Minimalna inhibitorna koncentracija. Metode za određivanje osjetljivosti na antimikrobna sredstva. Minimalna inhibitorna koncentracija (MIC). Metoda serijskog razrjeđivanja u tekućim medijima Minimalna inhibicija

(MIC) - minimalna inhibitorna (supresivna) koncentracija - najniža koncentracija antibiotika koja inhibira vidljivi rast ispitivanog mikroorganizma in vitro(u hranjivim medijima bujona ili agara) u standardnim eksperimentalnim uvjetima i izražava se u µg/ml (mg/l) ili jedinicama/ml.

Minimalna baktericidna koncentracija (MBK) - najniža koncentracija antibiotika koja pri testiranju in vitro uzrokuje smrt 99,9% mikroorganizama od početne razine u određenom vremenskom razdoblju.

Osjetljiv mikroorganizam - soj mikroorganizma koji nema mehanizme rezistencije na ovaj lijek. Njegov na hranjivoj podlozi se zaustavlja kada se koristi antibiotik u terapijskoj dozi.

Srednje otporan mikroorganizam - soj mikroorganizma, čiji rast na hranjivoj podlozi prestaje tek kada se antibiotik koristi u najvišoj dozi. Liječenje infekcija uzrokovanih umjereno rezistentnim mikroorganizmima provodi se u nedostatku alternativnih lijekova, najvišom (maksimalnom terapijskom) dozom antibiotika.

Otporni mikroorganizmi - soj mikroorganizma koji ima mehanizme otpornosti na ovaj lijek. Njegov rast na hranjivoj podlozi prestaje tek pri uporabi vrlo visokih koncentracija lijeka, koje se zbog visoke toksičnosti ne mogu stvoriti u tijelu. U liječenju infekcija uzrokovanih ovim mikroorganizmom, klinički učinak iz terapije izostaje čak i kod primjene najveće doze antibiotika. U isto vrijeme, može biti nuspojave antibiotik.

Indikacije za određivanje osjetljivosti mikroorganizama na antibiotike:

1) određivanje osjetljivosti na novi antibiotik preporučen za uporabu;

2) periodično praćenje rezistencije na antibiotike kod pojedinca medicinski centri iu različitim geografskim regijama za praćenje širenja otpornosti na antibiotike;

3) obrazloženje adekvatne antibiotske terapije kod pojedinih bolesnika u sljedećim slučajevima:

a) izolacija mikroorganizama iz prvenstveno sterilnih tekućina, ljudskih organa i tkiva;

b) kod izolacije mikroorganizama iz primarno nesterilnih biotopa, procjeni osjetljivosti treba prethoditi procjena kliničke važnosti izoliranog mikroorganizma;

c) infekcije rezistentne na lijekove empirijska terapija;

d) jedinstvene infekcije i nedostatak iskustva u njihovoj terapiji;

e) infekcije koje zahtijevaju produljenu terapiju (svaki tjedan terapije utvrđuje se rezistencija na antibiotike, jer je moguća promjena uzročnika).

Određivanje osjetljivosti mikroorganizama na antibiotike je nepraktično:

1) za zastupnike normalna mikroflora ljudi, kada su izolirani od prirodnih staništa;

2) za vrste mikroorganizama kod kojih nisu opisani rezistentni oblici na pojedine antibiotike. Na primjer, Streptococcus pyogenes je osjetljiv na penicilin, pa nije praktično provoditi test osjetljivosti na te lijekove u svakodnevnoj praksi.

Kriteriji za antimikrobno djelovanje lijeka su minimalna inhibitorna koncentracija(IPC) i minimalna baktericidna koncentracija(MBK). MIK je najniža koncentracija antibiotika koja in vitro potpuno potiskuje vidljivo rast bakterija. Izražava se u mg/l ili µg/ml. MBC je najniža koncentracija antibiotika koja uzrokuje baktericidni učinak. Za određivanje je potrebno inokulirati iz epruveta (vizualno nema rasta) na gusti hranjivi agar koji ne sadrži antibiotik. Ovaj pokazatelj ima veliku klinički značaj. Na temelju metode serijskih razrjeđenja stvorene su mikrometode koje podrazumijevaju korištenje manjeg volumena hranjive podloge. Trenutno su dostupni brojni komercijalni setovi za ovu vrstu istraživanja, koji se sastoje od osušenih, stabiliziranih otopina antibiotika, koji su razrijeđeni testnom suspenzijom mikroba. Ovi se kompleti mogu pohraniti u normalnim uvjetima, čime se eliminira potreba za pripremom razrjeđenja medija i antibiotika u laboratoriju. Još jedna prednost mikrodilucijskih testova je ta što su uključeni u automatizirani sustav.

