Kumbso testas yra metodas laboratoriniai tyrimai daroma įtakojant hemagliutinaciją. Jis pagrįstas antikūnų jautrumu imunoglobulinams ir fermentų elementams, taip pat jų gebėjimu agliutinuoti eritrocitus, padengtus C3 arba Lg.

Tiesioginė Kumbso diagnozė

Naudojamas aptikti antikūnus arba komplemento komponentus, sumontuotus ląstelių išorėje. Tiesioginis Kumbso testas atliekamas šiais veiksmais.

Tokio testo naudojimas

Tiesioginė Kumbso diagnozė naudojama tam tikrais atvejais, pavyzdžiui:

• transfuzijos poveikis;
• autoimuninė hemolizė;
• vaistų sukelta hemolizinė anemija.

Netiesioginis Kumbso testas

Ši diagnostika leidžia aptikti antikūnus prieš ląsteles serume, kuris, kaip taisyklė, inkubuojamas su 0 tipo donoro eritrocitais, o tada atliekamas tiesioginis tyrimas. Taikykite netiesioginę Kumbso diagnostiką šiais atvejais:

Kaip pasiruošti analizei

Yra keletas pasiruošimo apklausai taisyklių.

1. Jei pacientas yra naujagimis, tėvai turėtų žinoti, kad tyrimai padės diagnozuoti HN (naujagimio hemolizinę ligą).
2. Jei pacientui kyla įtarimų dėl hemolizinės anemijos, jam reikia paaiškinti, kad analizė leis išsiaiškinti, ar ją sukėlė apsauginiai sutrikimai, vaistai ar kiti veiksniai.
3. Kumbso testas, tiesioginis ir netiesioginis, netaiko jokių mitybos ar mitybos apribojimų.
4. Būtina įspėti pacientą, kad tyrimui bus paimtas kraujas iš venos, taip pat pasakyti, kada tiksliai bus atlikta venų punkcija.
5. Taip pat reikėtų įspėti apie galimą diskomforto tikimybę rankos tvarstymo ir pačios procedūros metu.
6. Vaistus, kurie gali turėti įtakos mėginio rezultatui, reikia nutraukti.

Šie vaistai apima:

• "Streptomicinas";
• "Metildopa";
• "Prokainamidas";
• sulfonamidai;
• "Melfalanas";
• "chinidinas";
• "Rifampinas";
• "Izoniazidas";
• cefalosporinai;
• "Hidralazinas";
• "Chlorpromazinas";
• "Levodopa";
• "Tetraciklinas";
• "Difenilhidantoinas";
• "Etosuksimidas";
• "Penicilinas";
• mefenamo rūgštis.

Kraujo mėginiai imami ryte tuščiu skrandžiu.

Kaip vyksta renginys

Kumbso testas atliekamas tokia tvarka:

1. Atliekant diagnostiką suaugusiam pacientui, po venos punkcijos kraujas imamas į mėgintuvėlius su EDTA (etilendiaminotetraacetatu).
2. Iš naujagimio kraujas iš virkštelės paimamas į stiklinę su EDTA.
3. Dūrimo vieta spaudžiama medvilniniu tamponu, kol kraujavimas sustoja.
4. Atsiradus kraujosruvai venos punkcijos vietoje, skiriami šilti kompresai.
5. Po kraujo paėmimo pacientui leidžiama vėl vartoti abstinencijos vaistus.
6. Naujagimio tėvus reikia informuoti, kad anemijos dinamikai stebėti gali prireikti antrinės analizės.

Kumbso testo pranašumai

Toks tyrimas turi keletą privalumų, būtent:

Analizės trūkumai

Teigiamas Kumbso testas yra gana daug pastangų reikalaujantis tyrimo metodas, rodantis būdingą atlikimo tikslumą. Jį naudojant gali susidurti su tam tikrais sunkumais, ypač susijusiais su silpnai teigiamų poveikių interpretavimu.

Nustatyta, kad klaidingos neigiamos arba silpnai teigiamos reakcijos gaminant Kumbso mėginius gali būti nepatenkinamo aktyvaus ląstelių plovimo, antiglobulino reagento susilpnėjimo serumo likučiais, taip pat neriebios išvaizdos junginių, ant kurių gali atsirasti. antiglobulinas gali būti fiksuotas, tačiau praranda savo veiksmingumą.

Kumbso testas turi dar vieną trūkumą – žemą antiglobulino reagento stabilumą, kurio įsigijimas ir laikymas turi individualių savybių, dėl ko panašiai sunku skaitiniu būdu įvertinti antiglobulino serumo poveikį hemagliutinacijai.

Ligos, kurias galima nustatyti tyrimo metu

Kumbso diagnostika leidžia aptikti tam tikras ligas, tokias kaip:

• naujagimių hemolizinis negalavimas;
• įvairios transfuzijos reakcijos;
• autoimuninė hemolizė;
• medicininė hemolizinė anemija.

Iki šiol Kumbso testas laikomas gana populiaria kraujo tyrimo sistema tiek suaugusiam, tiek naujagimiui. Tai leidžia nustatyti daugybę skirtingų ligų.

AT pastaraisiais metais tarp pacientų įvairaus amžiaus padaugėjo kraujo ligų, joms diagnozuoti naudojami įvairūs metodai ir priemonės. Kumbso testas yra klinikinis tyrimas kraujo, o jo elgesio tikslas – nustatyti tam tikrus organizmus, keliančius grėsmę žmonių sveikatai.

Antikūnai gali prilipti ir rezultatas gali būti būklės pažeidimas Imuninė sistema. Tiesioginis Kumbso testas yra antiglobulino testas, kuris atliekamas norint aptikti antikūnus, pritvirtintus prie raudonųjų kraujo kūnelių paviršiaus.

