damlacıklarının lipid bileşimi üzerindeki etkileri / H. Moriwaki // J. Lipid. Araş. - 1988. - Cilt. 29. - R. 1523-1534.

11. Fetal karaciğer, epitelyal-mezenkimal geçişteki hücrelerden oluşur / J. Chagraoni // Kan. - 2003. - Cilt. 101. - S. 2973-2982.

12. Biyolojik örneklerin fiksasyonu, dehidrasyonu ve gömülmesi / A. M. Glauert // Elektron Mikroskobunda Pratik Yöntemler. - New York: Am. Elsevier, 1975. - Cilt. 3, bölüm 1.

13. Friedman, S. Hepatik fibrozis 2006: Üçüncü AASLD Tek Konu Konferansı Raporu / S. Friedman, D. Rockey, B. Montgomery // Hepatology. - 2006. - Cilt. 45(1). - R.242-249.

14. Gaga, M.D. İnsan ve rathepatik yıldız hücreleri kök hücre faktörü üretir: karaciğer fibrozunda mast hücre alımı için olası bir mekanizma / M.D. Gaga // J. Hepatol. - 1999. - Cilt. 30, No. 5. - S. 850-858.

15. Glauert, Elektron mikroskobu için gömme ortamı olarak A.M. Araldite / A.M. Glauert, R.H. Glauert // J. Biophys. Biyokimya. sitol. - 1958. - Cilt. 4. - S. 409-414.

16. Hepatik stellat hücreler ve portal fibroblastlar, normal karaciğerde ve yaralanmadan hemen sonra kollajen ve lisil oksidazların başlıca hücresel kaynaklarıdır / M. Perepelyuk // Am. J Physiol. mide testi. Karaciğer Fizol. - 2013. - Cilt. 304(6). - S. 605614.

17. Hepatit C virüsü çekirdeği ve yapısal olmayan proteinler, hepatik stellat hücrelerde fibrojenik etkilere neden olur / R. Bataller // Gastroenterology. - 2004. - Cilt. 126, is. 2. - S. 529-540.

18. Iredale, J. P. Karaciğer Hasarının Çözülmesi Sırasında Hepatik Yıldız Hücre Davranışı / J. P. Iredale // Semin. Karaciğer Dis. -2001. - Cilt 21(3). - R. 427-436.

19. Kobold, D. Hepatik stellat hücrelerde ve hepatik doku onarımı sırasında reelin ifadesi: HSC'nin diğer karaciğer miyofibroblastlarından farklılaşması için yeni bir belirteç / D. Kobold // J. Hepatol. - 2002. - Cilt. 36(5). - R.607-613.

20. Lepreux, S. Portal (myo) fibroblastlarına odaklanan gelişim ve hastalıklar sırasında insan karaciğer miyofibroblastları / S. Lepreux, A. Desmouliére

fibroblastlar / S. Lepreux, A. Desmoulière // Ön. fizik. - 2015. - Erişim modu: http://dx.doi. org/10.3389/fphys.2015.00173. - Erişim tarihi: 31.10.2016.

22. HCV İlişkili Karaciğer Sirozu Olan Hastalarda Mezenkimal Kemik İliği Kaynaklı Kök Hücre Nakli / S. Lukashyk // J. Clin. Tercüme hepatol. - 2014. - Cilt. 2, is. 4. - S. 217-221.

23. Millonig, G. A. Fiksasyonda osmiyum tetroksit çözeltileri için bir fosfat tamponunun avantajları / G. A. Millonig // J. Appl. Fizik. - 1961. - Cilt. 32. - S. 1637-1643.

Cilt 158. - S. 1313-1323.

Cilt 24. - S. 205-224.

29. Querner, F. Der mikroskobische Nachweis von Vitamin Aimanimalen Gewebe. Zur Kenntnis der paraplasmatischen Leberzellen-einschlüsse. Dritte Mitteilung / F. Querner // Klin. Wschr. - 1935. - Cilt. 14. - S. 1213-1217.

30. Miyofibroblast biyolojisindeki son gelişmeler: bağ dokusunun yeniden şekillenmesi için paradigmalar / B. Hinz // Am. J. Pathol. - 2012. - Cilt. 180. - S. 1340-1355.

35. Septum transversum kaynaklı mezotelyum, gelişen fare karaciğerinde hepatik stellat hücrelere ve perivasküler mezenkimal hücrelere yol açar / K. Asahina // Hepatology. -2011. - Cilt 53.-S. 983-995.