Na temelju dobivenih podataka (promjer zone usporenog rasta ili vrijednost IPC) mikroorganizme dijelimo na osjetljive, srednje rezistentne i rezistentne. Za razlikovanje ovih kategorija koriste se takozvane granične koncentracije antibiotika koje nisu konstantne vrijednosti. Oni se revidiraju kako se osjetljivost populacije mikroorganizama mijenja. U izradi i reviziji kriterija tumačenja angažirani su vodeći stručnjaci (kemoterapeuti, mikrobiolozi) koji su članovi posebnih povjerenstava. Jedan od njih je Nacionalni odbor za kliničke laboratorijske standarde ( N acionalan C povjerenstvo za C klinički L aboratorij S tandards - NCCLS), organiziran u SAD-u. Trenutno se NCCLS standardi koriste kao međunarodni standardi za procjenu rezultata određivanja osjetljivosti bakterija u multicentričnim mikrobiološkim i klinička istraživanja.

Određivanje osjetljivosti bakterija na antibiotike

Kriterij za osjetljivost mikroorganizama na antibiotike je minimalna inhibitorna koncentracija (MIC) ili minimalna inhibitorna koncentracija (MIC) antibiotika koja usporava rast uzročnika u standardnim eksperimentalnim uvjetima.

Za utvrđivanje rezistencije na lijekove koristi se dnevna čista kultura uzročnika izolirana iz organizma bolesnika, te standardna hranjiva podloga (AGV ili Muller-Hinton agar) za njegovu inokulaciju.

Određivanje osjetljivosti mikroorganizama na antibiotike provodi se metodom difuzije diska ili metodom serijskih razrjeđenja antibiotika u tekućim ili čvrstim medijima.

Disk difuzijska metoda

Određivanje osjetljivosti na antibiotike metodom papirnatih diskova temelji se na difuziji antibiotika u hranjivi medij. Koncentracija antibiotika u diskovima je odabrana tako da promjeri zona inhibicije rasta standardnih test mikroorganizama odgovaraju međunarodnim standardima. Ova koncentracija odgovara prosječnoj terapijskoj dozi za standardne sojeve mikroorganizama.

Pripremljena suspenzija mikroorganizama inokulira se na površinu posebne podloge (AGV ili Mueller-Hinton agar) u Petrijeve zdjelice. Zatim se sterilnom pincetom na zasijanu površinu postavljaju standardni papirnati diskovi impregnirani otopinama raznih antibiotika na jednakoj udaljenosti jedna od druge, od rubova i središta posude (možete koristiti i posebne uređaje i dozatore). Zasađene čašice drže se u termostatu na temperaturi optimalnoj za rast ispitivanih bakterija. Ako su bakterije osjetljive na ovaj antibiotik, tada se oko diska formira zona inhibicije rasta. Promjer zone inhibicije rasta odgovara stupnju osjetljivosti proučavanog mikroorganizma na ovaj antibiotik. Konačni rezultat ocjenjuje se prema posebnim tablicama, koje označavaju promjere zona inhibicije rasta standardnih kultura, osjetljivih, otpornih i srednje otpornih.

Disk metoda ne daje pouzdane podatke za određivanje osjetljivosti mikroorganizama na polipeptidne antibiotike koji slabo difundiraju u agar (primjerice, polimiksin, ristomicin). Također, ova metoda ne dopušta određivanje minimalne inhibitorne koncentracije antibiotika.

U principu, ovaj postupak je sličan određivanju MIK u tekućem mediju. Nekoliko Petrijevih zdjelica se priprema s postupnim razrjeđenjima antibiotika otopljenog u danom mediju. Doda se otopljeni agar, zdjelice se ohlade da se agar skrutne. Kulture jedne ili više bakterija iscrtavaju se po površini podloge i nakon inkubacije u termostatu potrebno vrijeme određuju minimalnu koncentraciju antibiotika pri kojoj je rast bakterija inhibiran. Jedna od prednosti ove metode u odnosu na metodu titracije u tekući medij je to različitim područjima može se posijati ista čašica različiti tipovi ili bakterijskih sojeva. Kao rezultat toga, MIC vrijednosti za nekoliko bakterija mogu se odrediti u jednom eksperimentu (slika 2.2).