Paprastai specialistai imasi antikūnų tyrimo šiais atvejais:

• Kraujo perpylimo poreikis. Iš mokyklinio anatomijos kurso žinoma, kad žmogus gali turėti vieną iš keturių kraujo grupių. Antiglobulino tyrimo atlikimas leidžia nustatyti kraujo perpylimo į kitą organizmą galimybę. Galima sakyti, kad pacientas gali tapti perpylimo donoru tik tada, kai jo kraujas atitinka paciento tipą, tai yra, jame yra tie patys antigenai. Jei paciento ir donoro antigenai skiriasi, imuninė sistema gali sunaikinti perpiltas ląsteles. To pasekmė gali būti rimtų ligų ir komplikacijų išsivystymas ir net mirtis. Būtent dėl ​​šios priežasties svarbus vaidmuo tenka rasti tinkamą kraujo rūšį, kai prireikia jį perpilti.
• Rh jautrinimo rizikos nustatymas. šiuolaikinė medicina apibrėžia Rh kaip antigeną, o visas jo apibrėžimas yra „Rh faktoriaus“ sąvoka. Kumbso testo dėka galima diagnozuoti antikūnų prieš Rh faktorių buvimą moterų kraujyje per. Jei būsimos motinos Rh faktorius yra neigiamas, o tėvas - teigiamas, būsimas vaikas gali paveldėti bet kurį iš jų. Jei negimusiam vaikui nustatomas teigiamas Rh faktorius, padidėja Rh jautrinimo rizika – tai kraujo ir motinos maišymosi procesas nėštumo ar gimdymo metu.

Jei yra nesuderinamumas tarp motinos ir vaiko grupės, tada imuninė sistema moteriškas kūnas pradeda suvokti vaisius kaip svetimą objektą ir daro jį visokius išpuolius. Dėl to gali išsivystyti sunki vaiko patologija, vadinama eritroblastoze. Kai kuriais atvejais, nesant efektyvus gydymas vaisiaus mirtis įvyksta gimdoje arba iškart po gimimo.

Kai kuriais atvejais Kumbso testas atliekamas autoimuninei hemolizei nustatyti.

Tokia liga yra gana reta ir pasireiškia savo kūno eritrocitų antigenų susidarymu.

Ekspertai išskiria dviejų tipų Kumbso pavyzdžius, kurių kiekvienas naudojamas konkretiems tikslams.

Tiesioginis testas. Tiesioginis tyrimas medicinos praktikoje dar vadinamas tiesioginiu antiglobulino tyrimu ir jo pagalba galima diagnozuoti ant paviršiaus prisirišusius antikūnus. Kai kuriais atvejais tokių antikūnų gamyba žmogaus organizme atsiranda dėl įvairių ligų progresavimo arba tokių antikūnų vartojimo. vaistai, kaip:

• Chinidinas
• metildopas
• Prokainamidas

Tokių antikūnų pavojus slypi tame, kad jie gali sukelti vystymąsi ir turėti destruktyvų poveikį. Kartais Kumbso testas naudojamas, kai reikia nustatyti patologijų, tokių kaip anemija ir, vystymosi priežastis.

Neigiamas Kumbso testas laikomas normaliu.

Netiesioginis testas. Dažnai ekspertai imasi netiesioginio Kumbso testo, kurio antrasis pavadinimas yra „netiesioginis antiglobulino testas“. Pagrindinis jo tikslas – aptikti antikūnus prieš raudonuosius kraujo kūnelius, esančius kraujo serume. Šio tyrimo dėka galima nustatyti, ar donoro kraujas sutampa su paciento krauju, jei reikia jį perpilti. Tokia analizė yra tam tikras suderinamumo testas, o dėl jo įgyvendinimo galima išvengti nepageidaujamos reakcijos į donoro kraują.

Paprastai toks tyrimas rekomenduojamas moterims per. Kai kurių motinų organizme gali būti tam tikros klasės antikūnų, kurie gali prasiskverbti per placentą į negimusio vaiko kraują. Tokio proceso rezultatas gali būti hemolizinė vaisiaus liga, taip pat įvairių vystymasis nėštumo metu.

Pasiruošimas procedūrai ir jos įgyvendinimas

Paprastai procedūra nereikalauja specialaus pasiruošimo, o ją galima atlikti bet kada.

Pasirengimas diagnostikai apima šiuos punktus:

• tuo atveju, jei analizė bus atlikta naujagimiui, tėvams turėtų būti paaiškinta, kad su jo pagalba bus galima diagnozuoti hemolizinę ligą
• kai įtariama, kad pacientas vystosi hemolizinė liga jam reikia paaiškinti, kad tokia analizė padės nustatyti jos vystymosi priežastis
• pasiruošimas analizei nereikalauja jokių maisto ir dietos apribojimų
• atliekant naujagimio analizę, tėvai turėtų būti informuojami, kad reikės paimti kraują iš venos, taip pat patikslinti procedūros laiką.
• būtina informuoti pacientą, kad uždėjus turniketą ir paimant kraują gali atsirasti diskomfortas
• vaistų vartojimas gali iškraipyti Kumbso testo rezultatus, todėl juos reikia atšaukti prieš atliekant tyrimą.

Atliekant tiesioginį Kumbso testą, kraujas imamas iš venos naudojant švirkštą. Prieš pradedant procedūrą atliekama kruopšti punkcijos vietos dezinfekcija, o paėmus medžiagą tyrimams pakoreguojama vata arba sterili marlė. Jei analizė atliekama naujagimiams, kraujas paimamas iš virkštelės.

Kai po kraujo paėmimo atsiranda hematoma, dūrio vietoje dedami šildantys kompresai. Po procedūros pacientas gali vėl vartoti vaistus.

Laboratorijoje gautas kraujas išvalomas ir lygiagrečiai atliekamas raudonųjų kraujo kūnelių atskyrimas.

Mėginį tiria specialistas, naudodamas įvairius serumus ir Kumbso reagentus, o ne žmogaus globulinus. Tuo atveju, jei eritrocitai nesulips ir nesivysto agliutinacija, galime kalbėti apie teigiamą rezultatą.

Procedūros metu gali atsirasti šių komplikacijų:

• vystymasis iš kraujo paėmimo vietos tyrimo metu
• galvos skausmas, galvos svaigimas ar alpimas
• kraujavimo po oda vystymasis
• prastai gydant odą antimikrobiniu būdu injekcijos vietoje, padidėja infekcijos patekimo į organizmą rizika

Tyrimo rezultatai

Dekodavimas – galimos ligos

At sveikas žmogus organizme nėra antikūnų prieš, tai yra, paprastai jų neturėtų būti. Jei tyrimas rodo teigiamą testą, tai gali reikšti, kad organizme yra antikūnų ant raudonųjų kraujo kūnelių.