Cilt 50.-S. 66-71.

38. Thabut, D. Kronik karaciğer hastalığında intrahepatik anjiyogenez ve sinüzoidal yeniden şekillenme: portal hipertansiyon tedavisi için yeni hedefler? / D. Thabut, V. Şah // J. Hepatol. - 2010. - Cilt. 53. - S. 976-980.

39. Wake, K. Hepatik yıldız hücreler: Üç boyutlu yapı, lokalizasyon, heterojenlik ve gelişim / K.

// ön. fizik. - 2015. - Erişim modu: http://dx.doi. org/10.3389/fphys.2015.00173. - Erişim tarihi: 31.10.2016.

21. Hepatik yıldız hücrelerinde peroksizom proliferatörü ile aktive olan reseptör gama modülat profibrojenik ve proinflamatuar etkilerin ligandları / F. Marra // Gastroenterology. -2000. - Cilt 119. - S. 466-478.

22. HCV İlişkili Karaciğer Sirozu Olan Hastalarda Mezenkimal Kemik İliği Kaynaklı Kök Hücre Nakli / S. Lukashyk // J. Clin. Tercüme hepatol. - 2014. - Cilt. 2, is. 4.-R.217-221.

23. Millonig, G. A. Fiksasyonda osmiyum tetroksit çözeltileri için bir fosfat tamponunun avantajları / G. A. Millonig // J. Appl. Fizik. - 1961. - Cilt. 32. - S. 1637-1643.

24. Sıçan karaciğerinde erken çoğalan oval hücrelerin kökeni ve yapısal evrimi / S. Paku // Am. J. Hepatol. - 2001.

Cilt 158. - S. 1313-1323.

25. Karaciğer fibrozunda miyofibroblastların kökeni / D. A. Brenner // Fibrogenez Doku Onarımı. - 2012. - Cilt. 5 ek 1. - S. 17.

26. Karaciğer miyofibroblastlarının kökenleri ve işlevleri / S. Lemoinne // Biochim. Biyofiz. akta. - 2013. - Cilt. 1832(7). - S. 948-954.

27. Pinzani, M. PDGF ve karaciğer yıldız hücrelerinde sinyal iletimi / M. Pinzani // Ön. biosci. - 2002. - Cilt. 7. - S. 1720-1726.

28. Popper, H. Floresan mikroskobu ile ortaya çıkan dokuda A vitamini dağılımı / H. Popper // Physiol. Rev. - 1944.

Cilt 24.-R.205-224.

29. Querner, F. Der mikroskobische Nachweis von Vitamin Aimanimalen Gewebe. Zur Kenntnis der paraplasmatischen Leberzellen-einschlüsse. Dritte Mitteilung / F. Querner // Klin. Wschr. - 1935. - Cilt. 14. - R. 1213-1217.

30. Miyofibroblast biyolojisindeki son gelişmeler: bağ dokusunun yeniden şekillenmesi için paradigmalar / B. Hinz // Am. J. Pathol. - 2012. - Cilt. 180. - R. 1340-1355.

31. Reynolds, E. S. Elektron mikroskobunda elektronopak bir leke olarak yüksek pH'ta kurşun sitratın kullanımı / E. S. Reynolds // J. Cell. Biol. - 1963. - Cilt. 17. - S. 208-212.

32. Safadi, R. CD8 hücreleri tarafından hepatik fibrojenezin immün uyarılması ve hepatositlerden transgenik interlökin-10 ile zayıflama / R. Safadi // Gastroenteroloji. - 2004. - Cilt. 127(3). - S. 870-882.

33. Sato, T. Fosfat tamponlu formalinde daha uzun süreler boyunca sabitlenmiş numunenin elektron mikroskobik çalışması / T. Sato, I. Takagi // J. Electron Microsc. - 1982. - Cilt. 31, No. 4. - S. 423-428.

34. Senoo, H. A Vitamini Depolayan Hücreler (Yıldızlı Hücreler) / H. Senoo, N. Kojima, M. Sato // Vitam. Horm. - 2007. - Cilt. 75.

35. Septum transversum kaynaklı mezotelyum, gelişen fare karaciğerinde hepatik stellat hücrelere ve perivasküler mezenkimal hücrelere yol açar / K. Asahina // Hepatology. -2011. - Cilt 53.-R. 983-995.