ODREĐIVANJE AKTIVNOSTI ANTIBIOTIKA

METODA AGAR DIFUZIJE
Ova metoda se koristi za određivanje koncentracije antibiotika u otopini. Sastoji se od sljedećeg. Diskovi filtar papira navlaženi ispitivanom otopinom antibiotika stavljaju se na površinu agar medija koji sadrži razrijeđenu suspenziju bakterija. Nakon odgovarajuće inkubacije, površina agara, koja je u početku bila prozirna, postaje mutna zbog raspršivanja svjetlosti od strane uzgojenih bakterija. Prozirne zone ostaju samo oko diskova filter papira, jer antibiotik difundira u agar i inhibira rast bakterija. Ako se promjer ovih zona odredi pod strogo standardnim uvjetima, tada će on biti funkcija logaritma koncentracije antibiotika. Koristeći poznate koncentracije antibiotika, konstruira se standardna krivulja iz koje se može odrediti koncentracija antibiotika u nepoznatim otopinama (slika 2.3). Ponekad se umjesto diskova filter papira koriste mali šuplji cilindri koji se postavljaju na površinu agar medija i sadrže otopinu antibiotika.

ČIMBENICI KOJI UTJEČU NA DEFINICIJU

DJELOVANJE ANTIBIOTIKA
Djelovanje antibiotika in vitro ovisi o uvjetima određivanja (tablica 2.1). Na određivanje aktivnosti utječu čimbenici kao što su sastav podloge, gustoća inokuluma, broj bakterijskih stanica u inokulumu (veličina inokuluma).