Tokios patologinės būklės rezultatas gali būti raudonųjų kraujo kūnelių sunaikinimas ir dažniausiai išsivysto:

• su sisteminiu
• su mikoplazmos infekcija
• su infekcine mononukleoze
• sergant hemolizine naujagimio liga
• su vaistų sukelta hemolizine anemija
• su lėtine limfoleukemija
• su autoimunine hemolizine anemija
• su vaisiaus ir motinos kraujo nesuderinamumu

Tiesioginis Kumbso testas dažnai skiriamas moterims nėštumo metu, siekiant nustatyti motinos ir vaisiaus kraujo suderinamumą. Jei yra motinos ir negimusio vaiko organizmo nesuderinamumas dėl eritrocitų sukėlėjų, padidėja naujagimio hemolizinės ligos atsiradimo rizika.

Rh teigiamas vaikas Rh neigiamai moteriai sukelia Rh konflikto vystymąsi.

Esant tokiai patologijai, negimusio vaiko eritrocitus sunaikina motinos kūno antireusiniai kūnai. Patekę į moters organizmą vaisiaus raudonieji kraujo kūneliai stimuliuoja motinos imuninę sistemą, todėl vaisiui gaminasi antikūnai.

Naudingas vaizdo įrašas - hemolizinė anemija.

Tokių susidarymas motinos organizme sukelia kapiliarų agliutinacinę trombozę ir išeminę vaisiaus audinių nekrozę. Dėl eritrocitų hemolizės ir hemoglobino skilimo vaisiaus kūne susidaro toksiškos netiesioginės medžiagos. Staigus raudonųjų kraujo kūnelių kiekio sumažėjimas vaisiui dėl jų hemolizės sukelia tokios ligos kaip anemija vystymąsi vaikui.

Mažas bilirubino kiekis ir didelė koncentracija labai apsunkina ligos eigą. Nėštumo metu diagnozuojama daug komplikacijų, tokių kaip:

• persileidimo rizika
• kraujavimo vystymasis
• preeklampsija
• anemija
• priešlaikinis gimdymas

Antireusiniai kūnai saugo motiną, bet kartu kelia rimtą grėsmę besivystantis vaisius. Kumbso testo dėka galima laiku diagnozuoti tokią patologinę moters kūno būklę ir laiku paskirti gydymą. Be to, tokia analizė padeda nustatyti įvairias kraujo ligas, kurių progresavimas gali baigtis paciento mirtimi.

Antiglobulino testą, skirtą nepilniems anti-eritrocitų antikūnams aptikti, pasiūlė Coombs, Morant, Reis 1945 m., o vėliau jis buvo pavadintas Kumbso testu. Šio metodo esmė yra ta, kad antiglobulino serumas, kuriame yra antikūnų prieš žmogaus imunoglobulinus, reaguodamas su eritrocitais, įjautrintais nepilnais antikūnais, sukelia jų agliutinaciją.

Priklausomai nuo to, ar antikūnai yra fiksuoti raudonųjų kraujo kūnelių paviršiuje, ar laisvi kraujo plazmoje, naudojamas tiesioginis ar netiesioginis Kumbso testas.

Tiesioginis Kumbso testas atliekamas tais atvejais, kai yra pagrindo manyti, kad tiriami raudonieji kraujo kūneliai jau yra in vivo buvo įjautrinti atitinkamais antikūnais, t.y. pirmoji reakcijos fazė – antikūnų fiksacija eritrocitų paviršiuje – įvyko organizme ir vėlesnis antiglobulino serumo papildymas sukelia įjautrintų ląstelių agliutinaciją.

Naudojant netiesioginį Kumbso testą, tiriamame serume aptinkami nepilni antikūnai. Šiuo atveju reakcija vyksta dviem etapais. Pirmasis etapas – tiriamųjų eritrocitų inkubavimas su tiriamuoju serumu, kurio metu tiriamojo serumo mėginyje esantys antikūnai fiksuojami eritrocitų paviršiuje. Antrasis etapas yra antiglobulino serumo pridėjimas.

Iki šiol Kumbso testas buvo plačiai naudojamas laboratorinėje praktikoje imunopatologinių būklių diagnostikai, ypač autoimuninėms hemolizinėms anemijoms, kurioms būdingas eritrocitų sunaikinimas dėl surišimo. ląstelės membrana su antikūnais ir (ar) komplemento sistemos komponentais. Jo pagalba nustatomas Ig G (dažniausiai Ig G1 ir Ig G3) buvimas eritrocitų membranoje, kuris gali aktyvuoti komplementą, o kartais ir komplementą (C3d). Tačiau į ūminis laikotarpis ligos dėl eritrocitų naikinimo, kurios buvo fiksuotos didelis skaičius antikūnų, esant hemolizinei krizei, taip pat esant nepakankamam antikūnų kiekiui lėtinėje ligos eigoje, gali būti pastebėtas neigiamas tiesioginis Kumbso testas.

Reikia pabrėžti, kad netiesioginis Kumbso testas išlieka geriausias metodas individualus perpylimo terpės pasirinkimas, nes tai leidžia tiksliausiai nustatyti donoro ir recipiento individualų suderinamumą su eritrocitų antigenais.

Papildomas tiesioginis antiglobulino tyrimas autoantikūnams nustatyti rekomenduojamas tiriant visus organų ir audinių recipientus prieš transplantaciją ir kraujodaros kamieninių ląstelių recipientus taip pat po transplantacijos.

Be imunohematologijos ir transfuziologijos, antiglobulino tyrimai plačiai naudojami diagnozuojant daugybę patologinių būklių: sergant hematologinėmis ligomis, įskaitant limfoproliferacines, sisteminės ligos jungiamasis audinys, Sjogreno liga, lėtinė aktyvus hepatitas ir kt.

Kumbso testai aktyviai naudojami medicinos genetikoje ir teismo medicinoje, siekiant nustatyti paviršiaus eritrocitų antigenus.