36. Stanciu, A. ITO hücreleri hakkında yeni veriler / A. Stanciu, C. Cotutiu, C. Amalinei, Rev. Med. Chir. soc. Med. Nat. Yaş. -2002. - Cilt 107, No. 2. - S. 235-239.

37. Suematsu, M. Profesör Toshio Ito: perisit biyolojisinde bir kahin / M. Suematsu, S. Aiso // Keio J. Med. - 2000.

Cilt 50.-R.66-71.

38. Thabut, D. Kronik karaciğer hastalığında intrahepatik anjiyogenez ve sinüzoidal yeniden şekillenme: portal hipertansiyon tedavisi için yeni hedefler? / D. Thabut, V. Şah // J. Hepatol. - 2010. - Cilt. 53.-R. 976-980.

39. Wake, K. Hepatik stellat hücreler: Üç boyutlu yapı, lokalizasyon, heterojenlik ve gelişim / K. Wake // Proc. Jpn. Acad. Sör. B, Fizik Biol. bilim - 2006. - Cilt.

Uyan // Proc. Jpn. Acad. Sör. B, Fizik Biol. bilim - 2006. - Cilt. 82(4). - S. 155-164.

82(4). - S. 155-164.

40. Wake, K. Hepatik Sinusoid Hücrelerinde / K. Wake, H. Senoo // Kupffer Cell Foundation (Rijswijk, Hollanda). - 1986. - Cilt. 1. - S. 215-220.

41. Watson, M. L. Ağır metallerle elektron mikro için doku bölümlerinin boyanması / M. L. Watson // J. Biophys. Biyokimya. Cyt. - 1958. - Cilt. 4. - S. 475-478.

KARACİĞER KLİNİK SİTOLOJİSİ: ITO STELLATE HÜCRELERİ (HEPATİK STELLATE HÜCRELERİ)

Tsyrkunov V. M, Andreev V. P., Kravchuk R. I., Kandratovich I. A. Eğitim Kurumu "Grodno Devlet Tıp Üniversitesi", Grodno, Beyaz Rusya

giriiş. Ito stellat hücrelerinin (Hepatik Stellat Cells, HSC) rolü, karaciğer fibrozunun gelişiminde önde gelenlerden biri olarak tanımlanmıştır, ancak klinik uygulamada HSC yapılarının intravital görselleştirilmesinin kullanımı minimaldir.

Çalışmanın amacı, intravital karaciğer biyopsi örneklerinin sitolojik tanımlama bulgularına dayanarak HSC'nin yapısal ve fonksiyonel özelliklerini sunmaktır.

Malzemeler ve yöntemler. Biyopsi örneklerinin klasik ışık ve elektron mikroskobu yöntemleri, orijinal teknik içinde ultra ince kesitler, fiksasyon ve boyama uygulandı.

Sonuçlar. Kronik hepatit C'li hastalardan alınan karaciğer biyopsi örneklerinin HSC'sinin yapısal özellikleri, ışık ve elektron mikroskobunun fotoğraf çizimlerinde sunulmaktadır. HSC'ler farklı aşamalarda (dinlenme, aktivasyon) ve miyofibroblastlara dönüşüm süreci sırasında tasvir edilir.

Sonuçlar. Orijinal klinik ve morfolojik tanımlama yöntemlerinin kullanılması ve HSC'nin fonksiyonel durumunun değerlendirilmesi, karaciğer fibrozisinin tanı ve prognozunun kalitesini iyileştirmeye izin verir.

Sinüzoidal hücreler (endotel hücreleri, Kupffer hücreleri, stellat ve çukur hücreleri), hepatositlerin sinüzoidin lümenine bakan bölümü ile birlikte fonksiyonel ve histolojik bir birim oluşturur.

endotel hücreleri sinüzoidleri hizalayın ve sinüzoid ile Disse boşluğu arasında basamaklı bir bariyer oluşturan fenestraları içerir. Kupffer hücreleri endotelyuma bağlıdır.

yıldız hücreleri karaciğer, hepatositler ve endotel hücreleri arasındaki Disse boşluğunda bulunur. Disse alanı portal bölgelerin lenfatik damarlarına akan doku sıvısını içerir. Sinüzoidal basınçtaki bir artışla, karaciğerden venöz çıkışı ihlal eden asit oluşumunda rol oynayan Disse alanındaki lenf üretimi artar.