Tablica 2.1. Čimbenici koji utječu na određivanje antibiotske aktivnosti
ispitni organizam
Srednji sastav (pH, ioni, serum, antagonisti)
Veličina i gustoća inokuluma (heterogenost populacije, mehanizmi inaktivacije, ulazak antagonističkih tvari)
Uvjeti inkubacije (vrijeme, temperatura, prozračivanje)
A. SASTAV OKOLIŠA
Razmotrimo, kao primjer, antibiotik koji inhibira biosintezu jedne od aminokiselina. Ako se antibiotik testira u mediju bez ove aminokiseline, čini se da ima vrlo visoku aktivnost, drugim riječima, nizak MIK. Kada se testira u mediju koji sadrži aminokiselinu čiju sintezu inhibira i koju bakterija može dobiti iz medija, antibiotik će se činiti neaktivnim.
Osim ovih specifičnih učinaka, često postoje manje specifični učinci na okoliš koji nisu izravno povezani s mehanizmom djelovanja ili kemijskom strukturom antibiotika. Jedan posebno zanimljiv slučaj je prisutnost seruma u mediju. Unosi se u medij tijekom određivanja MIK-a kako bi se stvorila fiziološka stanja slična onima u krvi. Mnogi se antibiotici vežu za proteine u serumu (osobito albumin) i kao rezultat toga smanjuje se broj slobodnih molekula antibiotika koje mogu ući u bakterijske stanice. Vezanje antibiotika na serumske proteine obično je u korelaciji s lipofilnošću određenih supstituenata u njegovoj molekuli.
Očito je da se uvjeti za određivanje MIK u tekućem mediju razlikuju od onih u gustom mediju, makar samo zato što je agar prisutan u gustom mediju. Agar koji sadrži S03-rpyn-py može adsorbirati antibiotik, mijenjajući njegov kapacitet difuzije, ili adsorbirati otopljeni kisik i neke komponente hranjivog medija. Stoga ne iznenađuje da MIC vrijednost antibiotika za određenu bakteriju ovisi o tome je li određena u tekućem ili čvrstom mediju, čak i ako su dva medija, osim prisutnosti ili odsutnosti agara, identičnog sastava. Također se mora imati na umu da se fiziologija stanica može razlikovati ovisno o tome rastu li pojedinačno u tekućini ili kao kolonije na površini čvrstog medija.
pH medija ima vrlo jak utjecaj na djelovanje antibiotika. Osim sekundarnih učinaka, poput utjecaja pH na brzinu rasta mikroorganizama i, posljedično,
Međutim, neizravan učinak na njihovu osjetljivost, pH vrijednost ima vrlo jak i izravan učinak na sposobnost lijeka da prodre u bakterijsku stanicu. Na primjer, tvari u neioniziranom obliku bolje difundiraju kroz staničnu stabljiku i plazma membranu nego tvari u ioniziranom obliku. Dakle, pH medija, određujući stupanj ionizacije bazičnog ili kiselog antibiotika, može izravno utjecati na brzinu njegovog prodiranja u bakterije i, posljedično, na njegovu učinkovitost.
B. GUSTOĆA I VELIČINA BAKTERIJSKOG INOKULUMA
Gustoća inokuluma je broj inokuliranih bakterija u odnosu na volumen u kojem rastu. Obično se izražava kao broj stanica u 1 ml kulture. Veličina inokuluma - ukupni broj inokulirane bakterije. Varijacije u gustoći uobičajeno korištenog inokuluma (103-106 bakterija/mL) ne utječu na MIC mnogih antibiotika. Doista, čak i pri vrlo niskim koncentracijama antibiotika, na primjer, 0,01 µg/ml, omjer broja molekula antibiotika prema broju bakterijskih stanica ostaje vrlo velik (~1012 molekula). Međutim, postoje neke iznimke. Na primjer, često se mnogo molekula antibiotika adsorbira na vanjskoj površini bakterijske stanice. Ako je gustoća bakterija velika, broj slobodnih molekula antibiotika koje mogu ući u stanicu znatno se smanjuje. Osim toga, često je potrebno suzbiti rast jedne stanice veliki broj molekule antibiotika. Kako bakterije rastu, one sintetiziraju i otpuštaju u medij enzime koji mogu uništiti antibiotik (na primjer, p-laktamaze koje djeluju na p-laktamske antibiotike; vidi Poglavlje 4). Količina uništenog antibiotika je funkcija koncentracije enzima u hranjivom mediju i stoga ovisi o veličini inokuluma.
Na prvi pogled se čini da ako je gustoća kulture bakterija ista, nije važno proučava li se aktivnost antibiotika u malim volumenima, na primjer 0,25 ml ili manje u minijaturiziranim sustavima, ili u volumenu od 10 ml u konvencionalnim laboratorijskim epruvetama. Ako su sve bakterije u populaciji identične, neće biti razlike u rezultatima.
Kada je ukupni broj bakterija u inokulumu vrlo visok, veća je vjerojatnost da će u mediju biti prisutne stanice manje osjetljive na antibiotik. Rast svih osjetljivih stanica bit će potisnut, međutim, manje osjetljive stanice (u principu to može biti čak i jedna stanica) će se razmnožavati, a nakon inkubacije od 18 sati,

Tablica 2.2. Čimbenici koji utječu na djelovanje nekih antibiotika

populacija bakterija velike gustoće. Značajna varijabilnost vrijednosti MIK s promjenom broja inokuliranih stanica obično ukazuje na visoku učestalost mutanata otpornih na antibiotike (poglavlje 4). Učestalost pojave rezistentnih mutanata nije ista za različite antibiotike. U slučaju antibiotika koji se koriste u klinici, kreće se od 10-7 do 10-10.
Ovaj odjeljak opisuje daleko od svih čimbenika koji mogu utjecati na aktivnost antibiotika protiv određene bakterije (tablica 2.2). Stoga, kako bi se pomoću supresije rasta bakterija kvantificirala aktivnost antibiotika i dobili podaci koji se mogu replicirati u različitim laboratorijima, potrebno je da svi uvjeti budu precizno definirani i, ako je moguće, standardizirani.

minimalna inhibirajuća koncentracija- minimalna inhibitorna koncentracija.

Pokazatelj djelovanja antibiotika na bakterijsku kulturu jednak je njegovoj minimalnoj koncentraciji pri kojoj dolazi do potpune inhibicije rasta bakterija.

(Izvor: "Englesko-ruski eksplanatorni rječnik genetičkih pojmova". Arefiev V.A., Lisovenko L.A., Moskva: Izdavačka kuća VNIRO, 1995.)