Kumbso testas yra gana daug laiko reikalaujantis tyrimo metodas, kurio įgyvendinimas reikalauja ypatingo kruopštumo. Naudojant jį, kyla tam tikrų sunkumų, ypač susijusių su silpnai teigiamų reakcijų aiškinimu. Yra žinoma, kad klaidingai silpnos teigiamos arba neigiamos reakcijos atliekant Kumbso testus gali atsirasti dėl nepakankamai veiksmingo eritrocitų plovimo, antiglobulino reagento neutralizavimo serumo pėdsakais, taip pat kontakto su paviršiumi, ant kurio gali būti antiglobulino. fiksuota, praranda savo veiklą. Kitas Kumbso testo trūkumas – antiglobulino reagento nestabilumas, kurio paruošimas ir saugojimas turi tam tikrų ypatybių, dėl ko taip pat sunku kiekybiškai įvertinti hemagliutinacijos reakciją su antiglobulino serumu.

Be to, tyrimai, atlikti A. Holburn, D. Voak ir kt. , parodė, kad per didelis purtymas pakartotinai suspensuojant eritrocitų suspensiją gali būti klaidingai neigiamų rezultatų priežastis. Klaidingi rezultatai atliekant antiglobulino tyrimus taip pat gali būti dėl antiglobulino reagento antikomplementarinių antikūnų, ypač C3d, C3c, C4c ir C4d komplemento komponentų, kurie adsorbuojami ant tiriamųjų eritrocitų paviršiaus inkubacijos metu ir sukuria. teigiamo rezultato atsiradimas.

Šiuos trūkumus galima nesunkiai pašalinti kruopščiai nuplaunant tiriamuosius mėginius ir kontroliuojant reakcijos sąlygas.

Per pastarąjį dešimtmetį mažo joninio stiprumo izotoninis fiziologinis tirpalas (LISS) buvo naudojamas siekiant sumažinti netiesioginio Kumbso testo laiką ir jautrumą.

Neabejotinas antiglobulino testų pranašumas, pasak daugelio autorių, yra didelis jautrumas, kuris žymiai viršija skiriamąją gebą. alternatyvūs metodai testai, naudojami neagliutinuojantiems antikūnams aptikti.

Palyginome kraujo serumo tyrimo metodų skiriamąją gebą dėl nepilnų antikūnų, naudojant poligliuciną, želatiną ir antiglobulino serumą. Tyrimo metu nepilnų anti-D antikūnų titrai buvo stebimi 140 izoimuninių donorų kraujo serumo mėginių, naudojant želatinos, poligliucino ir netiesioginius antiglobulino tyrimus. Šių metodų aprašymas buvo atliktas pagal visuotinai pripažintus metodus.

Nustatyta, kad pagal jų skiriamąją gebą eritrocitų jautrinimo anti-D antikūnais nustatymo metodai yra išdėstyti taip: jautriausias yra netiesioginis Kumbso testas, po to – želatinos testas, mažiausiai informatyvus – poligliucino tyrimas. Šios eksperimentų serijos rezultatai visiškai atitinka literatūros duomenis, o tai leidžia daryti išvadą, kad Kumbso testų jautrumas yra pakankamai didelis, todėl galima labai tiksliai nustatyti anti-eritrocitų antikūnų buvimą. organizme, kurie nesukelia raudonųjų kraujo kūnelių agliutinacijos.

Tačiau Kumbso tyrimų praktikoje pasitaiko atvejų, kai nepilnų antikūnų neaptinkama, nors klinikinis ligos vaizdas ar ankstesnė imunizacija rodo galimą jų buvimą. Tokiais atvejais galima daryti prielaidą, kad antikūnų kiekio nepakanka, kad juos nusodintų antiglobulino serumo antikūnai.

Šią išvadą patvirtino ir mūsų pačių atliktas eksperimentas, kurio metu, taikant analitinės ląstelių mikroelektroforezės metodą, buvo nustatytas anti-D antikūnų buvimas ant tiriamųjų eritrocitų, kurių nebuvo aptikta atliekant netiesioginį Kumbso testą. Šioje eksperimentų serijoje antiglobulino serumas buvo dedamas į eritrocitus, prieš tai inkubuotus su serumais, gautais iš imunizuotų donorų kraujo, antikūnų genezės laikotarpiu kelyje, t.y. laikotarpiu, kai žinomi metodai, įskaitant Kumbso testą, juose neaptiko antikūnų.

Atliktų tyrimų metu įrodytas nepilnų antikūnų buvimas eritrocitų paviršiuje buvo statistiškai reikšmingas įjautrintų raudonųjų kraujo kūnelių elektroforetinio mobilumo pokytis, pridėjus antiglobulino serumo. Reikėtų pažymėti, kad vėliau netiesioginio Kumbso testo metu visų imunizuotų donorų kraujo serume buvo aptikti anti-D antikūnai.

Gillerand ir kt. taip pat parodė, kad antiglobulino testams būdingas tam tikras jautrumo slenkstis: teigiamas rezultatas pastebimas tik tada, kai vieno eritrocito paviršiuje yra fiksuota ne mažiau kaip 500 Ig G molekulių.

Be to, literatūroje yra įrodymų, kad galimas neigiamas Kumbso rezultatas gali būti dėl mažo antikūnų, kurie jautrina raudonuosius kraujo kūnelius, afiniteto, todėl jie lengvai išsiskiria iš raudonųjų kraujo kūnelių paviršiaus plovimo proceso metu. .

Atsižvelgiant į tai, kas išdėstyta pirmiau, galima daryti išvadą, kad kai kuriais atvejais neigiamas Kumbso testo rezultatas dar nėra įrodymas, kad eritrocitų paviršiuje nėra fiksuotų antikūnų.

Yra žinoma, kad Kumbso reakcijos yra labai specifinės ir leidžia aptikti daugumą neišsamių antikūnų tipų. Tačiau, kaip rodo kai kurie eksperimentiniai duomenys, antiglobulino testai gali būti teigiami ir neimunologinėmis sąlygomis. E. Muirhead ir kt. antrą dieną po fenilhidrazino skyrimo šunims Kumbso testas buvo teigiamas. Toks greitas teigiamos reakcijos atsiradimas liudija apie jos imunologinį pobūdį ir, veikiau, yra susijęs su nespecifine baltymo adsorbcija eritrocitų paviršiuje.

M. Williams ir kt. nustatė, kad klavulano rūgštis taip pat gali sukelti teigiamą reakciją, kuri, pasak autorių, yra susijusi su nespecifine plazmos baltymų adsorbcija eritrocitų paviršiuje. Panašus poveikis buvo pastebėtas gydant cefalosporinų grupės antibiotikais.