Kupffer hücresi, antijen sunumunda önemli bir rol oynayan immünoglobulin Fc fragmanı ve kompleman C3b bileşeni dahil olmak üzere ligandlar için spesifik membran reseptörleri içerir.

Kupffer hücreleri, genelleştirilmiş enfeksiyonlar veya yaralanmalar sırasında aktive edilir. Spesifik olarak endotoksin alırlar ve yanıt olarak tümör nekroz faktörü, interlökinler, kollajenaz ve lizozomal hidrolazlar gibi bir dizi faktör üretirler. Bu faktörler rahatsızlık ve halsizlik hissini arttırır. Bu nedenle endotoksinin toksik etkisi, kendi içinde toksik olmadığı için Kupffer hücrelerinin salgı ürünlerinden kaynaklanmaktadır.

Kupffer hücresi ayrıca prostaglandinler de dahil olmak üzere araşidonik asit metabolitlerini salgılar.

Kupffer hücresinin insülin, glukagon ve lipoproteinler için özel zar reseptörleri vardır. N-asetilglikozamin, mannoz ve galaktoz için karbonhidrat reseptörü, bazı glikoproteinlerin, özellikle lizozomal hidrolazların pinositozuna aracılık edebilir. Ek olarak, IgM içeren immün komplekslerin alımına aracılık eder.

Fetal karaciğerde, Kupffer hücreleri bir eritroblastoid işlevi yerine getirir. Kupffer hücreleri tarafından endositozun tanınması ve hızı, doğal bir immünomodülatör peptit olan opsoninlere, plazma fibronektine, immünoglobulinlere ve tuftsin'e bağlıdır. Bu "karaciğer elekleri" çeşitli büyüklükteki makromolekülleri filtreler. Büyük, trigliseritle doymuş şilomikronlar bunlardan geçmez ve daha küçük, trigliserit bakımından fakirdir, ancak kolesterol ve retinole doymuş kalıntılar Disse boşluğuna nüfuz edebilir. Endotel hücreleri, lobüldeki konumlarına bağlı olarak biraz değişir. Taramalı elektron mikroskobu, bir bazal membran oluşumu ile fenestrae sayısının önemli ölçüde azalabileceğini göstermektedir; bu değişiklikler özellikle alkolizmli hastalarda 3. bölgede belirgindir.

Sinüzoidal endotel hücreleri, reseptör aracılı endositoz kullanarak makromolekülleri ve küçük partikülleri aktif olarak dolaşımdan uzaklaştırır. Hyaluronik asit (bağ dokusunun ana polisakkarit bileşeni), kondroitin sülfat ve sonunda mannoz içeren bir glikoprotein için yüzey reseptörleri, ayrıca FcIgG fragmanları için tip II ve III reseptörleri ve bir lipopolisakarit bağlayıcı protein için bir reseptör taşırlar. Endotel hücreleri, dokuya zarar veren enzimleri ve patojenik faktörleri (mikroorganizmalar dahil) ortadan kaldırarak bir temizleme işlevi görür. Ek olarak, yok edilen kolajenin kanını temizler ve lipoproteinleri bağlar ve emer.

karaciğerin yıldız hücreleri(yağ depolayan hücreler, lipositler, İto hücreleri). Bu hücreler Disse'nin subendotelyal boşluğunda bulunur. Bazıları parankimal hücrelerle yakın temasta olan, bazıları ise kan akışının düzenlenmesine katılabilecekleri ve böylece portal hipertansiyonu etkileyebilecekleri birkaç sinüzoide ulaşan uzun sitoplazmik büyümeler içerirler. Normal bir karaciğerde, bu hücreler adeta retinoidlerin ana depolanma yeridir; morfolojik olarak sitoplazmada yağ damlacıkları olarak görünür. Bu damlacıkların salınmasından sonra, yıldız hücreleri fibroblastlara benzer hale gelir. Aktin ve miyozin içerirler ve endotelin-1 ve madde P'ye maruz kaldıklarında büzülürler. Hepatositler hasar gördüğünde, yıldız hücreleri yağ damlacıklarını kaybeder, çoğalır, 3. bölgeye göç eder, miyofibroblastlarınkine benzer bir fenotip kazanır ve tip I, III üretir, ve IV kollajen ve ayrıca laminin. Ek olarak, hücre matris proteinazlarını ve metalloproteinazların bir doku inhibitörü gibi inhibitörlerini salgılarlar (bkz. Bölüm 19). Disse boşluğunun kollajenizasyonu, proteine ​​bağlı substratların hepatosit içine alımında bir azalmaya yol açar.