- minimalna koncentracija dezinficijensa koja uzrokuje potpunu smrt standardnih test sojeva bakterija u suspenziji ili na površini nosača u kratkom vremenu ...
Mikrobiološki rječnik
- minimalna koncentracija kemoterapeutske ili antiseptičke tvari koja uzrokuje potpunu supresiju rasta određenog mikroorganizma vidljivu golim okom na podlozi u standardnim eksperimentalnim uvjetima ...
Mikrobiološki rječnik
- Minimalna koncentracija sredstva za gašenje požara u zraku, pri kojoj se opaža gašenje difuzijskog plamena n-heptana u uvjetima standardnog pokusa. Izvor: GOST 4...
Rječnik za hitne slučajeve
- logično sustav koji je slabljenje konstruktivne logike i intuicionističke logike zbog isključenja iz broja postulata načela "svaka rečenica slijedi iz proturječja" ...
Filozofska enciklopedija
- Vidi jadni...
Projektivni filozofski rječnik
- najmanja vrijednost dobiti potrebna da se poduzeće spasi, nastavi s radom, spriječi propast...
Ekonomski rječnik
- minimalna vrijednost dobiti potrebna da se poduzeće spasi, nastavi s radom, spriječi kolaps ...
enciklopedijski rječnik ekonomije i prava
- čestica jezgre, minimalni nukleosom - čestica jezgre, jedinica za pakiranje DNK koja stabilno postoji tijekom formiranja nukleosomske strukture i uključuje 146 parova baza i oktamer jezgre histona ...
Molekularna biologija i genetika. Rječnik
- vidi Prag koncentracije ...
Velik medicinski rječnik
- najniža koncentracija volumetrijskih sredstava za gašenje u zraku, koja osigurava trenutačno gašenje difuzijskog plamena tvari u uvjetima pokusa. Izvor: "Kuća: Građevinska terminologija", M.: Buk-press, 2006...
Građevinski rječnik
- najniža koncentracija otrova u objektima okoliša, uzrokujući narkotično stanje u 50% pokusnih životinja. Označeno simbolom CN50...
Ekološki rječnik
- Početna margina. Iznos sredstava potreban za otvaranje jedne pozicije na tržištu izvedenica...
Rječnik poslovnih pojmova
Rječnik poslovnih pojmova
- Minimalni novčani iznos naveden u prospektu nove tvrtke koji se, prema mišljenju njenih direktora, mora mobilizirati kako bi tvrtka postala održiva ...
Financijski rječnik
- najmanja vrijednost dobiti potrebna za održavanje poduzeća.Na engleskom: Marginal profitVidi. Vidi također: Profit Break-enable Sale ...
Financijski rječnik
- logički sustav, koji je slabljenje intuicionističke logike i konstruktivne logike zbog isključenja iz broja postulata formule ⌉A ⊃ ...
Velika sovjetska enciklopedija

"minimalna inhibitorna koncentracija" u knjigama

Iz knjige Europski sustavi plaća Autor Ivanova Natalija Vladimirovna

2.1. Minimum plaća

Minimalna prilika

Iz knjige Poruka Carlosa Castanede. Susreti s Nagualom autor Torres Armando

50. Što znači koncentracija na unutarnje objekte i koncentracija na okolne objekte?

Iz knjige Tajne Kineska medicina. 300 pitanja o qigongu. autor Housheng Lin

50. Što znači koncentracija na unutarnje objekte i koncentracija na okolne objekte Ovisno o odabranom objektu razlikujemo unutarnju i vanjsku koncentraciju. Ako je pozornost usmjerena na a unutarnji organ ili područja, kao što je dan tian,

Minimalna reakcija na istrebljenje

Iz knjige Cionizam u doba diktatora autor Brenner Lenny

Minimalna reakcija na istrebljenje Čak i nakon Wiseove zakašnjele najave nacističke kampanje istrebljenja, reakcija establišmenta američkih Židova na tu vijest ostala je minimalna. Njegovi su čelnici slijedili poziv jednog od glavnih

Minimalna obrada

Iz knjige Kako povećati plodnost tla Autor Khvorostukhina Svetlana Aleksandrovna

Minimalna obrada Među vrtlarima i vrtlarima postoji mišljenje da kopanje tla dovodi do pogoršanja njegove strukture i smanjenja fizičkih i kemijskih svojstava. Oni zamjenjuju kopanje minimalnom obradom koja se sastoji u oblikovanju na površini