Minėtų tyrimų autoriai pabrėžia gautų teigiamų Kumbso testų rezultatų neimunologinį pobūdį ir tvirtina, kad šios medžiagos gali sukelti raudonųjų kraujo kūnelių membranų modifikaciją, dėl kurios eritrocitai gali adsorbuoti baltymus (ypač albuminas), kurie paprastai yra kraujo plazmoje ir neturi antikūnų savybių. Be to, gali būti, kad būtent ksenobiotikas, adsorbuotas ląstelės paviršiuje, yra ryšys tarp ląstelės membranos ir plazmos baltymų.

Norint teisingai interpretuoti antiglobulino tyrimų nustatymo rezultatus, taip pat reikia atsižvelgti į kiekybinį jaunų ir subrendusių eritrocitų santykį periferiniame kraujyje. Nustatyta, kad sustiprintos eritrono regeneracijos laikotarpiu iš organizmo išskirtus retikulocitus gali agliutinuoti antiglobulino serumas.

Teigiamas tiesioginio antiglobulino tyrimo rezultatas pasitaiko ir su įvairiais patologinės būklės lydi imuninės sistemos sutrikimai, uždegiminiai procesai dėl to skirtingo specifiškumo antikūnai nespecifiškai adsorbuojasi ant eritrocitų membranų. Tai rodo, kad Ig G molekulės nesąveikauja su specifiniais eritrocitų antigenais, o yra tik fiksuotos tiriamų ląstelių paviršiuje.

Reikėtų nepamiršti, kad nustatant Kumbso testą sergant ligomis, kurioms būdinga disproteinemijos išsivystymas arba paraproteinų atsiradimas, teigiamas rezultatas gaunamas dėl to, kad eritrocitų paviršiuje yra baltymų, kurie neturi antikūnų, o tai taip pat rodo nepakankamą antiglobulino tyrimų specifiškumą dėl jų pagalba aptikto baltymo pobūdžio.

Taigi, kaip rodo daugybė tyrimų, teigiami tiesioginių ir netiesioginių antiglobulino testų rezultatai nėra absoliutus antikūnų buvimo įrodymas, nes teigiamas reakcijas galima pastebėti ir esant įvairioms patologinėms būsenoms, nesusijusioms su organizmo izosensibilizacija ar autosensibilizacija. Todėl tik kelių imunoserologinių metodų rezultatų palyginimas su klinikiniu ligos paveikslu leidžia visapusiškai spręsti apie besivystantį patologinį procesą.

Teigiamas netiesioginis antiglobulino testas su neigiamu tiesioginiu testu dažniausiai rodo, kad tiriamajame serume yra laisvų aloantikūnų, susijusių su ankstesniais kraujo perpylimais ar nėštumu.

Kumbso testas dažnai būna teigiamas paūmėjus paroksizminei nakčiai hemoglobinurijai; teigiamas Kumbso testas su anti-C3 ir anti-C3dg yra šalto agliutinino ligos žymuo.

Tais atvejais, kai yra didelė rizika susirgti naujagimio hemolizine liga, tiesioginių ir netiesioginių antiglobulino tyrimų rezultatai turi didelę reikšmę diagnozei nustatyti (dažniausiai nėštumo metu) ir, jei reikia, dinaminiam išvaizdos ir pokyčių stebėjimui. antikūnų titre. Dažniausiai naujagimio hemolizinė liga siejama su motinos ir vaisiaus nesuderinamumu D antigenui, rečiau – AB0 sistemos antigenams, dar rečiau – kitiems antigenams (C, c, K ir kt.). Gauti antikūnai la, kaip taisyklė, yra nepilni Ig G klasės antikūnai, aiškiai aptinkami atliekant netiesioginį antiglobulino testą. Sergant šia liga, labai svarbus teisingai nustatytas aptiktų antikūnų titras ir specifiškumas, kadangi yra tam tikra koreliacija tarp antieritrocitų antikūnų kiekio nėščios moters kraujyje ir galima prognozė hemolizinės ligos sunkumas.

Taip pat reikalingas netiesioginis Kumbso testas klinikinė praktika siekiant užtikrinti saugią transfuzijos terapiją. Jo įgyvendinimas yra privalomas donorų ir įvairių kategorijų recipientų imunohematologinių tyrimų, taip pat visų gydymo įstaigų pacientų, kuriems gali prireikti kraujo ir jo komponentų perpylimo, įprastinių tyrimų komponentas.

Netiesioginis antiglobulino tyrimas naudojamas šiais atvejais:

Tikslesniam Rh priklausomybės (antigeno D) nustatymui su neaiškiais Rh faktoriaus nustatymo kitais metodais rezultatais (poligliucinu, želatina ir kt.);

Aptikti silpnus eritrocitų antigenus (Kell, Duffy, Kidd, Lewis ir kt. sistemas) ir antikūnus prieš šiuos antigenus;

Aloimuniniams anti-eritrocitų antikūnams, įskaitant antikūnus, sukeliančius hemolizines reakcijas po transfuzijos, aptikti ir identifikuoti;

Nustatyti AB0 sistemos imuninių antikūnų buvimą esant transfuzinėms hemolizinėms komplikacijoms;

Kaip suderinamumo testas, skirtas individualiam perpilto kraujo ir jo komponentų atrankai.

Taigi Kumbso testas yra svarbus diagnostinis testas, naudojamas įvairiose medicinos srityse (hematologijoje, akušerijoje, reumatologijoje, transfuziologijoje, klinikinėje ir laboratorinėje diagnostikoje ir kt.). Kumbso testo ypatybių žinojimas padės padidinti rezultatų patikimumą ir prisidės prie teisingo laboratorinių duomenų interpretavimo.

Literatūra

1. Antikūnai. Metodai / red. D. Cathy. - M.: Mir, 1991 m.

2. Bayramalibeyli I.E., Rahimov A.A., Gadžijevas A.B.. // Anemijos transfuzinė terapija: vadovėlis. vadovas gydytojams. - M .: Prakt. medicina, 2005. - S. 105-106.