Çukur hücreleri. Bunlar çok hareketli lenfositlerdir - sinüzoidin lümenine bakan endotel yüzeyine bağlı doğal öldürücülerdir. Mikrovillileri veya psödopodiaları, Disse boşluğundaki parankimal hücrelerin mikrovillileri ile bağlantı kurarak endotel astarına nüfuz eder. Bu hücreler uzun yaşamazlar ve dolaşımdaki sinüzoidlere farklılaşan kan lenfositleri tarafından yenilenirler. Merkezde çubuklu karakteristik granüller ve veziküller gösterirler. Çukur hücreleri, tümör ve virüsle enfekte hepatositlere karşı kendiliğinden sitotoksisiteye sahiptir.

Sinüzoidal Hücre Etkileşimleri

Kupffer hücreleri ile endotel hücreleri arasında ve ayrıca sinüzoid hücreler ve hepatositler arasında karmaşık bir etkileşim vardır. Hücrelerin Kupferalipolisakkaritler tarafından aktivasyonu, endotel hücreleri tarafından hyaluronik asit alımını engeller. Bu etkiye muhtemelen lökotrienler aracılık etmektedir. Sinüzoid hücreler tarafından üretilen sitokinler, hepatosit proliferasyonunu uyarabilir veya inhibe edebilir.



Hücreler arası iletişim, parakrin salgılama ve doğrudan hücreden hücreye temas yoluyla gerçekleştirilebilir. Hepatik perisinüzoidal hücrelerin (HPC) bölgesel kök hücre nişleri oluşturduğu ve farklılaşmalarını belirlediği bilinmektedir. Aynı zamanda, HPC moleküler ve hücresel düzeyde zayıf bir şekilde karakterize edilir.

Projenin amacı, sıçan karaciğer perisinüzoidal hücreleri ile insan göbek kordon kanının mononükleer hücre fraksiyonu (UCB-MC) ve sıçan kemik iliğinden türetilen çok potansiyelli mezenkimal stromal hücreler (BM-MMSC) gibi çeşitli kök hücreler arasındaki etkileşimleri incelemekti.

Malzemeler ve yöntemler. Sıçan BM-MSC ve HPC, insan UCB-MC hücreleri, standart teknikler kullanılarak türetilmiştir. HPC parakrin düzenlemesini incelemek için Boyden odaları ve şartlandırılmış HPC hücre ortamı kullanarak UCB-MC veya BM-MMSC hücrelerini HPC ile birlikte kültürledik. Farklı olarak etiketlenmiş hücreler birlikte kültürlendi ve etkileşimleri, faz kontrastlı floresan mikroskopisi ve immünositokimya ile gözlemlendi.

Sonuçlar. Yetiştirmenin ilk haftasında, PHC'nin yağ depolama kabiliyeti nedeniyle A vitamininin otofloresansı vardı. BM-MMSC, tüm ortak kültür modellerinde yüksek canlılık gösterdi. BM-MMSC'nin HPC ile koşullandırılmış ortam ortak kültüründe 2 günlük inkübasyondan sonra, MMSC morfolojisinde değişiklikler gözlemledik - boyutları küçüldü ve filizleri kısaldı. α-Smooth Muscle Actin ve desmin ekspresyonu, in vitro olarak Ito hücre kültürünün bir ara formu olan myofibroblast'a benzerdi. Bu değişiklikler, HPC tarafından parakrin uyarımı nedeniyle olabilir. HPC'nin UCB-MC hücreleri üzerindeki en derin etkisi, temaslı ortak kültürde gözlendi, bu nedenle UCB-MC hücrelerinin canlılıklarını sürdürmek için doğrudan hücreden hücreye temaslar oluşturması önemlidir. Ortak kültürlerde HPC /UCB ve HPC /BM-MMSC hücreleri arasında herhangi bir hücre füzyonu gözlemlemedik. Daha sonraki deneylerimizde, kök hücrelerin hepatik farklılaşması için HPC tarafından üretilen büyüme faktörlerini incelemeyi planlıyoruz.

Giriiş.