Minimalna moždana disfunkcija (MMD)

Iz autorove knjige

Minimalna moždana disfunkcija (MBD) skupna je dijagnoza koja uključuje skupinu različitih uzroka, mehanizama razvoja i kliničke manifestacije patološka stanja, ali podrazumijeva kršenje funkcije ili strukture mozga različitog podrijetla,

Minimalna logika

Iz knjige Velika sovjetska enciklopedija (MI) autora TSB

Minimalna konfiguracija

Iz knjige Bilježnica [tajne učinkovite uporabe] Autor Ptašinski Vladimir

Minimalna konfiguracija Prije nego što prijeđete na konkretne preporuke za odabir prijenosnog računala, potrebno je odrediti minimalnu razinu njegove konfiguracije.

Minimalni udio u kapitalu

Iz knjige Europa ne treba euro autor Sarrazin Thilo

Minimalni udio kapitala Minimalni udio kapitala kojim se upravlja rizikom prema Baselu 2 iznosi približno 4,5%. Taj bi se minimalni udio kapitala, prema Europskom nadzornom tijelu za bankarstvo, trebao povećati

Minimalna učinkovita doza od mikrovalova do sagorijevanja masti

autor Ferris Timothy

Minimalna učinkovita doza od mikrovalova do sagorijevanja masnoće Savršenstvo se postiže ne kada više nema što dodati, već kada više nema ništa za oduzeti. Antoine de Saint-Exupery, Planet ljudi (prev. N. Gal) Arthur Jones bio je prerano dijete i odgojen

Minimalna učinkovita doza

Iz knjige Savršeno tijelo u 4 sata autor Ferris Timothy

Minimalna učinkovita doza Definicija minimalne učinkovite doze (MED) je vrlo jednostavna: to je najmanja doza koja može dati željeni rezultat.

Minimalna učinkovita doza: Kako izgubiti 3% tjelesne masti u jednom satu mjesečno

Iz knjige Savršeno tijelo u 4 sata autor Ferris Timothy

Minimalna učinkovita doza: Kako izgubiti 3% tjelesne masti u jednom satu mjesečno Fleur B. Nisam imala toliko višak kilograma, poput Tracy, izgubiti ga. Kao i mnogi, Fleur se usprkos svemu jednostavno nije mogla riješiti zadnjih nekoliko kilograma viška masnog tkiva

Traka minimalne cijene

Iz knjige Prodaja treninga i seminara. Tajne praktičara koji zarađuju milijune Autor Parabellum Andrej Aleksejevič

Traka minimalne cijene Zatim ćemo govoriti o granici minimalne cijene ispod koje se glavna jedinica ne bi trebala prodavati. Savjetujemo vam da stavite glavnu jedinicu Prosječna cijena po regijama. Konkretno, cijena glavnog bloka naših terenskih obuka je otprilike 500

VEPOL - MINIMALNI TEHNIČKI SUSTAV

Iz knjige Kreativnost kao egzaktna znanost [Teorija inventivnog rješavanja problema] Autor Altshuller Heinrich Saulovich

8.2.3.13.1 Minimalne debljine redaka, slova i veličine fonta

Iz knjige Informacijska tehnologija POSTUPAK IZRADE KORISNIČKE DOKUMENTACIJE SOFTVERA Autor autor nepoznat

8.2.3.13.1 Minimalne debljine redaka, slova i veličine slova

Kriteriji za antimikrobno djelovanje lijeka su minimalna inhibitorna koncentracija(MIC) i minimalna baktericidna koncentracija(MBK). MIC je najniža koncentracija antibiotika koja potpuno inhibira in vitro vidljivo rast bakterija. Izražava se u mg/l ili µg/ml. MBC je najniža koncentracija antibiotika koja uzrokuje baktericidni učinak. Da bi se to odredilo, potrebno je izvršiti sijanje iz epruveta u kojima vizualno nema rasta, na gustom hranjivom agaru koji ne sadrži antibiotik. Ovaj pokazatelj je od velike kliničke važnosti. Na temelju metode serijskih razrjeđenja stvorene su mikrometode koje podrazumijevaju korištenje manjeg volumena hranjive podloge. Trenutno se proizvode brojni komercijalni setovi za ovakvu vrstu istraživanja, koji se sastoje od osušenih, stabiliziranih otopina antibiotika u hranjivom mediju, koji su razrijeđeni testnom suspenzijom mikroba. Ovi se kompleti mogu pohraniti u normalnim uvjetima, čime se eliminira potreba za pripremom razrjeđenja medija i antibiotika u laboratoriju. Još jedna prednost mikrodilucijskih testova je ta što su uključeni u automatizirani sustav.