3. Volkova O.Ya., Fregatova L.M., Levchenko L.B.// Transfuziologija. - 2006. - Nr.2. - S. 39-62.

4. Donskovas S.I.// Rezus sistemos kraujo grupės: teorija ir praktika. - M.: VINITI RAN, 2005. - S. 180-186, 195.

5.Imunoserologija ( reglamentas) / komp. A.G. Bashlay, S.I. Donskovas. — M.: VINITI RAN, 1998 m.

6.Kraujo sistemos tyrimai klinikinėje praktikoje / red. G.I. Kozintsa, V.A. Makarovas. — M.: Triada-X, 1997 m.

7. Levinas V.I. Į eritrodierezės ir eritropoezės mechanizmą ūminiu laikotarpiu pohemoraginė anemija: autoref. dis. …kandžio. medus. Mokslai. – Minskas, 1968 m.

8. Rahimovas A.A., Bairamalibeyli I.E.. // Anemijos diagnostikos, profilaktikos ir gydymo pagrindai. - M .: Rusijos Federacijos sveikatos apsaugos ministerijos GOU VUNMTs, 2002. - S. 204-209.

9. Chumakova E.D.. // Faktinės problemos hematologija ir transfuziologija: VI Baltarusijos Respublikos hematologų ir transfuziologų kongreso medžiaga, Minskas, 2007 m. gegužės 24-25 d. / red. A.I. Svirnovskis, M.P. Potapnevas. - Minskas: Respublikinis mokslinis ir praktinis hematologijos ir transfuziologijos centras, 2007. - P. 50.

10. Coombs R., Mourant A., Race R. // Lancetas. - 1945. - T. 2. - P. 15.

11. Freedmanas J. // J. Klinas. Pathol. - 1979. - T. 32. - P. 1014-1018.

12. Holburnas A.M. kokybės kontrolė. Hematologijos metodai / red. I. Cavill. - Edinburgas: Churchill Livingstone, 1982. - T. 4. - P. 34-50.

13. Khanas S.// CMAJ. - 2006. - T. 175, Nr. 8. - P. 919.

14. Komatsu F.// Nipponas Rinsho. - 2005. - T. 63 (7 priedas). - P. 719-721.

15. Komatsu F.// Nipponas Rinsho. - 2005. - T. 63 (7 priedas). - P. 716-718.

16. Molthanas L., Reidenbergas M.M., Eihmanas M.F.// Naujoji angl. J. Med. – 1976 m. — t. 277. - P. 123-125.

17. Muirhead E.E., GrovesM., Brianas S. // J. Lab. Clin. Med. – 1954 m. — t. 44. - P. 902-903.

18. Rosse W.F.//Hosp. Prac. - 1995. - N 105.

19. Voak D., Downie D., Moore'asb. ir kt. //Biotests Bull. - 1986. - T. 1. - P. 41-52.

20. Voak D., Haigh T., Downie D. ir kt. Ląstelių plovimo mašinos antiglobulino tyrimams. Pakartotinis bandymas – naujas metodas, parodantis vienos plačiai naudojamos mašinos – Sorvall CW1-AF2 – neefektyvumą: ataskaita DHSS technikos skyriui, 1991 m. vasario mėn.

21. Williamsas M.E., Thomas D., Harmanas C.P. ir kt. //Antimikrobiniai agentai ir chemoterapija. -1985 m. - P. 125-127.

22. Zarandona J.M., Yazer M.H. // CMAJ. - 2006. - T. 174, Nr. 3. - P. 305-307.

Medicinos naujienos. - 2008. - Nr. 3. - S. 33-36.

Dėmesio! Straipsnis skirtas medicinos specialistams. Šio straipsnio ar jo fragmentų perspausdinimas internete be hipersaito į pirminį šaltinį laikomas autorių teisių pažeidimu.

Paprastai kraujyje nėra antikūnų prieš eritrocitus.

Tiesioginis Kumbso testas – tai antiglobulino testas (gelio agliutinacija, leidžiantis aptikti pilnus dvivalečius antikūnus), kurio metu nustatomi IgG klasės antikūnai ir komplemento C3 komponentas eritrocitų paviršiuje. Paprastai tiesioginiu Kumbso testu aptikti antikūnai turi platų specifiškumą, nesusietą su nusistovėjusiu antigenu. Teigiamas tiesioginis Kumbso testas aiškiai rodo, kad pacientui yra hemolizinė anemija, nors ne visi pacientai, kurių tiesioginis antiglobulino testas teigiamas, serga šia liga. Maždaug 10% pacientų, kurių eritrocitų membranoje yra antikūnų ar komplemento komponentų, negalima aptikti tiesioginiu Kumbso testu (neigiamas testas), tačiau vis dėlto jie kenčia nuo autoimuninės hemolizinės anemijos. Norint išsiaiškinti antikūnų specifiškumą tokiais atvejais, naudojami jų eliuavimo testai. Tiesioginis Kumbso testas, teigiamas tik komplementui, paprastai siejamas su šalto tipo IgM antikūnais. Tokiu atveju IgM antikūnų ant eritrocitų nėra, kai bazinė temperatūra kūnas. Tačiau dėl to, kad IgM antikūnai aktyviai fiksuoja komplementą, o komplementas lieka ant eritrocitų, šios formos autoimuninės hemolizinės anemijos (šalto agliutinino ligos) atveju Kumbso testas bus teigiamas tik komplementui.

Tiesioginis Kumbso testas teigiamas esant autoimuninei hemolizinei anemijai, kurią sukelia šilti antikūnai, autoimuninei medikamentinei anemijai (vartojant metildopą, iki 20 proc. pacientų būna teigiama), hemolizinės anemijos vaistų adsorbcijos tipo, imunokompleksinės hemolizinės anemijos (žr. testas teigiamas tik dėl C3), su autoimunine hemolizine anemija, kurią sukelia peršalimo antikūnai – šalta agliutinino liga (testas teigiamas tik C3). Esant paroksizminei šaltai hemoglobinurijai, tiesioginis Kumbso testas yra neigiamas.