Karaciğer hücrelerinin çeşitliliği arasında özellikle ilgi çekici olan perisinüzoidal karaciğer hücreleri (Ito hücreleri). Büyüme faktörlerinin ve hücre dışı matris bileşenlerinin salgılanması nedeniyle, hepatositlerden oluşan bir mikro ortam oluştururlar ve bir dizi bilimsel çalışma, karaciğer yıldız hücrelerinin progenitör hücreler (hematopoietik olanlar dahil) için bir mikro ortam oluşturma ve farklılaşmalarını etkileme yeteneğini göstermiştir. hepatositler. Bu hücre popülasyonlarının hücreler arası etkileşimleri, büyüme faktörlerinin parakrin salgılanması veya doğrudan hücreler arası temas yoluyla gerçekleştirilebilir, ancak bu işlemlerin moleküler ve hücresel temeli tam olarak anlaşılmamıştır.

Bu çalışmanın amacı.

Etkileşim mekanizmalarının incelenmesi Hematopoietik (HSC) ve mezenkimal (MMSC) kök hücreli İto hücreleri in vitro koşullar altında.

Malzemeler ve yöntemler.

Sıçan karaciğeri İto hücreleri, iki farklı enzimatik yöntemle izole edildi. Aynı zamanda, sıçanların kemik iliğinden stromal MMSC'ler elde edildi. İnsan göbek kordon kanından izole edilen hematopoietik kök hücrelerin mononükleer fraksiyonu. Ito hücrelerinin parakrin etkileri, Ito hücrelerinin büyüdüğü ortamda MMSC'lerin ve HSC'lerin kültürlenmesi ve yarı geçirgen bir zarla ayrılmış hücrelerin birlikte kültürlenmesi yoluyla incelenmiştir. Hücreler arası temasların etkisi, hücrelerin birlikte yetiştirilmesinde incelenmiştir. Daha iyi görselleştirme için her popülasyon ayrı bir floresan etiketiyle etiketlendi. Hücre morfolojisi, faz kontrastı ve floresan mikroskobu ile değerlendirildi. Kültürlenmiş hücrelerin fenotipik özellikleri, immünositokimyasal analiz ile incelenmiştir.

Sonuçlar.

Perisinüzoidal hücrelerin izolasyonundan sonraki bir hafta içinde, yağ biriktirme yeteneklerinden dolayı otofloresan yeteneklerine dikkat çektik. Daha sonra hücreler, büyümelerinin bir ara aşamasına geçtiler ve yıldız şeklinde bir şekil aldılar. Ito hücrelerinin sıçan kemik iliği MMSC'leri ile birlikte yetiştirilmesinin ilk aşamalarında, MMSC'lerin canlılığı tüm yetiştirme varyantlarında korunmuştur. İkinci gün, MMSC'ler Ito hücrelerinin kültür ortamında yetiştirildiğinde, MMSC'lerin morfolojisi değişti: boyutları küçüldü ve süreçler kısaldı. MMSC'de alfa-düz kas aktin ve desmin ekspresyonu arttı, bu da aktif Ito hücrelerinin in vitro büyümesinin bir ara aşaması olan miyofibroblastlarla fenotipik benzerliklerini gösterir. Verilerimiz, Ito hücreleri tarafından salgılanan parakrin faktörlerinin kültürdeki MMSC'lerin özellikleri üzerindeki etkisini göstermektedir.

Hematopoietik kök hücrelerin Ito hücreleri ile birlikte yetiştirilmesine dayalı olarak, hematopoietik kök hücrelerin yalnızca Ito hücreleri ile temas halinde birlikte yetiştirilmesi durumunda canlı kaldığı gösterilmiştir. Karışık kültürlerin floresan analizine göre, farklı popülasyonlardan hücrelerin füzyon fenomeni ortaya çıkmadı.

Sonuçlar. Hematopoietik kök hücrelerin canlılığını korumak için, Ito hücreleri ile doğrudan hücreler arası temasın varlığı belirleyici bir faktördür. Parakrin düzenlemesi, yalnızca MMSC'ler, Ito hücrelerinin büyüdüğü bir besin ortamında yetiştirildiğinde not edildi. İto hücreleri tarafından üretilen spesifik faktörlerin hücre kültüründe HSC'lerin ve MMSC'lerin farklılaşmasına etkisinin araştırılmasının gelecekteki çalışmalarda yapılması planlanmaktadır.

Shafigullina A.K., Trondin A.A., Shaikhutdinova A.R., Kaligin M.S., Gazizov I.M., Rizvanov A.A., Gumerova A.A., Kıyasov A.P.
SEI HPE "Federal Sağlık ve Sosyal Kalkınma Ajansı Kazan Devlet Tıp Üniversitesi"