Na temelju dobivenih podataka (promjer zone inhibicije rasta ili MIC vrijednosti) mikroorganizme dijelimo na osjetljive, srednje rezistentne i rezistentne. Za razlikovanje ovih kategorija koriste se takozvane granične koncentracije antibiotika koje nisu konstantne vrijednosti. Oni se revidiraju kako se osjetljivost populacije mikroorganizama mijenja. U izradi i reviziji kriterija tumačenja angažirani su vodeći stručnjaci (kemoterapeuti, mikrobiolozi) koji su članovi posebnih povjerenstava. Jedan od njih je Nacionalni odbor za kliničke laboratorijske standarde ( N acionalan C povjerenik za C klinički L aboratorij S tandards - NCCLS), organiziran u SAD-u. Trenutno se NCCLS standardi koriste kao međunarodni standardi za ocjenu rezultata određivanja osjetljivosti bakterija u multicentričnim mikrobiološkim i kliničkim studijama.

Određivanje osjetljivosti bakterija na antibiotike. Kriterij za osjetljivost mikroorganizama na antibiotike je minimalna inhibitorna koncentracija (MIC) antibiotika koja usporava rast uzročnika u standardnim eksperimentalnim uvjetima.

Određivanje osjetljivosti mikroorganizama na antibiotike provodi se metodom difuzije diska ili metodom serijskih razrjeđenja antibiotika u tekućim ili čvrstim medijima.

Disk difuzijska metoda. Određivanje osjetljivosti na antibiotike metodom papirnatih diskova temelji se na difuziji antibiotika u hranjivi medij. Koncentracija antibiotika u diskovima je odabrana tako da promjeri zona inhibicije rasta standardnih test mikroorganizama odgovaraju međunarodnim standardima. Ova koncentracija odgovara prosječnoj terapijskoj dozi za standardne sojeve mikroorganizama.

Metoda serijskog razrjeđivanja. Ovom se metodom određuje minimalna koncentracija antibiotika koja inhibira rast ispitivane bakterijske kulture (IPC, MIC). Da biste to učinili, prvo pripremite temeljnu otopinu koja sadrži određenu koncentraciju antibiotika (µg/ml ili IU/ml) u posebnom otapalu ili puferskoj otopini. Nadalje, sva sljedeća razrjeđenja u bujonu (u volumenu od 1 ml) pripremaju se iz glavne otopine, nakon čega se u svako razrjeđenje dodaje 0,1 ml ispitivane bakterijske suspenzije koja sadrži 10 6 -10 7 bakterijskih stanica po 1 ml. U posljednju epruvetu dodajte 1 ml bujona (bez antibiotika) i 0,1 ml bakterijske suspenzije (kontrola kulture). Usjevi se inkubiraju na 37 0 C do sljedećeg dana, nakon čega se bilježe rezultati pokusa na mutnoću hranjive podloge u usporedbi s kontrolom. Posljednja epruveta s prozirnom hranjivom podlogom ukazuje na usporavanje rasta proučavane bakterijske kulture, pod utjecajem minimalne inhibitorne (inhibitorne) koncentracije (MIC, MIC) antibiotika sadržanog u njoj. Za procjenu minimalne baktericidne koncentracije (MBC), sjetva se provodi na gustoj hranjivoj podlozi bez antibiotika iz epruveta bez rasta. MBC se uzima kao minimalna koncentracija antibiotika koja uzrokuje smrt mikroorganizma, što je karakterizirano odsutnošću rasta na Petrijevim zdjelicama s hranjivim medijem.