Netiesioginis Kumbso testas – netiesioginis antiglobulino testas (nustato nepilnus antikūnus) leidžia aptikti kraujyje netipinius antikūnus, įskaitant ir aloantikūnus, prieš svetimus eritrocitų antigenus. Jis gavo savo pavadinimą (netiesioginį) dėl to, kad vyksta 2 etapais. Iš pradžių paciento kraujo serumas, kuriame yra nepilnų antikūnų, sąveikauja su pridėtu korpuskuliniu Ag diagnosticum be matomų apraiškų. Antrame etape įvestas antiglobulino serumas sąveikauja su nepilnais antikūnais, adsorbuotais ant antigenų, ir susidaro matomos nuosėdos. Homologinių (alogeninių) raudonųjų kraujo kūnelių perpylimas arba nėštumas – dauguma dažnos priežastysšių anti-eritrocitų antikūnų susidarymas. Teigiamo netiesioginio Kumbso testo ir neigiamo tiesioginio testo derinys nieko nedaro autoimuninei hemolizinei anemijai diagnozuoti. Teigiamas netiesioginis Kumbso testas sukelia tam tikrų sunkumų parenkant kraują perpylimui ir kryžminį atitikimą su kauptu krauju, tačiau neturi kitos diagnostinės vertės.

Antikūnai esantis eritrocitų paviršiuje, gali būti tiek statinėje, tiek laisvoje būsenoje kraujo plazma. Priklausomai nuo antikūnų būklės, atliekama tiesioginė arba netiesioginė Kumbso reakcija. Jei yra pagrindo manyti, kad antikūnai yra fiksuoti raudonųjų kraujo kūnelių paviršiuje, atliekamas tiesioginis Kumbso testas. Šiuo atveju testas praeina vienu etapu – pridedamas antiglobulino serumas. Jei raudonųjų kraujo kūnelių paviršiuje yra nepilnų antikūnų, agliutinacija eritrocitai.

Netiesioginė reakcija

Netiesioginė Kumbso reakcija vyksta 2 etapais. Pirma, būtina dirbtinai įgyvendinti jautrinimas eritrocitai. Tam tiriami eritrocitai ir kraujo serumas yra inkubuojami, o tai sukelia antikūnų fiksaciją eritrocitų paviršiuje. Po to atliekamas antrasis Kumbso testo etapas - antiglobulino serumo pridėjimas.

kritulių reakcija - RP (iš Lat praecipilo į nuosėdas) yra tirpaus molekulinio antigeno komplekso su antikūnais susidarymas ir nusodinimas drumstumo pavidalu, vadinamasis. nuosėdos. Jis susidaro sumaišius antigenus ir antikūnus lygiaverčiais kiekiais, vieno iš jų perteklius sumažina imuninio komplekso susidarymo lygį. Nusodinimo reakcija dedama į mėgintuvėlius (žiedo nusodinimo reakcija), į gelius, maistines terpes ir kt. Plačiai naudojamos įvairios nusodinimo reakcijos pusiau skystame agaro arba agarozės gelyje, dviguba imunodifuzija pagal Ouchterlony, radžio imunodifuzija, imunoelektroforezė ir kt.

HLA tipavimas- pagrindinio žmogaus histokompatibilumo komplekso – ŽLA komplekso – tyrimas. Šis darinys apima 6 chromosomos genų sritį, koduojančią HLA antigenus, dalyvaujančius įvairiuose imuniniuose atsakuose.

Užduotys adresu HLA tipavimas gali būti labai įvairus – biologinis identifikavimas (HLA tipas paveldimas kartu su tėvų genais), polinkio į įvairių ligų, donorų atranka organų transplantacijai – šiuo atveju lyginami donoro ir recipiento audinių HLA tipo nustatymo rezultatai. ŽLA tipavimo pagalba nustatoma, kiek sutuoktiniai yra panašūs ar skiriasi audinių suderinamumo antigenais, siekiant diagnozuoti nevaisingumo atvejus.

ŽLA tipavimas siūlo ŽLA polimorfizmo analizė ir atliekama dviem metodais – serologiniu ir molekuliniu genetiniu. Klasikinis serologinis ŽLA tipavimo metodas yra pagrįstas mikrolimfocitotoksiniu testu, o molekuliniame – PGR (polimerazės grandininė reakcija).

Serologinis HLA tipavimas atliekama su izoliuotomis ląstelių populiacijomis. Pagrindinius histokompatibilumo komplekso antigenus daugiausia nešioja limfocitai. Todėl T limfocitų suspensija naudojama kaip pagrindiniai I klasės antigenų nešėjai, o B limfocitų suspensija – II klasės ŽLA antigenams nustatyti. Norint atskirti norimas ląstelių populiacijas iš viso kraujo, naudojamas centrifugavimas arba imunomagnetinis atskyrimas. Manoma, kad pirmasis metodas gali sukelti klaidingai teigiamus duomenis, nes tokiu atveju kai kurios ląstelės miršta. Antrasis metodas pripažintas specifiškesniu – tuo tarpu daugiau nei 95% ląstelių išlieka gyvybingos.

Bet pagrindas limfocitotoksiniam tyrimui atlikti HLA tipavimas yra specifinis serumas, kuriame yra antikūnų prieš įvairius HLA antigenų I ir II klasių alelinius variantus. Serologinis tyrimas leidžia nustatyti ŽLA tipą, tiriant, kuris iš serumų reaguoja su limfocitais, o kuris ne.

Jei tarp ląstelių ir serumo vyksta reakcija, ląstelės paviršiuje susidaro antigeno-antikūno kompleksas. Pridėjus tirpalo, kuriame yra komplemento, įvyksta lizė ir ląstelių mirtis. Serologinis ŽLA tipo nustatymo tyrimas vertinamas naudojant fluorescencinę mikroskopiją, siekiant įvertinti teigiamas (raudona fluorescencija) ir neigiamas (žalioji fluorescencija) reakcijas, arba fazinio kontrasto mikroskopiją, kad būtų galima nudažyti negyvų ląstelių branduolius. ŽLA tipavimo rezultatas gaunamas atsižvelgiant į sureagavusių serumų ir kryžmiškai reaguojančių antigenų grupių specifiškumą, citotoksiškumo reakcijos intensyvumą.

Serologinio gydymo trūkumai HLA tipavimas yra kryžminių reakcijų buvimas, silpnas antikūnų afinitetas arba maža ŽLA antigenų ekspresija, baltymų produktų nebuvimas daugelyje ŽLA genų.

Modernesni, molekuliniai metodai HLA tipavimas naudojami jau standartizuoti sintetiniai mėginiai, kurie reaguoja ne su leukocitų paviršiuje esančiais antigenais, o su DNR ir tiesiogiai nurodo, kokių antigenų yra mėginyje. Molekuliniams metodams gyvų baltųjų kraujo kūnelių nereikia, galima tirti bet kurią žmogaus ląstelę, o darbui pakanka kelių mikrolitrų kraujo arba galima apsiriboti burnos gleivinės gramdymu.

Molekulinė genetinė HLA tipavimas naudoja PGR metodą, kurio pirmas žingsnis – grynos genominės DNR gavimas (iš viso kraujo, leukocitų suspensijos, audinių).

Tada DNR mėginys nukopijuojamas – amplifikuojamas in vitro naudojant pradmenis (trumpą vienos grandinės DNR), būdingus konkrečiai HLA lokusas. Kiekvienos pradmenų poros galai turi būti griežtai papildantys unikalią seką, atitinkančią tam tikrą alelį, kitaip amplifikacija nevyksta.

Po PGR pakartotinio kopijavimo metu gaunama daug DNR fragmentų, kuriuos galima įvertinti vizualiai. Tam reakcijų mišiniai elektrolizuojami arba hibridizuojami ir, naudojant programą ar lentelę, nustatoma, ar įvyko konkretus amplifikavimas. ŽLA tipavimo rezultatas pateikiamas kaip išsami ataskaita genų ir alelių lygiais. Dėl naudojamų mėginių standartizacijos molekulinė HLA tipavimas tiksliau serologinis. Be to, ji suteikia daugiau informacijos (daugiau naujų DNR alelių) ir aukštesnį detalumo lygį, nes leidžia identifikuoti ne tik antigenus, bet ir pačius alelius, kurie nustato, koks antigenas yra ląstelėje.

imuninės lizės reakcija. Reakcija pagrįsta specifinių antikūnų gebėjimu sudaryti imuninius kompleksus su ląstelėmis, įskaitant eritrocitus, bakterijas, o tai sukelia komplemento sistemos aktyvavimą klasikiniu būdu ir ląstelių lizę. Iš imuninės lizės reakcijų dažniausiai naudojama hemolizės reakcija, o retai – bakteriolizės reakcija (daugiausia diferencijuojant cholerą ir į cholerą panašius vibrius).

hemolizės reakcija. Veikiant reakcijai su antikūnais, esant komplementui, drumsta eritrocitų suspensija virsta ryškiai raudonu skaidriu skysčiu - „lako krauju“ dėl hemoglobino išsiskyrimo. Nustatant diagnostinę komplemento fiksavimo reakciją (RCC), hemolizės reakcija naudojama kaip indikatorius: laisvo komplemento buvimui ar nebuvimui (susirišimui) patikrinti.

Vietinė hemolizės reakcija gelyje(Jerne reakcija) yra vienas iš hemolizės reakcijos variantų. Tai leidžia nustatyti antikūnus formuojančių ląstelių skaičių. Ląstelių, išskiriančių antikūnus – hemolizinus, skaičius nustatomas pagal hemolizės plokštelių skaičių, susidariusių agaro gelyje, kuriame yra eritrocitų, tiriamo limfoidinio audinio ląstelių suspensijos ir komplemento.

Imunofluorescencinis metodas

(RIF, imunofluorescencinė reakcija) – specifinio Ag (Ab) nustatymo metodas naudojant Ab (Ag), konjuguotą su fluorochromu. Jis pasižymi dideliu jautrumu ir specifiškumu. Jis naudojamas esant ekspresinėms d-ki infekcijoms. ligų (sukėlėjo nustatymas tiriamojoje medžiagoje), taip pat leukocitų antikūnų ir paviršinių receptorių bei žymenų nustatymui (imunofenotipui nustatyti), ir kitoms ląstelėms. Tiesioginis I. m. susideda iš patologinės medžiagos arba mikrobų, turinčių specifinių antikūnų, konjuguotų su fluorochromu, apdorojimas; vaistas nuplaunamas, kad būtų pašalinti neprisijungę antikūnai, ir tiriamas fluorescenciniu mikroskopu. Teigiamais atvejais aplink objekto periferiją atsiranda šviečiantis imuninis kompleksas. Kontroliuoti būtina, kad būtų išvengta nespecifinės liuminescencijos. At netiesioginis. Juos. pirmajame etape audinio pjūvis arba tepinėlis apdorojamas nefluorescuojančia specifine priemone, antrajame - liuminescencine priemone prieš to gyvūno -globulinus, kurie buvo naudojami pirmajame etape. Teigiamu atveju susidaro šviesos kompleksas, susidedantis iš Ar, Am prie jo ir Am prieš At (sumuštinis metodas). Be liuminescencinio mikroskopo, siekiant atsižvelgti į RIF ląstelių fenotipų nustatymo metu, lazerinis ląstelių rūšiatorius .

srauto citometrija- ląstelės, jos organelių ir joje vykstančių procesų parametrų optinio matavimo metodas.

Metodas apima lazerio spindulio šviesos sklaidos aptikimą, kai ląstelė praeina per ją skysčio srove, o šviesos sklaidos laipsnis leidžia susidaryti supratimą apie ląstelės dydį ir struktūrą. Be to, atliekant analizę atsižvelgiama į cheminių junginių, sudarančių ląstelę (autofluorescencija) arba įvestų į mėginį prieš srauto citometriją, fluorescencijos lygį.

Ląstelių suspensija, anksčiau pažymėta fluorescenciniais monokloniniais antikūnais arba fluorescuojančiais dažais, patenka į skysčio srautą, einantį per srauto ląstelę. Sąlygos parenkamos taip, kad ląstelės išsirikiuotų viena po kitos dėl vadinamųjų. hidrodinaminis purkštuko fokusavimas srove. Tuo metu, kai ląstelė kerta lazerio spindulį, detektoriai įrašo:

šviesos sklaida mažais kampais (nuo 1° iki 10°) ( šią savybę naudojamas ląstelių dydžiui nustatyti).

šviesos sklaida 90° kampu (leidžia spręsti apie branduolio / citoplazmos santykį, taip pat apie ląstelių nevienalytiškumą ir granuliuotumą).

fluorescencijos intensyvumas keliuose fluorescencijos kanaluose (nuo 2 iki 18-20) - leidžia nustatyti ląstelių suspensijos subpopuliacijos sudėtį ir kt.