Metoda serijskih razrjeđenja antibiotika u agar mediju. U tom slučaju moguće je u jednom pokusu ispitati osjetljivost više kultura mikroorganizama na različite koncentracije određenog antibiotika. Različita razrjeđenja antibiotika pripremaju se u sterilnom agar mediju. Za to se doda potrebna količina početne otopine antibiotika, temeljito promiješa i izlije u sterilne Petrijeve zdjelice. Nakon što se agar skrutne, dno čaše se markerom podijeli izvana u sektore. Svaka proučavana kultura se sije pomoću bakteriološke petlje na određenom sektoru u posudama s različitim koncentracijama antibiotika. Sjetva proučavanih kultura na posude s različitim koncentracijama antibiotika može se obaviti pomoću aplikatora koji omogućuje sijanje 12-15 kultura u isto vrijeme po posudi. Zatim se posude stavljaju u termostat na temperaturu koja je optimalna za rast i razvoj proučavanih bakterija. Rezultati se uzimaju u obzir prisutnošću ili odsutnošću rasta bakterija u usporedbi s rastom na mediju u kontrolnoj zdjelici. Bakterije se smatraju osjetljivima na antibiotik u koncentraciji pri kojoj je njihov rast potpuno potisnut.

E-test metoda. Ova metoda kombinira prednosti metode serijskog razrjeđivanja i metode diska. Umjesto diskova koriste se trake ("ravnala") filter papira impregniranog antibiotikom, a na dnu trake koncentracija antibiotika bit će minimalna, a na "vrhu" - maksimalna. Trake se stavljaju na površinu hranjivog agara inokuliranog kulturom koja se proučava. Ako su bakterije osjetljive na djelovanje ovog lijeka, pojavljuje se elipsoidna zona inhibicije rasta oko područja trake koja sadrži njegove inhibitorne koncentracije. Brojčana vrijednost koncentracije antibiotika u dnu ove zone označava MIK tog antibiotika za taj usjev.

Do osjetljiv uključuju sojeve mikroorganizama čiji je rast inhibiran pri koncentracijama lijeka koje se nalaze u krvnom serumu pacijenta kada se koriste konvencionalne doze antibiotika.

Do umjereno stabilan uključuju sojeve čija inhibicija rasta zahtijeva koncentracije koje se stvaraju u krvnom serumu nakon primjene maksimalne doze droga.

održivi su mikroorganizmi čiji rast lijek ne suzbija u koncentracijama stvorenim u organizmu pri uporabi najvećih dopuštenih doza.

Test pitanja.

Definirajte pojam "antibiotici". Glavne skupine antibiotika ovisno o načinu dobivanja: prirodni, polusintetski, sintetski. Imenujte znanstvenika koji je razvio teoriju kemoterapije. Koja su svojstva presudna pri izboru kemoterapeutika? Što je kemoterapijski indeks, napišite njegovu formulu, što bi trebao biti? Navedite prve antispirohetalne lijekove; prvi antibakterijski lijek i ime znanstvenika koji ju je primio. Kako se zovu ruski znanstvenici koji su prvi otkrili antibakterijska svojstva zelene plijesni. Imenujte znanstvenika koji je proučavao antibakterijska svojstva gljive Penicillium i pokušao izolirati penicilin. Znanstvenici koji su prvi dobili pripravke penicilina. Proizvođači antibiotika - navedite primjere. Klasifikacija antibiotika prema porijeklu, kemijski sastav, prema spektru djelovanja. Mehanizam djelovanja antibiotika: mete (točke primjene antibiotika raznih skupina). Vrste djelovanja - baktericidno i bakteriostatsko; kako ih odrediti u pokusu in vitro? Antivirusni antibiotici, mehanizmi njihovog djelovanja. U kojim jedinicama se mjeri aktivnost antibiotika? uvjeti skladištenja antibiotika.

Imenovati i opisati moguće nuspojave uz antibiotsku terapiju. Definirajte pojam rezistencije mikroba na lijekove. Vrste rezistencije na lijekove. Prirodni i stečeni (primarni i sekundarni). Genetski mehanizmi rezistencije na lijekove: kromosomski i plazmidni. Fenotipski mehanizmi rezistencije na lijekove - nazvati i opisati. Racionalna uporaba antibiotika - navesti metode. Navedite lijekove - inhibitore enzima koji uništavaju antibiotike. Opišite metode za određivanje osjetljivosti mikroba na antibiotike.